復(fù)合中草藥制劑對(duì)豬流行性腹瀉的治療效果研究

王亞欣,康艷梅,方心靈,劉國(guó)乾,張 君

(廣東科貿(mào)職業(yè)學(xué)院,廣東廣州 510430)

豬流行性腹瀉病毒（PEDV）可導(dǎo)致所有年齡段的豬出現(xiàn)急性或亞急性消化道疾病。豬流行性腹瀉（PED）首次在英國(guó)報(bào)道，之后幾十年對(duì)中國(guó)、韓國(guó)和越南在內(nèi)的亞洲國(guó)家養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。此外，2013年4月PED 在美國(guó)爆發(fā)，北美的養(yǎng)豬戶(hù)也遭受了毀滅性的經(jīng)濟(jì)損失（陳兵，2014）。豬在感染PEDV 后的主要臨床癥狀包括急性腹瀉、嘔吐、體重減輕和脫水。此外，與年齡較大的仔豬相比，哺乳仔豬的發(fā)病率更高，感染2 ～4 d 出現(xiàn)死亡，死亡率高于50%（陳兵，2014）。而目前的防治藥物效果不夠理想，因此，尋找預(yù)防或治療PED 的有效藥物具有重要意義。在中國(guó)，草藥多年來(lái)一直被用作抗菌劑，如魚(yú)腥草提取物對(duì)單純皰疹病毒1 型（HSV-1）、流感病毒、人類(lèi)免疫缺陷病毒1 型（HIV-1）和冠狀病毒都有療效（Lu 等，2006）。黃連中含有黃連素，黃連素是黃連的活性成分之一，具有較強(qiáng)的抗病毒、抑菌活性。此外，蒲公英、板藍(lán)根、黃芪和太子參等也具有抗菌、抗病毒的特性（Kim 等，2008）。因此，以上中草藥對(duì)治療PED 具有潛在功能。因此，本研究旨在研究中草藥混合提取物對(duì)感染PEDV仔豬的治療效果，以及對(duì)仔豬生長(zhǎng)性能和腸道形態(tài)的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 試驗(yàn)豬選自四川某豬場(chǎng)患病仔豬。

復(fù)合中草藥制劑由魚(yú)腥草、黃連、蒲公英、板藍(lán)根、黃芪和太子參提取物等比例組成，所有中草藥均購(gòu)買(mǎi)自重慶某中藥材公司。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 2019年3月23 日某豬場(chǎng)產(chǎn)下仔豬139 頭，3月25 日開(kāi)始個(gè)別化豬有拉稀癥狀，病豬精神沉郁，被毛粗亂，體溫39.5℃；3月26日部分仔豬出現(xiàn)嘔吐，急性腹瀉，排黃色和黃白色糞便，糞便粘附于肛口附近，仔豬扎堆。經(jīng)統(tǒng)計(jì)共有101 頭出現(xiàn)腹瀉癥狀，發(fā)病率為71.9%。之后檢測(cè)仔豬患PED 情況，在陽(yáng)性結(jié)果中選取100 只患病仔豬，隨機(jī)分為 4 組，試驗(yàn) 2、3、4 組分別添加0.4、0.8、1.2 g 的中草藥制劑于 5 mL 人工乳中進(jìn)行灌服，試驗(yàn)1 組灌服等體積人工乳，連續(xù)處理5 d，之后觀察3 d。試驗(yàn)期間乳豬自由飲水和采食人工乳，試驗(yàn)所用人工乳主要的營(yíng)養(yǎng)含量見(jiàn)表1。

表1 人工乳營(yíng)養(yǎng)水平

1.3 樣品采集及指標(biāo)測(cè)定

1.3.1 患病仔豬腹瀉診斷 PEDV 連續(xù)處理2 d 后，用拭子采集仔豬直腸糞便，用RT-PCR 試劑盒方法檢測(cè)PEDV 抗原，具體方法參考王風(fēng)等（2012）的研究。所用PEDV 引物序列為F：5’-gggcgcctgtatagagttta-3’，5’-agaccaccaagaa tgtgtcc-3’。檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，并伴隨腹瀉、精神不振等PED 典型癥狀的仔豬診斷為PEDV 感染成功。

1.3.2 患病仔豬使用中藥制劑后情況統(tǒng)計(jì) 中草藥制劑治療后，觀察仔豬精神狀態(tài)、腹瀉等情況，治療后停止腹瀉，精神及采食恢復(fù)，并且在觀察期內(nèi)未復(fù)發(fā)的仔豬判斷為治愈。記錄死亡和治愈數(shù)，計(jì)算治愈率及死亡率。

1.3.3 患病仔豬使用中藥制劑后生長(zhǎng)性能統(tǒng)計(jì)分別在中草藥處理前和處理結(jié)束時(shí)稱(chēng)量仔豬的空腹體重，計(jì)算中草藥處理期間的平均日增重（ADG）。

