結(jié)核分枝桿菌感染T細胞斑點試驗在活動性肺結(jié)核中的診斷價值

李 卓

（錦州市傳染病醫(yī)院結(jié)核內(nèi)二科，遼寧 錦州 121000）

肺結(jié)核為全球面臨的主要公共衛(wèi)生、社會問題之一，WHO統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示，全球1/3左右人口受到結(jié)核分枝桿菌的感染，而每年新發(fā)結(jié)核病例、死亡病例高達830萬、180萬[1]。我國為肺結(jié)核高發(fā)國家，尤其是農(nóng)村地區(qū)、中西部地區(qū)肺結(jié)核防治工作仍然面臨較大的困難，因此盡早鑒別、篩查肺結(jié)核病并給予相應的治療尤為重要[2-3]。臨床主要采用影像學、細菌學診斷肺結(jié)核，然而上述診斷方法敏感度、特異度均比較低，極易引起誤診、漏診的發(fā)生。隨著免疫技術(shù)、生物技術(shù)的不斷發(fā)展，結(jié)核分枝桿菌感染T細胞斑點試驗（T-SPOT.TB）逐漸用于肺結(jié)核診斷，為進一步明確其在活動性肺結(jié)核中的應用價值，筆者選取我院近兩年收治的100例疑似肺結(jié)核患者作為研究對象，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選取我院自2016年10月至2018年10月在我院就診并接受治療的100例疑似肺結(jié)核患者，均符合以下標準：①臨床伴有咳嗽、胸痛和（或）發(fā)熱至少2周；②結(jié)核中毒表現(xiàn)；③胸部CT檢查、痰液或支氣管鏡刷檢涂片抗酸染色、細菌培養(yǎng)等資料完善；④知曉本次研究且自愿參與。排除近期抗結(jié)核治療4周以上、臨床資料不完善患者。其中男60例，女40例，年齡25～70歲，平均（46.69±3.33）歲。

1.2 方法：完善患者既往病史、結(jié)核病接觸史等臨床資料，完善胸部CT檢查、痰涂片檢查及PPD實驗等，必要時可進行病理組織活檢?；颊呔邮躎-SPOT.TB實驗，試劑盒由法國維達萊勃公司生產(chǎn)，嚴格按照規(guī)范操作。肝素鈉真空抗凝管采血5 mL，采血完成后輕輕顛倒5～8次，充分混勻，并放置于18～25 ℃環(huán)境下；4 h內(nèi)將外周血單個核細胞分離，并在每個預包被抗人γ-干擾素抗體的孔中加入2.5×105個PBMCs，分別與早期分泌靶抗6（ESAT-6）和培養(yǎng)過濾蛋白10（CFP-10）兩種抗原共同孵育16～20 h，并利用堿性磷酸酶耦聯(lián)的二抗和底物顯色，采用ELISPOT讀板儀記錄斑點形成細胞（SFCs）。陰性對照孔內(nèi)的內(nèi)斑點數(shù)在0～5個時，則用A、B孔內(nèi)任意一個孔的斑點數(shù)減陰性對照孔斑點數(shù)，≥6個即為陽性；若陰性對照孔內(nèi)斑點數(shù)在6～10個，則A、B孔任意一孔斑點數(shù)大于陰性對照的2倍時即為陽性。若不符合上述標準且陽性對照孔為正常，則為陰性。

1.3 肺結(jié)核診斷標準：臨床診斷參考2005年臨床診療指南結(jié)核病分冊[4]將肺結(jié)核分為活動性肺結(jié)核及潛伏性肺結(jié)核?；顒有苑谓Y(jié)核診斷標準如下。①細菌學陽性證據(jù)；②臨床診斷為陽性：臨床排除其他非結(jié)合型肺疾病、典型的肺結(jié)核臨床癥狀以及肺部CT表現(xiàn)、診斷性抗結(jié)核治療≥2周且有效者。T-SPOT.TB肺結(jié)核診斷臨界值的確定參考石學萍[5]在研究中提出的標準，即A抗原取值16.0 SFCs/2.5×105PBMC、B抗原取值7.0 SFCs/2.5×105PBMC時為活動性肺結(jié)核。

1.4 統(tǒng)計學分析：用SPSS20.0軟件分析數(shù)據(jù)，計量資料使用（±s）表示，符合正態(tài)分布，以t檢驗分析對比；計數(shù)資料以χ2檢驗分析對比。P＜0.05為差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 臨床診斷結(jié)果：依據(jù)臨床最終診斷（包含胸部CT、痰涂片檢查及PPD實驗等結(jié)果） 100例患者中確診68例[68.00%，其中活動性結(jié)核40例（40.00%），潛伏性結(jié)核28例（28.00%）]納入肺結(jié)核組，其余32例[32.00%，其中細菌性肺炎17例（17.00%），肺部腫瘤15例（15.0%）]納入非肺結(jié)核組。

