梅毒螺旋體感染的檢測現狀分析

汪夢 許娜 趙鐵

梅毒螺旋體（Treponema pallidum，Tp）是密螺旋體屬蒼白亞種，是一種小而纖細的螺旋狀微生物。Tp是多階段性傳播疾病——梅毒的病原體。梅毒目前仍然是重要的公共衛生問題，影響全球近600萬人。自2003變至今，我國梅毒發病率呈顯著增長趨勢，年均增長達13.37%。梅毒感染后7～10周或硬下疳出現6～8周后，梅毒螺旋體即可經淋巴進入全身血液循環，幾乎侵犯全身各個器官——引起心血管、神經、生殖等多個系統嚴重并發癥，甚至促進HIV的感染和傳播，還可由母體經胎盤垂直傳播給胎兒，嚴重影響出生人口質量。

梅毒的診斷及臨床判愈目前主要依靠血清學診斷。而在梅毒早期沒有免疫反應;梅毒晚期 （TP往往遷徙到免疫相對薄弱的區域，眼，脊髓等）;兔感染實驗作為金標準，因為時間成本及價格，在臨床應用并不現實;梅毒不同階段各重組蛋白檢測結果并不一樣;PCR用于早期梅毒檢測。所以，及時、準確、可靠的診斷及臨床判愈方法對于梅毒的管理來說尤為重要。近年來，以微小RNA（microRNA，miRNA，miRs）為基礎的PCR法因其獨到的優勢（客觀、準確、耗時短，易于自動化和數字化等），在各種病原體診斷及腫瘤診斷中得到了一定的應用。miRNA是一類內源性的非編碼小分子RNA，廣泛參與調節多種生命體活動。早先的研究發現miRNA可在血清或者血漿中穩定存在，不受反復凍融或者PH變化的影響。更重要的是，臨床應用中，通過抽血檢測其中物質的變化就能指示患者的健康狀況是一種微創的方法，因此檢測血中miRNA的含量可作為一種較好的篩查或者輔助診斷的方式。

為明確梅毒患者體內miRNA的變化規律，并探討其在梅毒血管炎癥發病過程真的作用和機制，我們對文獻進行前期分析，通過比對分析二期梅毒患者和正常人miRNA芯片，發現差異表達的miRNA中，潛在的診斷靶標包括hsa-mir-21-5p， hsa-miR-19b-3p， hsa-miR-16-5p和hsa-miR-142-3p。盡管這些miRNA在梅毒血清中低于正常人，但目前沒有數據確切表明哪一種miRNA或者多重miRNA的診斷價值最好;且以上miRNA為基礎的PCR等特異性方法尚不能評價梅毒的治療和愈后。而臨床以非Tp為基礎的血清學試驗（RPR、TRUST等）主要原理是基于反應素。它們的滴度變化通常與疾病的活躍程度有著密切的關系，因此可作為梅毒的判愈實驗。但是由于反應素在其它疾病如SLE、瘧疾、單核細胞增多癥等也會存在，所以假陽性率較高。因此，有必要闡明miRNA與梅毒病期之間的關系，最好是能結合傳統TPPA、基于Tp膜脂蛋白的ELISA試驗和RPR/TRUST試驗的優點，進一步提高對梅毒的診斷及判愈價值。

應用miRbase和MIRTARBASE數據庫分析hsa-miR-21-5p， hsa-miR-19b-3p， miR-16-5p，和miR-142-3p序列保守性和所在基因組特征;應用TargetScan、PicTar及miRanda預測他們的靶基因，并對其進行功能富集分析和信號轉導通路富集分析。以上miRNA可能通過調控多個信號通路，多階段參與梅毒的病例損傷。目前發現，由于單個的miRNA的診斷效率還不是很高，所以我們將多個miRNA通過二元Logistic回歸方程進行組合，探討組合后的模型對梅毒的診斷效率。

深入研究Tp誘導的血清源性miRNA在梅毒病期中的差異表達。從大樣本臨床病例分析中總結各miRNA表達與疾病發展的關系，收集各期梅毒患者血清中、皮損組織，RT-PCR檢測上述組織中miRNA的表達水平，闡明miRNA在梅毒病患中的表達規律及與現有診斷試劑表達之間的關系，揭示miRNA表達水平與臨床分期與病程、臨床表現、生化指標等梅毒診斷指標之間的關系。深入了解miRNA在梅毒病程中的作用及機制，建立基于這些Tp感染相關miRNA的PCR法，評價篩選出的Tp感染相關miRNA在梅毒診斷中的應用價值，尋找可替代傳統Tp診斷的新型診斷靶標，為miRNA作為梅毒感染病程和預后判斷的生物標志物提供理論依據具有非常重要的意義。

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