1.3.4 患病仔豬使用中藥制劑后生長(zhǎng)性能統(tǒng)計(jì)及小腸形態(tài)觀察 試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，仔豬饑餓12 h，每組分別隨機(jī)選取5 頭仔豬，用戊巴比妥鈉處死。剖開(kāi)腹腔分離并取下小腸中段，緩沖液沖洗后剪下一段（約3 cm）用組織固定液（10% 甲醛- 磷酸鹽緩沖液）固定。將固定的樣本進(jìn)行石蠟組織切片，染色后在顯微鏡下測(cè)量絨毛高度（VH）及隱窩深度（CD），并計(jì)算絨毛高度和隱窩深度比（V/C）。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì) 采用SAS 9.2 中的一般線性模型對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，采用Duncan’s 法進(jìn)行多重比較。結(jié)果以“平均值± 標(biāo)準(zhǔn)誤”表示，P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 復(fù)合中草藥制劑對(duì)感染豬流行性腹瀉病毒仔豬的治療效果 由表2 可知，對(duì)照組（試驗(yàn)1 組）仔豬的死亡率達(dá)到66.7%，治愈率為0.0%。試驗(yàn) 2、3、4 組仔豬的治愈率分別為 53.3%、66.6%、60.0%，死亡率較試驗(yàn)1 組分別降低60.0%、63.4%、63.4%。可見(jiàn)中草藥制劑對(duì)PEDV 感染仔豬具有良好的治療效果，且存活率顯著提高。

表2 復(fù)合中草藥制劑對(duì)感染豬流行性腹瀉病毒仔豬的治療效果

2.2 復(fù)合中草藥制劑對(duì)感染豬流行性腹瀉病毒仔豬生長(zhǎng)性能的影響 由表3 可知，PEDV 及中草藥處理均顯著影響仔豬生長(zhǎng)性能，對(duì)照組（試驗(yàn)1 組）仔豬在中草藥處理期間體重降低，ADG 為負(fù)增長(zhǎng)。與試驗(yàn)1 組相比，試驗(yàn)3、4 組仔豬平均末重分別顯著提高 11.5%、10.9%（P＜ 0.05），試 驗(yàn) 2、3、4 組 ADG 分 別 顯 著 提 高 1600.0%、2100.0%、1900.0%（P＜ 0.05），流行性腹瀉引起的失重得到顯著改善。

表3 復(fù)合中草藥制劑對(duì)感染豬流行性腹瀉病毒仔豬生長(zhǎng)性能的影響

2.3 復(fù)合中草藥制劑對(duì)感染豬流行性腹瀉病毒仔豬小腸形態(tài)的影響 由表3 可知，中草藥處理患PED 的仔豬后，顯著改變仔豬小腸形態(tài)。與試驗(yàn) 1 組相比，試驗(yàn) 2、3、4 組仔豬十二指腸 VH 分別顯著增加 9.5%、13.0%、11.8%（P＜ 0.05），V/C 顯 著 增 加 16.1%、23.3%、16.3%（P＜ 0.05），CD 有所降低，但差異不顯著（P＞ 0.05）。試驗(yàn)3 組仔豬空腸VH 較試驗(yàn)1 組增加16.2%（P＜ 0.05），CD 降 低 18.5%（P＜ 0.05），試 驗(yàn) 2、3、4 組 V/C 較 試 驗(yàn) 1 組 分 別 顯 著 增 加 10.8%、42.5%、14.4%（P＜0.05）。此外，與試驗(yàn) 1 組相比，試驗(yàn)3、4 組仔豬回腸VH 分別顯著增加13.0%、12.5%（P＜ 0.05），試驗(yàn) 3 組 CD 降低 11.2%，而試驗(yàn) 2、3、4 組 V/C 分別顯著降低 15.7%、27.2%、18.0%（P＜0.05）。其余指標(biāo)較試驗(yàn)1 組也有一定改善，但未達(dá)顯著水平。

