HLA-dp基因多態性和抗HCV治療的免疫應答相關性研究

陳輝華

【摘要】 目的：探析丙型肝炎患者HLA-DP基因多態性和抗病毒治療的免疫應答相關性。方法：以2017年1月-2018年6月筆者所在醫院診治的100例丙型肝炎患者作為研究對象，均行抗病毒治療，接受24周隨訪，測定HLA-DP基因多態性表現，通過Logistic回歸模型分析丙型肝炎抗病毒治療免疫應答相關影響因素。結果：本組患者中，HLA-DP基因rs3077、rs2395309位點基因型符合Hardy-Weinberg遺傳平衡（P>0.05）。從治療結局看，持續應答（SVR）75例，非持續應答（N-SVR）25例;通過單因素、多因素分析表明，rs3077位點CT與TT型、rs2395309位點GA和AA是影響抗HCV治療免疫應答的相關因素（P<0.05）。結論：HLA-DP基因多態性和抗HCV治療免疫應答相關，有重要臨床意義。

【關鍵詞】 丙型肝炎 HCV HLA-DP基因 基因多態性 抗病毒治療 免疫應答

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2020.15.009 文獻標識碼 B 文章編號 1674-6805（2020）15-00-03

Study on the Relationship between HLA-DP Gene Polymorphism and Immune Response to Anti HCV Therapy/CHEN Huihua. //Chinese and Foreign Medical Research， 2020， 18（15）： -23

[Abstract] Objective： To explore the relationship between HLA-DP gene polymorphism and immune response to anti HCV in patients with hepatitis C. Method： From January 2017 to June 2018， 100 patients with hepatitis C in our hospital were treated with antiviral therapy. They were followed up for 24 weeks， and HLA-DP gene polymorphism was measured. Logistic regression model was used to analyze the related factors of immune response in antiviral therapy of hepatitis C. Result： In this group， the rs3077 and rs2395309 genotypes of HLA-DP genes were in line with the Hardy-Weinberg genetic balance （P>0.05）. From the perspective of treatment outcome， there were 75 patients with sustained response （SVR） and 25 patients with non-sustained response （N-SVR）. Univariate and multivariate analysis showed that CT， TT type at rs3077， GA and AA at rs2395309 were the relevant factors influencing the immune response to anti-HCV treatment （P<0.05）. Conclusion： HLA-DP gene polymorphism is associated with the immune response to anti HCV therapy， which has important clinical significance.

[Key words] Hepatitis C HCV HLA-DP gene Gene polymorphism Antiviral therapy Immune response

First-authors address： Quanzhou First Hospital Affiliated to Fujian Medical University， Quanzhou 362000， China

丙型肝炎一種丙型肝炎病毒（HCV）感染引起的病毒性肝炎，是肝硬化、肝細胞癌等主要病因。當前，臨床以抗病毒治療為主，聚乙二醇化干擾素α（PEGIFNα）聯用利巴韋林是首選療法。但因病毒基因、患者個體以及遺傳等差異使得部分抗病毒治療患者不能得到持續性的病毒免疫應答（SVR）。臨床研究報道，攜帶特定基因型丙型肝炎患者行抗病毒治療有著更高的病毒清除率，且可獲得良好SVR。近年有研究報道，HLA-DP基因多態性和丙型肝炎的發生及轉歸有著密切關系[1]。基于此，本文對筆者所在醫院收治的100例丙型肝炎患者抗病毒治療進行研究，分析HLA-DP基因多態性和抗病毒治療免疫應答相關性，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

將筆者所在醫院感染科2017年1月-2018年6月接治的100例丙型肝炎患者納入研究中，均經癥狀、病毒學、影像學等檢查，符合HCV相關診斷標準[2]。納入標準：（1）確診為HCV，且民族均是漢族;（2）接受抗病毒治療;（3）臨床資料完整。排除標準：（1）合并乙肝病毒、HIV及其他病毒感染;（2）心肺腎功能不全;（3）失代償肝硬化、自身免疫病癥及精神系病變;（4）妊娠期或哺乳期婦女;（5）其他嚴重疾病;（6）不配合隨訪。其中，男53例，女47例;年齡35～61歲，平均（47.6±3.2）歲;體質量指數（BMI）21.4～27.5 kg/m2，平均（23.4±1.3）kg/m2。本研究得到醫院倫理委員會批準，且患者對研究知情并簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 抗病毒治療 本組患者均給用PEGIFNα（RocheRegistr-

ationLtd.;注冊證號：S20120049）180 μg/次，1次/周，皮下

注射，并根據患者個體情況調整，如中性粒細胞是0.5×109～0.75×109/L，用量降到135μg/次或者90μg/次;中性粒細胞持續降低且低于0.5×109/L，停用1～2次，并聯用重組人粒細胞集落刺激因子（哈藥集團生物制藥，國藥準字S20050047）100 μg/m2，1次/d，皮下注射，在中性粒細胞回升到0.75×109/L后再繼續應用干擾素。同時，均聯用利巴韋林片（石藥集團歐意藥業有限公司，國藥準字H20056469）400 mg/次，2次/d，口服。連續用藥48周，在停藥后隨訪24周。

1.2.2 血清HCV抗體檢測 在治療前、治療完成后24周抽取患者晨起空腹外周靜脈血5 ml，取上層血清，通過酶聯免疫吸附法，應用WM1000型酶聯免疫檢測儀測定血清HCV抗體;應用熒光探針法和7900HT型PCR儀定量檢測HCV-RNA水平。嚴格按相關說明書操作。

