胃癌中CK19mRNA 的表達(dá)變化及臨床意義

孫永華，王惠，胡博，徐優(yōu)耀，李晶

中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院鞍山醫(yī)院1檢驗科，2消化內(nèi)科，3普外科，遼寧 鞍山 114011

胃癌是中國常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一，具有較高的發(fā)病率和病死率，嚴(yán)重威脅著患者的健康與生命。短期內(nèi)的病情持續(xù)性進(jìn)展能夠?qū)е挛赴┗颊吒吣[瘤負(fù)荷的出現(xiàn)，并增加病死的風(fēng)險[1-2]。分析與胃癌患者臨床特征相關(guān)的評估性指標(biāo)能夠為胃癌的臨床診療提供參考。細(xì)胞因子或腫瘤蛋白表達(dá)水平的波動能夠在胃黏膜上皮細(xì)胞的異常分裂過程中發(fā)揮作用，影響早期胃癌的發(fā)生。細(xì)胞角蛋白 19（cytokeratin 19，CK19）mRNA能夠通過影響腫瘤細(xì)胞的增殖，導(dǎo)致胃黏膜上皮細(xì)胞的細(xì)胞核中的DNA持續(xù)分裂，進(jìn)而促進(jìn)胃癌的發(fā)生與發(fā)展。CK19mRNA還能夠通過影響腫瘤基因的轉(zhuǎn)錄激活程度，導(dǎo)致細(xì)胞周期發(fā)生紊亂，干預(yù)腫瘤細(xì)胞的分化成熟過程，最終促進(jìn)消化道惡性腫瘤的發(fā)生[3]。為了探討CK19mRNA的表達(dá)情況與胃癌的關(guān)系，從而為胃癌患者臨床特征的臨床評估提供參考，本研究探討了CK19mRNA的表達(dá)情況及臨床意義，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年5月至2018年10月中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院鞍山醫(yī)院收治的胃癌患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合胃癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]；②患者年齡≤75歲；③經(jīng)胃鏡取活組織檢查或手術(shù)后病理學(xué)檢查確診。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他部位惡性腫瘤；②合并免疫系統(tǒng)疾病；③有放化療史；④手術(shù)后復(fù)發(fā)的胃癌患者；⑤合并其他系統(tǒng)嚴(yán)重性疾病。根據(jù)納入、排除標(biāo)準(zhǔn)，本研究共納入90例胃癌患者作為胃癌組。胃癌組中，男51例，女39例；年齡44～75歲，平均（54.0±8.4）歲；TNM分期：Ⅰ期22例，Ⅱ期35例，Ⅲ期25例，Ⅳ期8例；分化程度：低分化27例，中分化38例，高分化25例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性42例；浸潤深度（根據(jù)T分期）：T1～2期41例，T3～4期49例；病灶直徑≥3 cm 42例，病灶直徑＜3 cm 48例；病理類型：管狀腺癌80例，其他類型10例。另選取90例健康者為對照組。

1.2 檢測方法

采集受試者的肘部靜脈血3 ml，3000 r/min離心20 min，收集上層液體儲存于低溫冰箱中保持待用，采用北京奧維亞生物公司生產(chǎn)的試劑盒提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄成cRNA后進(jìn)行基因擴(kuò)增。采用Primer 5軟件檢測基因的合成和引物設(shè)計，以GADPH為內(nèi)參，CK19mRNA的上游引物為5'-CAAGGACCAACTACAACC-3'，下游引物為5'-TGCCTCTTCTTTAATTG-3'，經(jīng)歷45個循環(huán)后進(jìn)行曲線溶解，每個孔設(shè)置3個復(fù)孔，取平均值。采用實時定量聚合酶鏈反應(yīng)（quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR）法檢測胃癌患者外周血中CK19mRNA的相對表達(dá)量。IQ5實時熒光定量PCR儀購自美國伯樂公司。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 21.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。符合正態(tài)分布的計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料以例數(shù)表示，組間比較采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CK19mRNA 相對表達(dá)量的比較

qRT-PCR檢測結(jié)果顯示，胃癌組患者外周血中CK19mRNA的相對表達(dá)量為（12.167±2.770），明顯高于對照組患者的（1.804±0.448），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=35.036，P＜0.01）。

2.2 不同臨床特征胃癌患者外周血中CK19mRNA的表達(dá)情況

不同年齡、性別、病灶直徑、病理學(xué)類型、分化程度、浸潤深度胃癌患者外周血中CK19mRNA的相對表達(dá)量比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；不同TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況胃癌患者外周血中CK19mRNA的相對表達(dá)量比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；其中，TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌患者外周血中CK19mRNA的相對表達(dá)量均明顯高于TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。（表1）

