曼氏無針烏賊內臟及纏卵腺組織學研究

朱成功 姜斌 張峰

摘要 為詳細了解曼氏無針烏賊的內臟和纏卵腺的組織學結構，采用組織學技術對曼氏無針烏賊的腸、肝、胰、胃、纏卵腺進行了顯微觀察，闡述了各個器官的組織學結構。觀察結果表明，腸較短，腸壁由黏膜層、黏膜下層和肌層構成;黏膜層主要由單層柱狀上皮細胞組成，黏膜下層肌纖維豐富，毛細血管較少，肌層較薄;肝臟由若干肝小葉構成，每一肝小葉由外緣的胚細胞和內部的腺細胞圍成;胃較圓，胃壁肌肉層較厚，纖毛細胞豐富;胰臟由一顆顆松散的黃色小顆粒構成，細胞主要有胚細胞和分泌細胞;纏卵腺則呈“書頁狀”，各葉瓣分泌的分泌物充斥著纏卵腺的空腔。該研究結果豐富了頭足類繁殖生物學研究的資料，為曼氏無針烏賊人工繁育提供了一定的理論參考。

關鍵詞 曼氏無針烏賊;內臟;纏卵腺;組織學

Abstract In order to understand the histological structure of viscera and nidamental gland of Sepiella japonica，the intestine，liver，pancreas，stomach and nidamental gland of S.japonica were observed by histological technique，and the histological structure of each organ was described.The results show that the intestine is short and its wall consists of mucosa，submucosa and muscular layer.The submucosa is mainly composed of monolayer columnar epithelial cells.The submucosa is rich in muscle fibers，with fewer capillaries and thinner muscular layer.The liver is composed of several hepatic lobules，each of which is surrounded by embryonic cells at the outer edge and glandular cells at the inner edge.The stomach is round，the muscle layer of the stomach wall is thick，and the cilia are rich.The pancreas is composed of loose yellow particles.The cells are mainly embryonic cells and secretory cells.The nidamental gland looks like “book pages” and the secretions of each leaf valve filled in the cavity of the nidamental gland.This study enriched the cephalopods reproductive biology research data and might provide certain theoretical reference for S.japonica artificial breeding.

Key words Sepiella japonica;Viscera;Nidamental gland;Histology

曼氏無針烏賊（Sepiella japonica）是我國沿海地區重要的經濟頭足類，分布區域從香港南部一直到韓國北部和日本西部。它曾經是這些地區收獲的主要4種頭足類物種之一[1]。20世紀70年代末，由于漁業的過度捕撈和生態環境的持續惡化，曼氏無針烏賊產量急劇下降。21世紀初，隨著曼氏無針烏賊人工育苗技術被突破，浙江和福建等地已經進行規模化人工育苗和增殖放流[2]。目前，國內對于曼氏無針烏賊的研究主要集中在繁育生殖等方面[3]。迄今為止，鮮見有關曼氏無針烏賊內臟器官腸、肝、胃、胰研究的報道，該研究在組織學水平上對曼氏無針烏賊雌性的腸、肝、胃、胰、纏卵腺結構進行詳細的顯微觀察，以期豐富頭足類繁殖生物學資料，為曼氏無針烏賊人工繁育提供一定的理論參考。

1 材料與方法

1.1 材料 試驗所用烏賊取自浙江省海洋水產研究所西軒島烏賊養殖基地，胴長7.0～9.5 cm，體重55.7～101.5 g，曼氏無針烏賊處于繁殖產卵期。

1.2 方法 活體解剖出雌性曼氏無針烏賊的腸、肝、胃、胰、纏卵腺組織，切成0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm的小方塊[4]，放入Bouin固定液固定24 h，保存于4 ℃冰箱中。經系列乙醇梯度脫水、二甲苯透明、石蠟包埋，切片機連續切片（厚度7 μm），再經H.E染色和中性樹膠封片，采用Leica-DMiL型顯微鏡觀察并拍照。

2 結果與分析

2.1 腸的組織學結構

如圖1所示，曼氏無針烏賊腸較短，為一直管，沒有盤曲，與其食性為肉食性相一致。腸吸收表面積大，腸黏膜向腸腔褶入許多隆起，上密布指狀絨毛，絨毛上皮和褶上密布微絨毛，為上皮細胞游離面細胞膜形成的指狀突起（圖1B、C）。腸壁的組織學構造分為黏膜層、黏膜下層和肌層。肌層由內層的縱行肌和外層的環行肌組成（圖1D）。

