定向加工對何首烏藥材質量的影響研究△

馮紫薇，張媛，2，孟磊，趙婷，2，石玥，魏勝利，2*

1.北京中醫藥大學 中藥學院，北京 102488；2.中藥材規范化生產教育部工程研究中心，北京 100102

何首烏為蓼科植物何首烏PolygonummultiflorumThumb.的干燥塊根，生何首烏性平偏涼，有解毒、截瘧、潤腸燥的功效，制何首烏又可以補肝腎、益精血、烏須發、強筋骨，在藥品、食品、保健品、化妝品業應用廣泛[1]。現代研究表明，何首烏中有多種有效成分，反式二苯乙烯苷具有抗衰老、保護神經細胞、調節免疫、清除自由基、提高記憶力、保肝等多種藥理活性[2]，游離蒽醌和結合蒽醌均有調節免疫、抗腫瘤的藥理活性[3-5]，而結合蒽醌又有較強的瀉下作用。與此同時，何首烏中產生肝毒性的成分也引起了大家的關注，有研究推測順式二苯乙烯苷是何首烏特異性肝損傷的重要易感物質[6-7]，通過控制其含量可減輕何首烏的肝毒性。張樂等[8]通過對順式二苯乙烯苷與肝損傷相關性的研究，初步得出了順式二苯乙烯苷含量的建議安全限度為0.1%。何首烏的初加工技術雖然簡單但對何首烏的質量影響甚大[9]。本研究擬通過以順式二苯乙烯苷含量為毒性指標，以反式二苯乙烯苷、兩游離蒽醌(大黃素、大黃素甲醚)和兩結合蒽醌(大黃素葡萄糖苷、大黃素甲醚葡萄糖苷)的含量為功效指標，建立基于初加工技術的高反式二苯乙烯苷型、高游離蒽醌型和高結合蒽醌型3類優質何首烏藥材定向加工生產體系[10]。

1 材料與方法

1.1 材料

Agilent Technologies 1260 Infinity型高效液相色譜儀系統(安捷倫科技有限公司)；ME104型萬分之一電子分析天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)；BT 25S型十萬分之一電子分析天平(賽多利斯上海貿易有限公司)；KQ5200D型超聲清洗器(江蘇省昆山市超聲儀器有限公司)；FW100型高速萬能粉碎機(天津市泰斯特儀器有限公司)。

甲醇(分析純，北京化工廠)；甲醇(色譜純，Fisher)；乙腈(色譜純，Fisher)；屈臣氏蒸餾水；對照品2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、反式-二苯乙烯苷、大黃素、大黃素甲醚、大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷購自中國藥品生物制品檢定所，純度均>98%，大黃素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷(上海源葉生物科技有限公司，純度>98%)。順式-二苯乙烯苷自制，參考文獻[11]方法，通過反式-二苯乙烯苷在紫外365 nm下轉化而得，純度>98%。

2年生何首烏塊根經北京中醫藥大學魏勝利教授鑒定為蓼科植物何首烏P.multiflorumThumb.的塊根。

1.2 方法

1.2.1樣品處理 設置陰干、自然晾曬、真空干燥、微波干燥、40 ℃烘干、50 ℃烘干、60 ℃烘干、70 ℃烘干、80 ℃烘干9個處理，每個處理重復3次。

選取大小均一何首烏塊根10個，切成邊長為5 cm的方塊，混合均勻后隨機分為6組。其中1組直接切制成厚度為1 cm的片，置于50 ℃烘箱烘至干燥，不發汗處理。其余5組置于50 ℃烘箱，分別烘5、10、20、25 、30 h后取出，再發汗48 h，最后切制成厚度為1 cm的片50 ℃烘至干燥。

1.2.2含量測定 參考李雨萌等[12]HPLC一測多評法，對何首烏中的反式二苯乙烯苷、順式二苯乙烯苷、大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黃素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黃素、大黃素甲醚6個成分進行含量測定，對照品和供試品溶液HPLC圖見圖1。

注：A.對照品溶液；B.供試品溶液；1.順式二苯乙烯苷；2.反式二苯乙烯苷；3.大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷；4.大黃素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷；5.大黃素；6.大黃素甲醚。圖1 對照品和供試品溶液的HPLC圖

1.2.3統計分析 所有數據均采用Microsoft Excel software 2010及SPSS 19.0統計軟件進行統計分析。采用單因素方差分析(ANOVA)對Duncan′s進行單因素檢驗，其中P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果與分析

2.1 不同干燥方式對何首烏質量成分的影響

據表1、圖2的何首烏不同干燥方式活性成分含量比較可知，曬干和陰干能使順、反式二苯乙烯苷、大黃素苷、大黃素、大黃素甲醚等成分含量維持在較高水平，但曬干的何首烏中大黃素和大黃素甲醚2種游離蒽醌含量較低。真空干燥和微波干燥時順、反式二苯乙烯苷含量均較低。真空干燥時大黃素苷含量較低而大黃素含量較高，微波干燥結果與之相反，大黃素甲醚苷含量較高、大黃素甲醚含量較低。在烘干的干燥方式中，隨著烘干溫度升高何首烏大黃素苷含量降低、大黃素含量升高，以60、70 ℃烘干為例，70 ℃烘干比60 ℃烘干大黃素苷含量降低了20.77%、大黃素含量升高了60.56%。反式二苯乙烯苷隨溫度升高有較弱的下降趨勢，而順式二苯乙烯苷未有明顯規律。