2.2 T-SPOT.TB的檢測結(jié)果：肺結(jié)核組患者T-SP OT.T B檢測的A、B抗原斑點數(shù)的中位數(shù)明顯高于非肺結(jié)核組（P＜0.05），肺結(jié)核組內(nèi)活動性肺結(jié)核A、B抗原斑點數(shù)的中位數(shù)明顯高于潛伏性肺結(jié)核（P＜0.05）。見表1。

2.3 T-SPOT.TB試驗與最終診斷結(jié)果：以最終診斷結(jié)果為金標準，則T-SPOT.TB診斷敏感度、特異度及準確度分別為95.00%、90.00%、92.00%，見表2。

表1 各組患者T-SPOT.TB抗原斑點數(shù)中位數(shù)的檢測結(jié)果

表2 T-SPOT.TB試驗與最終診斷結(jié)果

3 討 論

結(jié)核病是由于結(jié)核桿菌侵入人體引起的一種慢性傳染性疾病，本病發(fā)病較慢，多數(shù)患者癥狀較輕，然而隨著病情加重，患者可出現(xiàn)咯血、發(fā)熱、盜汗、呼吸困難等表現(xiàn)，目前臨床尚無特效治療藥物[6]。流行病學統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示我國每年新發(fā)肺結(jié)核患者90萬例左右，已經(jīng)成為全球第3名肺結(jié)核大國之一[7]。由于結(jié)核病原體可通過飛沫、空氣傳播，因此防控難度較大，近年來隨著國家加大了肺結(jié)核知識的宣教、疾病防控措施，然而肺結(jié)核防控效果并不理想，尤其是隨著人口大規(guī)模流動，結(jié)核耐藥菌株的出現(xiàn)，結(jié)核疫情的防控已經(jīng)成為臨床面臨的重要問題。

細菌培養(yǎng)法為結(jié)核診斷的金標準，然而其時間周期較長且陽性率較低，在疾病的診斷中較為遲緩；分子生物學的快速發(fā)展，核酸擴增檢測等技術(shù)廣泛應用，然而上述實驗的特異度、敏感度均不理想，因此急需找尋一種快速、準確且可開的結(jié)核病診斷方法[8]。本次研究中采用以酶聯(lián)免疫斑點技術(shù)為檢測的T-SPOT.TB檢測方法，該方法于2010年由我國食品和藥品監(jiān)督管理局批準上市，依據(jù)國外系統(tǒng)分析資料，T-SPOT.TB在結(jié)核病診斷中，敏感度、特異度分別為81%～91%，特異度為59%～93%，目前國內(nèi)研究數(shù)據(jù)顯示其敏感度、特異度分別為78.4%～90.1%，特異度為78.4%～90.1%[9]，本次研究中T-SPOT.TB在活動性肺結(jié)核的診斷中敏感度、特異度分別為95.00%、90.00%，高出國內(nèi)相關水平，分析認為除去研究人員、結(jié)核病流程程度差異外，患者免疫力、結(jié)核接觸史、潛伏感染率以及研究樣本大小等均可對結(jié)果產(chǎn)生一定的影響。

肺結(jié)核的快速診斷為結(jié)核病防控的關鍵因素，而T-SPOT.TB檢測作為T細胞免疫應答基礎上發(fā)展而來的γ干擾素釋放試驗，與傳統(tǒng)TST不同，其使用抗原為結(jié)合分枝桿菌RDI區(qū)內(nèi)的特異抗原CFP-10和ESAT-6，能夠區(qū)別大部分環(huán)境分枝桿菌感染、卡介苗接種的回憶反應，此外其敏感性、特異性均比傳統(tǒng)的痰培養(yǎng)、痰涂片及結(jié)核菌素試驗等高[10-11]，本次研究中，活動性肺結(jié)核組患者A、B抗原斑點數(shù)的中位數(shù)明顯高于潛伏性肺結(jié)核、非肺結(jié)核組患者（P＜0.05），提示T-SPOT.TB檢測在活動性肺結(jié)核的診斷中能夠通過抗原斑點數(shù)高表達提示診斷。以往研究認為T-SPOT.TB的斑點數(shù)無法顯示結(jié)核活動程度[12-13]，然而筆者認為當發(fā)現(xiàn)T-SPOT.TB的斑點數(shù)在短期內(nèi)急劇增加時，則強烈提示體內(nèi)出現(xiàn)結(jié)核活動，此時需給予患者預防性的治療。

總之，T-SPOT.TB在肺結(jié)核診斷具有一定的診斷價值，通過斑點數(shù)的表達可提示活動性肺結(jié)核，具有較高的敏感度、特異度及準確度，然而其過程復雜，同時結(jié)果受到結(jié)核菌、患者自身免疫情況等影響，穩(wěn)定性欠佳，因此為降低誤診漏診的發(fā)生，需充分結(jié)合患者影像學、基礎疾病、結(jié)核病接觸史等判斷。