2.2 肝的組織學結構

如圖2所示，觀察到曼氏無針烏賊肝臟為呈狹長、彌散分布的腺體（圖2A）。腺體的邊緣處具較薄的漿膜，漿膜由單層扁平上皮和結締組織構成。漿膜下外層肝細胞排列較為緊密，清晰可見中央靜脈和脂肪滴空泡。靠近肝臟邊緣處，肝細胞出現一塊極為緊密的團塊狀肝細胞團，內層肝細胞排列不規則，細胞核被染成藍色（圖2B）。

2.3 胃的組織學結構

如圖3所示，曼氏無針烏賊的胃位于口腔下面，下部與腸相連，通過對組織切片的觀察，可以清晰地觀察到曼氏無針烏賊的胃壁由肌層、黏膜層、結締組織、基膜層組成（圖3A）。還可以清晰地觀察到胃壁里排列緊密的柱狀上皮細胞的細胞核，柱狀上皮細胞的細胞核較大且呈橢圓狀。而結締組織里分布著比較松散的細胞的細胞核，該細胞核相較柱狀上皮細胞的細胞核較小（圖3D）。

2.4 胰臟的組織學結構

如圖4所示，曼氏無針烏賊的胰臟比較發達，為一獨立的致密型器官，由若干小塊狀分葉的腺

組織構成（圖4A）。胰腺表面包有由結締組織構成的一薄層被膜，被膜深入實質將其分為若干小葉。因小葉間結締組織不發達，所以界限不明顯。胰腺實質分為兩部分，即外分泌部和內分泌部。內分泌部分散于腺泡之間的胰島。胰島染色較淺，圓形或卵圓形，大小不一且與腺泡之間分界明顯，由一薄層結締組織分隔開（圖4B）。圖中深藍色的為結締組織細胞的細胞核。腺泡細胞位于腺泡腔面，核圓形位于基底部。

2.5 纏卵腺的組織學結構

如圖5所示，纏卵腺壁由三部分構成，分別是內外上皮組織、肌纖維和結締組織。內層纖毛上皮與結締組織一起向腺腔內凸出從而構成了分泌葉瓣，各葉瓣間平行排列，且彼此長度不同，葉瓣的外圍有較致密的纖毛。肌層為平滑肌，約為四五層，主要為環肌。

3 討論

曼氏無針烏賊的腸、肝、胰、胃都參與食物的消化與吸收。肝可分泌酶進入胃中，進行消化作用。胰位于肝臟旁，分泌淀粉酶和蛋白酶流入胃中[5]。胃位于內臟團的頂端，呈豆狀，胃的環肌層特別發達，內壁有很厚的護膜，其細胞也相當發達，主要有胃肌細胞和分泌性細胞，分泌細胞多帶有纖毛，有助于分泌相關的消化類物質和機械挪動，這與長蛸（Octopus variabilis）[6-7]和短蛸（Octopu socellatus）[8]的胃結構極其相似，胃壁肌層都極厚且胃內壁有皺褶和長脊，這一結構在很大程度上增加了吸收面積。

曼氏無針烏賊無晶桿囊組織結構。而據報道大部分瓣鰓綱動物存在晶桿囊，且其或與腸分離或在基部連接，如紫貽貝（Mytilus edulis）[9]、長竹蟶（Solen gouldi）[10]和海灣扇貝（Argopecten irradias）[11]。然而，同為瓣鰓綱的背角無齒蚌（Anodonta woodiana）[12]和腹足綱的脈紅螺（Rapana venosa）[13]卻無晶桿囊組織。由此可以看出，濾食性軟體動物的瓣鰓綱晶桿囊組織的有無存在一定的物種差異性，而腹足綱則已無晶桿囊組織。肉食性的長蛸、短蛸和該文研究的曼氏無針烏賊也無此結構，這一特點與食性具有密切關系，晶桿的旋轉可對胃內大的食物顆粒進行研磨，而部分瓣鰓綱動物以及腹足綱動物、肉食性動物的胃本身具有強大的研磨能力，不再需要晶桿的輔助。

曼氏無針烏賊的腸較粗短，自幽門部筆直前伸，稍作彎曲，后末端為直腸，以肛門開口于外套腔，漏斗基部后方。而瓣鰓綱、雙殼綱等軟體動物的腸均較長，一般可分前、中、后三部分，如三角帆蚌（Hyriopsis cumingii）[14]、縊蟶（Sinonovacula constricta）[15]和皺紋盤鮑（Haliotis discus hannai）[16-17]。而曼氏無針烏賊的腸較短，主要起吸收作用，腸內多皺褶，很好地擴大了其吸收食物的表面積，腸中還有條特別長的長嵴，占了腸的大部分空間，這可能使食物在腸中停留更長時間。腸中的柱狀細胞表面有密集的微絨毛，主要起食物消化、吸收作用。