表1 何首烏不同干燥方式活性成分質量分數 %

注：*P<0.05；**P<0.01。

注：A.順式二苯乙烯苷；B.反式二苯乙烯苷；C.2種結合蒽醌；D.2種游離蒽醌。圖2 何首烏不同干燥方式活性成分質量分數比較圖

2.2 發汗前不同烘干時間對何首烏質量成分的影響

據表2、圖3可知，隨發汗前烘干時間的增加，何首烏中呈現出順式二苯乙烯苷和大黃素含量逐漸升高、而反式二苯乙烯苷和大黃素苷含量逐漸降低的趨勢，大黃素甲醚、大黃素甲醚苷無顯著規律變化。蒽醌類成分尤其是大黃素苷和大黃素比二苯乙烯苷類含量受發汗前烘干時間影響更為顯著。以發汗前烘10、20 h為例，大黃素苷在樣品烘20 h后發汗烘干時比烘10 h后發汗烘干時含量下降了74.71%，而反式二苯乙烯苷此時含量僅下降了9.30%；大黃素在樣品烘20 h后發汗烘干時比烘10 h后發汗烘干時含量升高了74.88%，而順式二苯乙烯苷此時含量僅升高了34.28%。

3 結論與討論

根據張樂等[8]的研究結果，將順式二苯乙烯苷含量低于0.1%作為何首烏加工的安全限度，不同干燥方式和發汗前不同烘干時間的何首烏均能達到安全限度，在保障安全性的基礎上進行基于初加工技術的不同類型何首烏定向加工研究。高含量反式二苯乙烯苷型何首烏定向加工方法為：將藥材置50 ℃條件下烘5～10 h，發汗，曬干或陰干。高含量結合蒽醌型何首烏定向加工方法為：將藥材置50 ℃條件下烘5～10 h，發汗，曬干。高含量游離蒽醌型何首烏定向加工方法為：將藥材置50 ℃條件下烘25～30 h，發汗，真空干燥、陰干或70～80 ℃烘干。

3.1 干燥方式及發汗前不同烘干時間對二苯乙烯苷類成分含量影響

曬干和陰干的何首烏中順、反式二苯乙烯苷含量較高，推測可能在適宜溫度尤其是有適宜光照的條件下，何首烏中含有的可促使二苯乙烯苷合成的相關酶系活化，產生酶促效應使順、反式二苯乙烯苷的量增加。真空干燥和微波干燥時順、反式二苯乙烯苷含量均較低，文獻報道二苯乙烯苷類熱穩定性較差[13]，推測微波加熱瞬時的高溫會對二苯乙烯苷類成分產生破壞，真空干燥同時有高溫和含水量迅速降低雙重因素的影響，影響相關酶促效應的發生使反式二苯乙烯苷類含量更低。發汗前不同烘干時間實驗的結果也證明了含水量對二苯乙烯苷類的影響，發汗前何首烏含水量越大順、反式二苯乙烯苷含量越低，而反式二苯乙烯苷含量越高。

表2 何首烏發汗前不同烘干時間活性成分質量分數 %

注：*P<0.05；**P<0.01。

注：A.順式二苯乙烯苷；B.反式二苯乙烯苷；C.2種結合蒽醌；D.2種游離蒽醌。圖3 何首烏發汗前不同烘干時間活性成分質量分數比較圖

3.2 干燥方式及發汗前不同烘干時間對蒽醌類成分含量影響

蒽醌類成分含量受干燥方式的影響較為明顯。結合蒽醌含量以曬干方式最高，陰干次之，而游離蒽醌則以陰干方式含量最高。據報道，何首烏在干燥過程中結合蒽醌易被酶水解，陰干的溫度適合水解酶發揮作用，結合型蒽醌的分解率高于曬干方式，所以導致結合型蒽醌的含量降低，游離蒽醌的含量升高[14]。曬干時的光照可能破壞水解酶活性，從而降低結合型蒽醌向游離型蒽醌的轉化率，最終導致降低游離型蒽醌的含量。

3.3 何首烏定向加工的研究前景

反式二苯乙烯苷、結合型蒽醌和游離型蒽醌是何首烏中的3類主要活性成分。現代藥理研究表明，反式二苯乙烯苷具有抗衰老、調節免疫、提高記憶力、抗血小板凝集等多種活性[2，15]，部分游離蒽醌有誘導癌細胞凋亡、逆轉腫瘤多藥耐藥性、抑制金黃色葡萄球菌生長等藥理活性[16-17]，結合蒽醌有較強的瀉下作用[18]，該3類成分可能分別與補肝腎強筋骨、解毒截瘧和潤腸燥的功效相關聯。高含量反式二苯乙烯苷型何首烏可能更側重補益功效；高含量結合蒽醌型何首烏可能更側重潤腸燥作用；高含量游離蒽醌型何首烏可能有解毒截瘧的作用趨勢。隨著何首烏毒性及功效物質基礎的進一步研究和“精準醫學” “精準藥材”的發展，何首烏的定向加工將有望對臨床中藥的使用產生更加重要的作用。當然，本研究僅基于對何首烏生品的部分初加工技術進行討論，定向加工對何首烏藥效的影響仍需大量藥理和臨床試驗驗證。