1.2.3 HLA-DP基因檢測 應用Taqman-MGB熒光探針實時定量PCR法對HLA-DP基因rs3077、rs2395309位點分型擴增，并對擴增結果分析。依照熒光信號確定基因型，當含有FAM或者HEX探針和待測序列互補時，FAM或HEX熒光基團被游離，檢測到熒光信號，其中FAM的信號表示含C、G等位基因，HEX的信號表示含A、T等位基因。當單一FAM信號時，代表純合子CC或GG;當單一HEX信號時，代表純合子AA或TT;當兩者信號同時增強時，代表雜合子CT或GA[3-4]。

1.3 療效評價

根據HCV抗病毒療效標準進行評價[5]：（1）快速應答（RVR），治療4周內復查未檢測到HCV-RNA;（2）早期應答（EVR），在治療12周時復查檢測顯示HCV-RNA水平低于最低限值（3logIU/ml）或降低>2個數量級;（3）治療結束應答（ETVR），在完成治療時，檢測顯示HCV-RNA水平低于最低限值;（4）持續病毒應答（SVR），在治療完成到隨訪24周內，檢測顯示HCV-RNA水平低于最低限值;（5）復發（Relapse），治療結束時HCV-RNA呈陰性，但停藥后HCV-RNA復查呈陽性;（6）無應答（NR），未出現EVR、ETVR;（7）N-SVR，將復發與NR納入。根依照末次隨訪結局，將本組患者分成SVR組和N-SVR組。

1.4 統計學處理

應用SPSS 18.0軟件包完成統計學處理，計量資料以（x±s）表示，采用t檢驗，計數資料以率（%）表示，采用字2檢驗，通過Logistic回歸模型進行多因素分析，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 本組患者HLA-DP基因多態性表現

通過測定，本組患者HLA-DP基因rs3077、rs2395309位點的基因型檢測頻率和理論水平基本一致，符合Hardy-Weinberg遺傳平衡（P>0.05），見表1。

2.2 抗病毒治療免疫應答相關因素分析

根據抗病治療結局，本組SVR有75例，N-SVR有25例，通過分析，兩組HLA-DP基因多態性表現差異有統計學意義（P<0.05），見表2。

2.3 抗病毒治療免疫應答多因素分析

以rs3077位點CC型、CT型、TT型及rs2395309位點GG型、GA型、AA型為自變量，以抗病毒治療免疫應答為變量進行Logistic回歸多因素分析，表明rs3077位點CT與TT型、rs2395309位點GA和AA與抗HCV治療免疫應答相關（P<0.05），見表3。

3 討論

丙型肝炎是一種全球流行的病毒感染性肝病，易感人群在種族、年齡、性別等方面無差異。丙型肝炎病毒主要通過血制品、輸血、采血等路徑經破損黏膜、皮膚傳播，隱匿性強，大部分患者尚無顯著癥狀表現就已被感染。一旦感染可能發展成失代償期肝硬化、肝衰竭等嚴重病癥，嚴重威脅到患者健康和生命安全[6-7]。當前，抗病毒治療是丙型肝炎首選療法，其中PEGIFNα與利巴韋林聯用是最為常用的方法。盡管在積極抗病毒治療后，但仍有20%～50%患者不能實現SVR。有研究報道，青年、女性、白種人的丙型肝炎患者抗病毒治療可實現較高SVR率[8-9]。

基因多態性是近年臨床研究的熱點，就是在某生物群體中，同時或者常存在兩種或以上不連續變異型或者基因型或者等位基因，是個體差異出現的重要基礎。其一方面可能和遺傳疾病的病因有著顯著關聯性，另一方面可能和直接致病基因有著密切關系，通過隨機對健康人群和患病人群某些特定基因位點等位基因的頻率開展關聯分析法是臨床研究基因多態性的主要方法[10]。國內研究發現，HLA-DP基因多態性和HCV的感染及其轉歸存在相關性。HLA-DP蛋白在介導CD4+T細胞免疫中發揮抗原信號傳遞作用，能調控病原體的免疫反應[11]。其中，rs3077位點和HLA-DP蛋白a鏈編碼有關，在野生CC型出現突變后，其編碼HLA-DP蛋白活性顯著降低;而rs2395309在HLA-DP基因3非編碼區，在野生GG型突變后，將會對靶基因mRNA3端互補匹配產生影響，進而改變RNA誘導沉默復合體穩定性，影響到下游HLA-Ⅱ類抗原表達，最終對抗病毒免疫產生不利影響[12-13]。

本研究中，100例確診為丙型肝炎患者接受PEGIFNα+利巴韋林治療后，75例實現SVR，25例為N-SVR。通過對SVR和N-SVR患者的臨床資料發現，年齡、性別、BMI以及HCV-RNA基線水平等差異無統計學意義（P>0.05）。通過對患者HLA-DP基因rs3077、rs2395309位點型檢測，顯示SVR和N-SVR患者的基因型頻率存在差異。多因素回歸分析表明，rs3077位點CT與TT型、rs2395309位點GA和AA與抗HCV治療免疫應答存在相關性（P<0.05）。由此看出，丙型肝炎患者HLA-DP基因多態性和臨床抗病毒治療免疫應答有關，與相關研究報道一致[14-15]。

綜上而言，丙型肝炎采用抗病毒治療有著良好效果，可實現較好的免疫應答相關，但這與患者HLA-DP基因多態性存在相關性，在治療應充分考慮這些因素影響，調整治療方案，以實現精準、高效治療。

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（收稿日期：2020-01-06） （本文編輯：張亮亮）