薄層色譜法鑒別健脾利濕和胃膏的研究

鄧麗嫦 吳聲振 鄔素珍 洪美華 吳淋富

（1 廣東省佛山市禪城區(qū)中心醫(yī)院，廣東 佛山 528000；2 廣東省汕尾市食品藥品檢驗所，廣東 汕尾 516600）

健脾利濕和胃膏是醫(yī)院自制膏方，由白芍、黨參、當歸、陳皮、黃柏、佛手，雞內(nèi)金、丹參、薏苡仁、炒白扁豆、神曲、山藥、茯苓、桂枝等三十余味藥組成的中藥復方膏劑，具有健脾和胃、利濕安神、補氣行血的功效。本膏方針對現(xiàn)代人生活節(jié)奏快、生活工作壓力大、飲食不節(jié)、缺少鍛煉的亞健康狀況制定方藥，主要通過改善身體脾胃的運化功能，充盈精、氣、血等物質(zhì)基礎，修復臟腑功能，以達到祛濕、清熱、健脾養(yǎng)胃、補益心肺，調(diào)肝固腎之功，使患者溫養(yǎng)脾胃，紓解內(nèi)濕、調(diào)暢氣機、行氣止痛、補益氣血、強筋健體，從而得以順利恢復健康。臨床上適用于肢體困倦、食欲不振、腹痛、腹脹、腰膝酸痛、頭暈耳鳴、頭脹、失眠、月經(jīng)不調(diào)等證屬脾虛困濕、氣滯血瘀、腎精虧虛的亞健康狀況人群。薄層色譜法是鑒別中藥材復方制劑中各成分最簡單準確的定性方法，應用非常廣泛[1-5]。為了簡便、有效地控制藥品的質(zhì)量，提高藥品的質(zhì)量標準，參照《中國藥典》2015年版一部相關(guān)方法[6]，利用薄層色譜法鑒別了處方中的主藥白芍、丹參和黃柏，結(jié)果準確，方法簡單，建立了健脾利濕和胃膏的質(zhì)量控制標準。

1 儀器與材料

1.1 儀器：REPROSTAR-Ⅱ型薄層攝像儀（瑞士：CAMAG）；KQ-300DE型超聲波清洗器：功率300 W，頻率40 kHz（昆山超聲波儀器有限公司）；CP225D型電子天平（賽多利斯）。

1.2 試藥：健脾利濕和胃膏3批（由廣東省佛山市禪城區(qū)中心醫(yī)院生產(chǎn)，批號：20190310、20190420、20190508，規(guī)格：50 g/瓶）；對照品、對照藥材均購買于中國藥品生物制品檢定所：芍藥苷對照品（110736-201943）、丹參對照藥材（120923-200610）、黃柏對照藥材（121510-200904）、丹參酮ⅡA對照品（110766-201520）、鹽酸小檗堿對照品（110713-201814）；其余試劑均為分析純。

1.3 薄層板采用自制和預制板：自制硅膠G板，規(guī)格為10 cm×20 cm，厚0.5 mm（硅膠G產(chǎn)自青島市市北區(qū)海化干燥劑廠）；三種預制板分別是： ①MERCK G板：Gel de silice 60；②青島硅膠G板：青島海洋化工廠生產(chǎn)；③煙臺硅膠G板：煙臺市化學工業(yè)研究所生產(chǎn)；

2 方法與結(jié)果

2.1 白芍的TLC鑒別

2.1.1 供試品溶液的制備：稱取5 g樣品，加入10 mL乙醇，超聲溶解20 min，濾過，水浴中蒸干濾液，加乙醇1 mL溶解殘渣，即得供試品溶液。

2.1.2 對照品溶液的制備：精密稱取10 mg芍藥苷對照品，加乙醇適量溶解定容至10 mL，制成每1 mL含1 mg的對照品溶液。

2.1.3 陰性對照溶液的制備：稱取5 g缺白芍陰性對照，按照2.1.1法同法制成陰性對照溶液。

2.1.4 鑒別：依照2015年版《中國藥典》四部（通則0502）薄層色譜法試驗[7]，分別吸取供試品、對照品、陰性對照溶液各5～10 μL點于同一羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，用三氯甲烷乙酸乙酯甲醇-甲酸（40∶5∶10∶0.2）上行展開，取出并晾干，用5%香草醛硫酸溶液噴霧顯色，于105 ℃加熱使斑點顯色清晰。

2.1.5 結(jié)論：于日光下觀察，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的藍紫色斑點。陰性對照無相應的斑點干擾。見圖1。

2.2.7 耐用性考察：試驗中分別采用實驗室自制板和商業(yè)預制板兩種薄層板按擬定方法鑒別，結(jié)果顯示用自制板或預制板的展開結(jié)果基本一致；并分別在兩種溫度（4～10 ℃和室溫）、兩種濕度（20%和75%）的條件下按擬定方法鑒別，結(jié)果顯示在高濕低濕、常溫低溫的條件下的展開結(jié)果基本一致。試驗中還考察了5、10、20 μL的點樣量，結(jié)果顯示以5～10 μL的斑點最清晰，無拖尾現(xiàn)象。

2.2 丹參的TLC鑒別

2.2.1 供試品溶液的制備：稱取5 g樣品，加入20 mL乙醚，水浴回流提取1 h，靜置放冷后離心，水浴蒸干上清液，加乙酸乙酯1 mL溶解殘渣，即得供試品溶液。