軟體動物門瓣鰓綱和腹足綱動物的肝臟具有多重功能，除具有分泌作用外，食物的吸收主要發生在肝臟中[18]。曼氏無針烏賊肝臟中有腺細胞和胚細胞，這和崔龍波等[19]報道的大連灣牡蠣（Ostrea gigas thunberg）和Owen[20]報道的鳥蛤（Cardium edule）肝臟中的細胞類型不同。曼氏無針烏賊肝臟中脂肪滴空泡的形態與陳慕雁等[21]描述的大菱鲆（Scophthalmus maximus）成魚肝細胞貯存了大量的肝糖原以致逐漸空泡化類似。曼氏無針烏賊的胰臟也僅有一種腺細胞，推斷其應該分泌相關的水解酶類，和肝臟一同將其匯入導管并最終流入盲囊。此外，胰臟細胞游離端有密集的微絨毛，提示該細胞可能與某種或者某些物質的吸收、轉運有關。

符方堯等[22]首次發表了關于曼氏無針烏賊纏卵腺的初步研究，觀察到纏卵腺外包有韌性結締質皮膜，內部分為數瓣的中空室狀構造，與王津偉等[23]報道的曼氏無針烏賊纏卵腺呈中空室狀，分為數瓣的結構類似。該研究通過觀察曼氏無針烏賊的纏卵腺，發現其與金烏賊（Sepia esculenta）[24]的纏卵腺結構相似，都呈“書頁狀”。纏卵腺內許多分泌葉瓣平行排列組成“書頁狀”腺體，分泌葉瓣上的分泌細胞將分泌物質排到各個分泌葉瓣間隙，之后通過導管排出纏卵腺。這種腺體結構充分利用了腺體的空間體積，增大了分泌面積[23]。Klussmann-Kolb[25]在研究腹足綱物種擬捻螺（Acteocina atrata）的纏卵腺時發現其纏卵腺由許多小的分泌小瓣組成，對擬捻螺進行超微結構觀察，發現擬捻螺分泌細胞的細胞核較大且表面長有纖毛，這與曼氏無針烏賊的纏卵腺結構相似。Ⅰ型細胞和Ⅱ型細胞存在于曼氏無針烏賊纏卵腺葉瓣上皮中，并分別位于葉瓣的外圍和基部。Ⅰ型細胞靠近管道內壁的一側生有豐富的纖毛，這與其分泌功能有關。曼氏無針烏賊的纏卵腺是成對存在的，成熟后纏卵腺較大，呈扁平狀卵圓形乳白色。曼氏無針烏賊的分泌細胞上有豐富的內質網和線粒體，且在胞質內存在大量的囊泡和分泌顆粒，說明纏卵腺是一種典型的分泌腺體[23]。曼氏無針烏賊纏卵腺腔中含有豐富的糖蛋白，但是關于曼氏無針烏賊纏卵腺分泌物基本組成成分的研究國內還沒有。汪彩進等[26]報道了阿根廷魷魚（Iiiex argentinus）纏卵腺的水分含量為73.39%、粗蛋白干重含量為60.39%、粗脂肪含量為3.13%。戴宏杰等[27]報道了虎斑烏賊（Sepia pharaonis）纏卵腺中的水分含量為73.27%、粗蛋白含量為18.40%、粗脂肪含量為0.16%。劉長琳等[28]報道了野生金烏賊纏卵腺中的水分含量為65.75%、粗蛋白含量為28.31%、粗脂肪含量為2.04%。不論是阿根廷魷魚還是虎斑烏賊或者金烏賊，其纏卵腺都具有高蛋白、低脂肪的特點。Shigeru等[29]對阿根廷魷魚纏卵腺分泌的黏性物質進行了深入研究，發現一種特殊的海洋黏蛋白，具有黏度大、保水性好等特點，可作為化妝品的成分。阿根廷滑柔魚產出的卵被包裹一層易碎的凝膠狀外膜，這層膜是由纏卵腺分泌的黏性物質形成的。纏卵腺分泌的黏液物質主要成分是水溶性物質、鹽溶性物質和不溶性物質，其中鹽溶性物質是具有很大分子量的蛋白型復合物。目前，從海蜇（Rhopilema esculentum）[30]、蛤蜊（Ruditapes philippinarum）[31]、海馬（Hippocampus kuda）[32]和牡蠣（Crassostrea gigas）[33-34]等中提取的糖蛋白具有顯著的抗氧化、抗腫瘤、抗疲勞、調節免疫力等生物活性。陳淑敏等[35]研究了曼氏無針烏賊纏卵腺中糖蛋白的抗菌活性，發現其對革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌都具有強烈的抑菌作用，具有廣譜性，可作為一種生物防腐劑。

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