飼料中沙門氏菌的快速檢測方法及預防措施

劉紅云 許世富 張莉 吳蕾 明文慶 蔡一杰 許曉靖

摘要? ? 本文介紹了近些年來飼料中沙門氏菌的檢測方法，并提出了預防飼料中沙門氏菌污染的措施，具體包括飼料原料選擇、生產加工過程的控制以及包裝、運輸、儲存、使用過程的控制等方面內容，以期為飼料安全生產提供參考。

關鍵詞? ? 飼料;沙門氏菌;快速檢測方法;預防措施

中圖分類號? ? S816.17? ? ? ? 文獻標識碼? ? A

文章編號? ?1007-5739（2020）14-0205-01

Abstract? ? This paper introduced the detection methods of Salmonella in feed in recent years， and put forward measures to prevent Salmonella contamination in feed， including the selection of feed materials， the control of production and processing， and the control of packaging， transportation， storage， and use processes，etc.， so as to provide a reference for the safe production of feed.

Key words? ? feed; Salmonella; rapid detection method; preventive measure

飼料行業(yè)是國民經濟中的重要行業(yè)，我國飼料年產量從2012年開始連續(xù)7年位居世界第一。為加強飼料質量安全監(jiān)管，國家發(fā)布了多項飼料標準。為幫助企業(yè)提高經濟效益和檢測水平，本文分析近些年涉及飼料中沙門氏菌的檢測方法，制定了飼料中沙門氏菌快速檢測方法——免疫色譜法。沙門菌屬（Salmonella）是指一大群革蘭氏陰性桿菌，其寄生于人類和動物腸道內，其生化反應和抗原構造相似，亦統(tǒng)稱為沙門桿菌。沙門氏菌一詞的由來是美國獸醫(yī)微生物和病理學家DANIEL ELMER SALMON首次從病豬中分離出豬霍亂沙門氏菌，為紀念他而以他的名字命名的。目前至少有67種 O抗原和2 000個以上血清型，所致疾病稱沙門菌病。

沙門氏菌是對人類和動物健康構成相當危害的一類致病菌，廣泛存在于自然界，對外界環(huán)境有一定的抵抗力，在養(yǎng)殖過程中，被污染的飼料和水源是其主要的傳染途徑。食用這些被沙門氏菌污染的飼料，家畜、家禽會中毒患病。

目前沙門氏菌國內外的檢測標準有《飼料中沙門氏菌的快速檢測方法 聚合酶鏈式反應》（GB/T 2864—2012）、《飼料中沙門氏菌測定 實時熒光PCR方法》（DB22/T 2052—2014）、《飼料中沙門氏菌的測定》（GB/T 1309—2018）、《飼料中沙門氏菌的檢測 EMA-PCR法》（DB41/T 1588—2018）、FDA（Food & Drug Administration）、AOAC（Association of Official Analytical Chemists）、FSIS（FOOD SAFETY AND INSPECTION SERVICE）、ISO、加拿大官方食品微生物分析方法等[1-2]。

1? ? 檢測方法

1.1? ? 傳統(tǒng)的沙門氏菌檢測方法

沙門氏菌傳統(tǒng)的檢測方法有5個不同階段或步驟：①前增菌;②選擇性增菌;③選擇性平板分離;④生化試驗，鑒定到屬;⑤血清學分型鑒定。沙門氏菌傳統(tǒng)檢測方法過程繁瑣、費時費力，檢測法全過程至少需要4～7 d，才能得出明確的診斷結果，在快速、敏感與特異性等方面有局限性。

1.2? ? 免疫學沙門氏菌檢測方法

該檢測方法原理是利用抗原-抗體反應的顯著特異性來鑒別細菌和血清學定型。目前的免疫學方法分為以酶標抗體（ELI-SA）、熒光抗體染色、同位素標記抗體為基礎的方法及其他多種以抗體為基礎的方法。ELISA法樣品制備過程縮短了時間，方法本身僅需約2 h。而微量板ELISA法因用到特殊的儀器——酶標儀，不利于基層監(jiān)管部門、飼料企業(yè)、養(yǎng)殖戶更好地了解飼料中沙門氏菌的污染情況。但是近幾年發(fā)展的免疫測試片，以經特異性抗體敏化的免疫色譜卡片為基礎，將增菌液劃線加到測試片上，可肉眼直接讀出結果。同時為了提高沙門氏菌檢測的準確率，在標記出推測新陽性的菌落后，加入確認反應片。免疫色譜卡片極易操作，且由于無需要特殊設備，很適合基層、中小企業(yè)的使用[3-4]。

1.3? ? 分子生物學檢測方法

PCR（聚合酶鏈式反應）技術的基本原理類似于DNA的天然復制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR由3個基本反應步驟（變性→退火→延伸）構成。PCR技術具有簡便、快速、敏感性高和特異性強的特點，尤其對基質復雜、培養(yǎng)困難的樣品，PCR具有與常規(guī)方法無法比擬的優(yōu)越性。但是PCR檢測費用高、易污染，對操作環(huán)境要求較高，不利于該技術的廣泛推廣。