圖1 白芍的TLC圖

2.2.2 對照藥材溶液的制備：稱取1 g丹參對照藥材，按照2.2.1同法制備即得對照藥材溶液。

2.2.3 對照品溶液的制備：精密稱取10 mg丹參酮ⅡA對照品，加乙酸乙酯適量溶解定容至5 mL，制成每1 mL含2 mg的對照品溶液。

2.2.4 陰性對照溶液的制備：稱取5 g缺丹參陰性對照，按照2.2.1同法制備即得陰性對照溶液。

2.2.5 鑒別：依照2015年版《中國藥典》四部（通則0502）薄層色譜法試驗[7]，分別吸取20 μL供試品溶液、對照藥材和對照品溶液各10 μL點于同一羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，用石油醚（60～90 ℃）-乙酸乙酯（4∶1）上行展開，取出并晾干。

2.2.6 結(jié)論：于日光下觀察，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的暗紅色斑點。

陰性對照無相應的斑點干擾。見圖2。

圖2 丹參的TLC圖

2.2.7 耐用性考察：試驗中分別采用實驗室自制板和商業(yè)預制板兩種薄層板按擬定方法鑒別，結(jié)果顯示用自制板或預制板的展開結(jié)果基本一致；并分別在兩種溫度（4～10 ℃和室溫）、兩種濕度（20%和75%）的條件下按擬定方法鑒別，結(jié)果顯示在高濕低濕、常溫低溫的條件下的展開結(jié)果基本一致。試驗中還考察了5、10、20 μL的點樣量，結(jié)果顯示以供試品溶液20 μL，對照藥材和對照品溶液各10 μL的斑點最明顯、清晰，分離效果最好。

2.3 黃柏的TLC鑒別

2.3.1 供試品溶液的制備：稱取5 g樣品，加入20 mL的1%醋酸甲醇溶液，60 ℃水浴中超聲溶解20 min，濾過，取濾液水浴加熱濃縮至2 mL即得供試品溶液。

2.3.2 對照藥材溶液的制備：稱取0.1 g黃柏對照藥材，按照2.3.1同法制備即得對照藥材溶液。

2.3.3 對照品溶液的制備：精密稱取10 mg鹽酸小檗堿對照品，加入1%醋酸甲醇溶液適量溶解并定容至20 mL，制成每1 mL含0.5 mg的對照品溶液。

2.3.4 陰性對照溶液的制備：稱缺5 g缺黃柏陰性對照，按照2.3.1同法制備即得陰性對照溶液。

2.3.5 鑒別：依照2015年版《中國藥典》四部（通則0502）薄層色譜法試驗[7]，分別吸取供試品、對照品、陰性對照溶液各1～2 μL，點于同一羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，用甲苯-乙酸乙酯一甲醇一異丙醇-濃氨試液（6∶3∶1.5∶1.5∶0.5）為展開劑，展開缸一側(cè)槽中加入展開劑，另一槽加入與展開劑等體積的濃氨試液，共同預平衡15 min；上行展開；展距10 cm。

2.3.6 結(jié)論：于紫外光燈（365 nm）下觀察。供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。陰性無相應的斑點干擾。見圖3。

圖3 黃柏的TLC圖

2.3.7 耐用性考察：試驗中分別采用實驗室自制板和商業(yè)預制板兩種薄層板按擬定方法鑒別，結(jié)果顯示用自制板或預制板的展開結(jié)果基本一致；并分別在兩種溫度（4～10 ℃和室溫）、兩種濕度（20%和75%）的條件下按擬定方法鑒別，結(jié)果顯示在高濕低濕、常溫低溫的條件下的展開結(jié)果基本一致。試驗中還考察了1、2、5、10、的點樣量，結(jié)果顯示以1～2 μL的斑點最清晰，分離效果最好，無拖尾現(xiàn)象。

3 討論

3.1 薄層色譜鑒別法是中成藥中中藥成分鑒別最常用的方法，專屬性強，方法簡單，結(jié)果直觀明了。王剛等[8-12]制定中成藥標準均采用薄層色譜鑒別法進行藥材的鑒定。

3.2 丹參的薄層鑒別實驗中曾考察了用稀乙醇提取樣品溶液，同法制備丹參對照藥材、丹參酮ⅡA、丹酚酸B為對照溶液，用三氯甲烷-甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（6∶4∶8∶1∶4）上行展開約4 cm，取出并晾干，再用石油醚（60～90 ℃）-乙酸乙酯（4∶1）上行展開約8 cm，取出并晾干，分別在日光及紫外燈（365 nm）下檢視，結(jié)果顯示樣品中丹酚酸B和丹參酮ⅡA的斑點不明顯[13-15]。試驗中還考察了乙醚超聲萃取和加熱回流的提取方法，結(jié)果表明以加熱回流的提取方法斑點最明顯。

3.3 黃柏的薄層鑒別方法是參考《中國藥典中藥材薄層色譜彩色圖集》等文獻中黃柏藥材項下方法修改而成的。試驗中曾使用三氯甲烷-甲醇-水（30：15：4）的下層溶液為展開劑，置氨然氣飽和的展開缸內(nèi)，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液，結(jié)果表明斑點分離效果不理想；還考察了濃氨試液不同加入方式對展開效果的影響，結(jié)果表明以展開缸一側(cè)槽中加入展開劑，另一槽加入與展開劑等體積的濃氨試液，共同預平衡15 min，展距10 cm最為合適[16-18]。

3.4 文中所擬定鑒別健脾利濕和胃膏中的主藥白芍、丹參和黃柏的薄層色譜法，方法操作簡便、分離度高、專屬性強、重現(xiàn)性好，可以有效控制健脾利濕和胃膏的內(nèi)在質(zhì)量。