表1 不同臨床特征胃癌患者外周血中CK19 mRNA相對表達(dá)量的比較（n=90）

3 討論

胃黏膜上皮細(xì)胞的異常病變或腫瘤基因的長期激活均能夠提高胃癌的發(fā)生風(fēng)險。臨床長期觀察發(fā)現(xiàn)，胃癌患者的總體生存時間較短，中晚期胃癌患者的病死率或致殘率較高[5]。部分研究發(fā)現(xiàn)，合并幽門螺桿菌感染的胃癌患者的發(fā)病率較高，與臨床特征的關(guān)系更明顯[6-7]。現(xiàn)階段主要通過血清非特異性腫瘤標(biāo)志物如癌胚抗原、糖類抗原19-9評估胃癌患者的病情，但其評估胃癌患者病情的局限性較為明顯，與胃癌患者臨床分期或淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況的明確關(guān)系尚未明確[8]。本研究的創(chuàng)新性在于分析了CK19mRNA的表達(dá)情況與胃癌患者TNM分期、腫瘤細(xì)胞浸潤深度、分化程度的關(guān)系。

CK19mRNA是細(xì)胞角蛋白家族的成員，主要定位于間質(zhì)細(xì)胞、部分胚胎組織細(xì)胞或生發(fā)上皮細(xì)胞，在細(xì)胞分離、細(xì)胞核基因或上皮細(xì)胞凋亡的調(diào)控過程中發(fā)揮了重要的作用。基礎(chǔ)生物學(xué)的研究表明，CK19mRNA能夠通過促進(jìn)腫瘤細(xì)胞內(nèi)蛋白激酶B（protein kinase B，PKB，也稱AKT）信號通路的激活，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞早期異常核分離象的出現(xiàn)，進(jìn)而誘導(dǎo)腫瘤基因的激活和腫瘤細(xì)胞的產(chǎn)生[9]。CK19mRNA還能通過影響腫瘤細(xì)胞膜上的跨膜蛋白受體，促進(jìn)細(xì)胞生物學(xué)特征的改變，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的浸潤和侵襲。有研究發(fā)現(xiàn)，在中晚期或合并明顯惡病質(zhì)的胃癌患者中，CK19mRNA呈明顯的高表達(dá)趨勢[10]，但對于CK19mRNA與胃癌患者病理類型、臨床分期等關(guān)系的分析較少。

本研究發(fā)現(xiàn)，胃癌患者外周血中CK19mRNA的相對表達(dá)量明顯高于對照組患者，表明CK19mRNA的高表達(dá)與胃癌的發(fā)生密切相關(guān)，高表達(dá)的CK19mRNA能夠在腫瘤細(xì)胞生物學(xué)特征惡化、腫瘤細(xì)胞增殖調(diào)控異常等方面發(fā)揮作用，最終促進(jìn)胃黏膜早期上皮異常病變的發(fā)生。同時CK19mRNA對胃癌發(fā)生的具體影響，還在于其能夠影響胃黏膜上皮細(xì)胞的腫瘤基因錯配修復(fù)的能力，激活腫瘤基因，提高胃黏膜上皮細(xì)胞核異常分裂的風(fēng)險。CK19mRNA還能夠增加胃癌患者腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移及擴(kuò)散的風(fēng)險[11]。本研究發(fā)現(xiàn)，CK19mRNA的表達(dá)并不會影響胃癌細(xì)胞的浸潤過程，而TNM分期較高或發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌患者外周血中CK19mRNA的表達(dá)水平較高，提示CK19mRNA的表達(dá)與胃癌患者臨床特征的進(jìn)展情況具有一定關(guān)聯(lián)。CK19mRNA不僅能夠通過促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化過程，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)散，提高胃癌的臨床分期，還能夠提高腫瘤細(xì)胞與腹腔內(nèi)淋巴結(jié)內(nèi)皮細(xì)胞的黏附能力，促進(jìn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生[12-15]。但本研究并未發(fā)現(xiàn)不同分化程度胃癌患者外周血中CK19mRNA的表達(dá)差異，表明CK19mRNA的表達(dá)可能與胃癌的分化程度無關(guān)。

綜上所述，胃癌患者外周血中CK19mRNA的相對表達(dá)量較高，且其表達(dá)與胃癌患者的TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況均可能有關(guān)。相比于癌胚抗原或糖鏈蛋白，CK19mRNA的優(yōu)勢在于其對于胃癌細(xì)胞擴(kuò)增的標(biāo)志作用更大，更能反映腫瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的惡化程度。本研究未分析CK19mRNA的表達(dá)與胃癌患者生存情況或治療后臨床轉(zhuǎn)歸的關(guān)系，今后仍需深入探討。