表4 復(fù)合中草藥制劑對(duì)感染豬流行性腹瀉病毒仔豬小腸形態(tài)的影響

3 討論

3.1 復(fù)合中草藥制劑對(duì)感染豬流行性腹瀉病毒仔豬的治療效果 PED 僅發(fā)生于豬，對(duì)各年齡段的個(gè)體均具有感染性，哺乳仔豬的發(fā)病率和死亡率更高。PEDV 是我國(guó)病毒性腹瀉主要致病病原之一，由于疫苗的有效性不足以預(yù)防PEDV 感染，并且對(duì)PED 的治療無(wú)特效藥，因此，尋找更安全、廉價(jià)、有效的防治PED 的措施一直是研究重點(diǎn)。體內(nèi)外的研究證明，中草藥具有抗病毒、增強(qiáng)動(dòng)物機(jī)體免疫力、促進(jìn)生長(zhǎng)等作用，是具有前景且安全、有效的飼料添加劑（Kim 等，2008）。藥用植物中含有許多生物活性物質(zhì)，包括生物堿、呋喃、硫代苯、萜類(lèi)、黃酮類(lèi)、多酚類(lèi)等，它們通過(guò)阻斷病毒進(jìn)入或抑制病毒遺傳物質(zhì)復(fù)制，或憑借其抗氧化活性而起到抗病毒作用（陳兵，2014）。本研究發(fā)現(xiàn)，感染PEDV 的仔豬死亡率達(dá)66.7%，無(wú)治愈個(gè)體，而中草藥制劑處理組死亡率低于7.0%，治愈率顯著提高。黃世才等（2017）研究表明，在湖南一爆發(fā)PED 的豬場(chǎng)內(nèi)用不同中草藥制劑處理泌乳母豬，結(jié)果表明，仔豬的存活率分別為67.12%和90.19%，而對(duì)照組仔豬存活率僅為11.07%，表明所用中藥制劑通過(guò)過(guò)奶作用對(duì)仔豬起到防治效果，顯著提高仔豬存活率。劉衍芬等（2016）發(fā)現(xiàn)，以穿心蓮為主要成分，用浸泡、煎煮方式制備的中藥制劑處理PEDV 感染的哺乳仔豬，結(jié)果顯示，治療效果優(yōu)于常規(guī)治療組及黃芪多糖治療組。以上研究表明，中藥制劑對(duì)PED 具有較好的治療效果，且復(fù)合制劑的治療效果優(yōu)于單一成分。

3.2 復(fù)合中草藥制劑對(duì)感染豬流行性腹瀉病毒仔豬生長(zhǎng)性能的影響 仔豬感染PEDV 后的典型癥狀包括嘔吐、腹瀉等，同時(shí)降低仔豬采食量及體重增長(zhǎng)率甚至降低體重，嚴(yán)重降低生長(zhǎng)性能，影響生產(chǎn)效益。本研究結(jié)果顯示，中草藥制劑處理組仔豬體重和ADG 顯著高于對(duì)照組，對(duì)仔豬生長(zhǎng)有明顯的改善作用。前面的結(jié)果證實(shí)，中草藥制劑對(duì)患PED 仔豬具有顯著的治療效果，即仔豬腹瀉、嘔吐等癥狀逐漸減輕甚至消失，表明仔豬失水狀態(tài)得到緩解，并且逐漸恢復(fù)采食，從而體重較對(duì)照組得到一定增長(zhǎng)。楊久春等（2019）將白術(shù)、黨參等藥材加水侵泡后治療患PED 的仔豬，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組體重較治療前降低14.7%，治療后中藥處理組體重較對(duì)照組高19.9%。研究發(fā)現(xiàn)，中草藥中的活性成分能促進(jìn)水、鈉從腸腔向腸上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)，改善腸道內(nèi)環(huán)境（吳立夫等，1998）。此外，中藥中多糖等成分能促進(jìn)腸道有益微生物增殖，改善腸道微生物環(huán)境（王進(jìn)宇等，2017）。而飼糧中添加中草藥能顯著提高仔豬腸道中蛋白酶、二糖酶等消化酶的活性，促進(jìn)蛋白及淀粉的利用，減少了養(yǎng)分在大腸內(nèi)的發(fā)酵，從而在增加養(yǎng)分利用的同時(shí)減少腹瀉（朱仁俊等，2002）。表明，中草藥制劑對(duì)感染PEDV 的仔豬具有改善生長(zhǎng)的作用。

3.3 復(fù)合中草藥制劑對(duì)感染豬流行性腹瀉病毒仔豬小腸形態(tài)的影響 腸道健康是反映動(dòng)物健康狀態(tài)至關(guān)重要的指標(biāo)之一，腸道形態(tài)在一定程度上可以反映腸道結(jié)構(gòu)和功能。VH 及V/C 值越高，表明腸道對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化和吸收能力越高（陳凌鋒等，2017）。PEDV 感染引起腸道發(fā)生病變，如嚴(yán)重萎縮性腸炎，腸絨毛融合。因此，PEDV 感染仔豬會(huì)出現(xiàn)腸絨毛萎縮和隱窩增生，即VH 降低和CD 增加，降低腸道對(duì)養(yǎng)分的利用能力。研究報(bào)道，黃芪、太子參等中藥制劑添加到飼糧中能顯著增加雛鴨、仔豬等家畜的小腸VH、V/C，降低CD，促進(jìn)腸道發(fā)育（趙文文等，2018 ；陳凌鋒等，2017）。本研究結(jié)果顯示，中草藥制劑處理組仔豬小腸VH、V/C 較對(duì)照組顯著提高，空腸和回腸CD顯著降低。表明中草藥制劑對(duì)PEDV 感染仔豬的腸道黏膜結(jié)構(gòu)的完整性具有積極影響。

4 結(jié)論

綜上所述，本研究中使用的中草藥提取物對(duì)仔豬流行性腹瀉具有良好的治療效果，同時(shí)，改善了仔豬生長(zhǎng)性能和腸道健康，具有較好的應(yīng)用前景。在本試驗(yàn)的條件下治療劑量為0.8 g/d 時(shí)效果最佳。