獸藥中非特定非法添加物質(zhì)的檢查方法

1 適用范圍

本標(biāo)準(zhǔn)適用于無(wú)相應(yīng)獸藥中非法添加物質(zhì)檢查方法標(biāo)準(zhǔn)時(shí)的檢驗(yàn)使用，非法添加物質(zhì)包括對(duì)人或動(dòng)物具有藥理活性或毒理作用等的物質(zhì)。本標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行前應(yīng)進(jìn)行耐用性驗(yàn)證，僅限用于已建立本檢查方法的實(shí)驗(yàn)室，其他實(shí)驗(yàn)室使用時(shí)應(yīng)重新進(jìn)行耐用性驗(yàn)證。執(zhí)行本標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)同時(shí)進(jìn)行試劑空白、樣品空白與陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)，檢驗(yàn)報(bào)告應(yīng)給出檢出限。

2 檢查方法

2.1 液相色譜-二極管陣列法 照高效液相色譜法（《中國(guó)獸藥典》一部附錄0512）測(cè)定。

2.1.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 根據(jù)可疑添加物性質(zhì)，參照藥品國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、獸藥國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)或者獸藥殘留檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)的條件自建。

2.1.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取目標(biāo)對(duì)照品適量，用甲醇或者其他適宜溶劑配制成每1 mL中含對(duì)照品10～50 μg的溶液。

2.1.3 供試品溶液的制備 固體制劑需研細(xì)，稱(chēng)取細(xì)粉適量（如：約相當(dāng)于一頭動(dòng)物一次用量）；用甲醇或者其他適宜溶劑（超聲）定量溶解，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液定量稀釋?zhuān)ㄏ♂尡稊?shù)要確保不造成儀器污染或光譜圖失真），即得；液體制劑量直接精密量取或稱(chēng)取適量，稀釋?zhuān)吹谩?duì)于含有高濃度的有機(jī)鹽和乳化劑等存在強(qiáng)烈基質(zhì)效應(yīng)輔料的產(chǎn)品，應(yīng)適當(dāng)增加前處理步驟。

2.1.4 測(cè)定法 分別精密吸取上述兩種溶液適量注入液相色譜儀，同時(shí)記錄色譜圖與光譜圖；通過(guò)與對(duì)照品液相色譜圖保留時(shí)間、光譜圖的比對(duì)，確定供試品溶液中是否含有可疑添加物。

2.1.5 結(jié)果判定 在供試品和對(duì)照品濃度接近的情況下，供試品色譜圖中如出現(xiàn)與對(duì)照品峰保留時(shí)間一致的色譜峰（差異不大于±5%）；在一定的波長(zhǎng)范圍內(nèi)，兩者光譜圖無(wú)明顯差異；最大吸收波長(zhǎng)一致（差異不大于±2 nm），判為檢出非法添加物。

2.2 液相色譜-高分辨質(zhì)譜法 照質(zhì)譜法（《中國(guó)獸藥典》一部附錄0431）測(cè)定。

2.2.1 液質(zhì)聯(lián)用條件 根據(jù)可疑添加物性質(zhì)自建，采用全掃描方式采集一級(jí)質(zhì)譜和二級(jí)質(zhì)譜信息。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取目標(biāo)對(duì)照品適量，用甲醇或者其他適宜溶劑配制成每1 mL中含對(duì)照品50～500 ng的溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備 同2.1.3。

2.2.4 測(cè)定法 分別精密吸取上述兩種溶液適量，注入液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀，記錄液相色譜圖及一級(jí)質(zhì)譜圖與二級(jí)質(zhì)譜圖；通過(guò)與對(duì)照品溶液色譜圖保留時(shí)間、質(zhì)譜圖的對(duì)比，確定供試品溶液中是否含有可疑添加物。

2.2.5 結(jié)果判定 方法1：供試品色譜圖中如出現(xiàn)與對(duì)照品峰保留時(shí)間一致的色譜峰（保留時(shí)間相對(duì)偏差不大于2.5%）；供試品質(zhì)譜圖與對(duì)照品質(zhì)譜圖應(yīng)一致（包括分子離子和至少一個(gè)碎片離子，質(zhì)量數(shù)差異小于等于5×10-6），判為檢出非法添加物。

方法2：供試品與對(duì)照品分子離子峰的質(zhì)量數(shù)偏差不大于5×10-6，且二級(jí)質(zhì)譜圖與對(duì)照品的二級(jí)質(zhì)譜圖一致，判為檢出非法添加物。

2.3 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法 照質(zhì)譜法（《中國(guó)獸藥典》一部附錄0431）測(cè)定。

2.3.1 液質(zhì)聯(lián)用條件 根據(jù)可疑添加物性質(zhì)自建，采用離子掃描（SRM）或多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）。定性離子對(duì)選用獸藥殘留檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)中的定性離子對(duì)或者符合至少4個(gè)（非禁用藥3個(gè)）識(shí)別點(diǎn)數(shù)的要求。

2.3.2 對(duì)照品溶液的制備、供試品溶液的制備同2.2.2和2.1.3。

2.3.3 測(cè)定法 分別精密吸取上述兩種溶液適量，注入液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀，記錄特征離子質(zhì)量色譜圖；通過(guò)與對(duì)照品溶液色譜圖保留時(shí)間、離子豐度比的對(duì)比，確定供試品溶液中是否含有可疑添加物。

2.3.4 結(jié)果判定 供試品色譜圖中如出現(xiàn)與對(duì)照品峰保留時(shí)間一致的色譜峰（差異不大于±2.5%）；供試品離子豐度比應(yīng)與對(duì)照品的一致，允許偏差范圍符合表1 的要求，判為檢出非法添加物。

表1 離子豐度比的允許偏差范圍