1.4? ? 其他檢測方法

根據文獻資料，沙門氏菌的檢測技術還有電阻抗測定法、生物發(fā)光法、微量熱量測定法等。微量熱量測定法在建立參考溫譜圖時有一定難度;阻抗法所需時間過長;生物發(fā)光法需要專業(yè)儀器設備。

2? ? 預防沙門氏菌污染的措施

2.1? ? 飼料原料選擇

動物性飼料原料特別是魚類和血粉，因其含有豐富的營養(yǎng)成分，很容易滋生病菌引起腐敗，造成沙門氏菌的污染。

因此，為了防止魚粉和血粉變質，應快速加工處理。一般在不超過24 h內快速加工成魚粉，或者有冷藏設備的條件下迅速在低溫冷凍條件下儲存。生產血粉不宜用過夜的血液。嚴格控制動物性飼料的含水量。如發(fā)酵血粉含水量應控制在8%以下，且包裝材料要密封。餅粕、糠麩類植物性飼料用作載體的，也應嚴格控制其含水量。

2.2? ? 生產加工過程的控制

動物性飼料原料的加工過程中應控制好溫度、時間，確保加熱效果。掌握正確的發(fā)酵方法、溫度、時間，生產畜禽屠宰廢棄物飼料。厭氧發(fā)酵必須在密閉狀態(tài)下;發(fā)酵物中要添加足夠的糖類物質;必要時添加發(fā)酵活菌制劑。平時做好生產車間及生產設備的清潔衛(wèi)生和消毒工作。高溫加工處理后的“熟料”，不得與生料接觸，也不得用存放過生料的未經消毒的容器存放“熟料”。確保生產車間用水科學、衛(wèi)生，避免生產車間用水污染。

目前，許多飼料企業(yè)為防止飼料腐敗變質，在生產過程中加入防腐劑抗氧化劑。使用較多的是丙酸及其鹽類（丙酸鈣、丙酸鈉）、苯甲酸、山梨酸及其鹽類等，該類防腐劑對霉菌、需氧芽孢桿菌和包括沙門氏菌在內的革蘭氏陽性菌的抑菌效果較顯著。在使用過程中不能超劑量規(guī)范使用。例如丙酸添加量可為飼料總量的0.2%～0.4%。

2.3? ? 包裝、運輸、儲存、使用過程的控制

保證包裝密封，一般包裝分為內外2層，內層密封，外層耐磨。開封的飼料包裝袋應及時扎緊袋口。運輸過程中要防止包裝袋破損和日曬雨淋。倉庫必須通風、陰涼、干燥。袋裝飼料應堆放在木制托板上，不能直接堆放在地面上。堆放要規(guī)范，以利于降溫通風，料堆應與窗、壁之間保持一定的距離，控制好溫度和濕度。倉庫應定期清掃、消毒，防止發(fā)生霉變;做好防鼠、防蠅、防蟑等消殺工作。不宜在畜禽舍內堆放過多飼料，以免發(fā)生變質[5-6]。

3? ? 結語

作為最常見的食源性傳染病之一的沙門氏菌在動物的亞臨床感染可導致輕度腹瀉和生長緩慢，而嚴重的感染則會導致發(fā)病和死亡。飼料作為沙門氏菌的主要載體，提高快速檢測能力，對降低企業(yè)養(yǎng)殖成本、保證食品安全具有重要意義，同時做好危險控制點工作，確保飼料安全[7-8]。

4? ? 參考文獻

[1] 楊懷珍，牟亞，羅薇.食源性沙門氏菌的研究進展[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2016（7）：69-71.

[2] 金雪花，呂淑霞，張超，等.EMA-LAMP方法快速檢測鑒別副溶血性弧菌[J].微生物學雜志，2012（4）：6-12.

[3] 鄭鳴，鄭寶亮.食源性沙門氏菌PCR檢測體系的建立及評估[J].鄭州牧業(yè)工程高等專科學校學報，2010（1）：8-11.

[4] 郭耀東，韓曉江，張英華，等.沙門氏菌檢測的研究進展[J].農產品加工，2019（9）：75-78.

[5] 李惠靜.食品中沙門氏菌檢測現狀分析[J].現代食品，2019（9）：24-25.

[6] 章海通，邢家溧，傅曉，等.食品能力驗證中沙門氏菌的分離鑒定和分型[J].食品研究與開發(fā)，2018（20）：166-171.

[7] 佘靈順.基因芯片技術及其在食品檢測中的應用[J].現代食品，2018（7）：91-93.

[8] 賀奮義.沙門氏菌的研究進展[J].中國畜牧獸醫(yī)，2006（11）：91-95.