注射用奧沙利鉑納米結構脂質載體凍干制劑的制備工藝優選

晉苗苗

【摘要】目的：優化注射用奧沙利鉑納米結構脂質載體凍干制劑的制備工藝。方法：以單因素試驗法優化注射用奧沙利鉑納米結構脂質載體凍干制劑的處方工藝，并分析此制劑的穩定性。結果：優選的成型工藝以5%甘露醇溶液為凍干保護劑，而且凍干后的制劑Zeta電位、粒徑、藥物包封率與凍干前相比無明顯變化。結論：在優選的處方和凍干工藝條件下制備注射用奧沙利鉑納米結構脂質載體凍干制劑穩定可行，可推廣應用。

【關鍵詞】奧沙利鉑納米結構脂質載體;凍干制劑;制備工藝

奧沙利鉑屬于第3代鉑類化合物，為臨床治療惡性腫瘤的主要化療藥物，與紫杉醇、吉西他濱、卡培他濱、培美曲塞、氟尿嘧啶等具有良好的協同增強作用。在臨床上，奧沙利鉑的抗癌譜較為廣泛，但藥物副作用較大。納米結構脂質載體為一種新型的靜脈給藥制劑，可控制藥物釋放，在不影響藥效的同時還可降低毒性[1]。然而，奧沙利鉑在溶液中極易被水解，故當奧沙利鉑納米結構脂質載體以水為分散劑的形式儲存時，此藥的膜材料容易被氧化而影響藥物制劑的穩定性，不利于貯存、運輸及其治療應用[2]。鑒于此，筆者所在單位以甘露醇為凍干保護劑，優化制備工藝，將奧沙利鉑納米結構脂質載體制備成凍干制劑，使此藥以固態形式貯藏，保障藥物的質量，具體過程報道如下。

1 實驗儀器和藥物

1.1 實驗儀器 美國貝克曼Optima MAX-XP臺式微量超速冷凍離心機;上海盧湘儀TG16-WS（LCD）臺式高速離心機;上海舜制儀器LGJ18-C真空冷凍干燥機;賽多利斯BS110S電子天平。

1.2 實驗藥物 奧沙利鉑;大豆磷脂（供注射用）;蓖麻油聚氧乙烯醚;甘露醇;單硬脂酸甘油酯;無水乙醇;甲醇;中鏈甘油三酸酯。

2 實驗方法和結果

2.1 制備奧沙利鉑納米結構脂質載體[3] 根據處方中各個成分含量要求，稱取奧沙利鉑、大豆磷脂、單硬脂酸甘油酯、甘油三酸酯，將其放在水中加熱熔融，水溫維持60～80℃，作為油相。與此同時，稱取適量蓖麻油聚氧乙烯醚，添加適量注射用水，加熱維持到60～80℃，作為水相。然后，一邊攪拌一邊將水相液體加入到油相中制作成初乳。經超聲細胞粉碎機處理后放在冰水中冷卻制作成奧沙利鉑納米結構脂質載體混懸液。

2.2 選擇合適的凍干保護劑 取適量奧沙利鉑納米結構脂質載體混懸液，分別在其中加入甘露醇、葡萄糖、蔗糖凍干保護劑，并以不添加保護劑的樣本作為陰性對照品。通過觀察制劑的外觀、再分散時間以判斷各種凍干制品對藥物的保護作用。結果顯示，選用甘露醇作為凍干保護劑制備的凍干產品保護效果最好，其外觀致密、光滑，再分散時間為6min，復溶迅速。其余凍干保護劑制得的產品外觀萎縮或有氣泡，影響藥物結構。

2.3 篩選凍干保護劑的用量 選擇2%甘露醇、5%甘露醇、10%甘露醇作為凍干保護劑進行實驗，觀察其制備的凍干產品保護效果（操作方法與“2.2”相同）。結果顯示，選擇2%甘露醇作為凍干保護劑制備的凍干產品復溶速度雖快，但產品外觀出現萎縮;選擇10%甘露醇其在凍干制備過程中有“噴瓶”情況，難以復溶，故選擇5%甘露醇更為合適。

2.4 篩選凍干體積 量取2ml經2倍超濾濃縮的樣品和2ml未經濃縮的樣品于10ml西林瓶中，分別添加5%甘露醇，依次放在冷凍干燥機中處理。隨后用水復溶，測定藥物粒徑。結果顯示：經超濾濃縮的樣本復溶后出現多個雜峰，粒徑變寬，更有達到微米級的大粒子存在。因此，奧沙利鉑納米結構脂質載體無需經濃縮處理，可直接進行凍干制備，其產品的粒徑符合靜脈注射要求。

2.5 明確凍干工藝 根據上述明確的條件以及冷凍干燥制備的基本原理，最終明確凍干制劑制備工藝具體如下：取奧沙利鉑納米結構脂質載體混懸液，添加5%甘露醇，經直徑為0.22μm的微孔濾膜過濾除菌，放在冷凍干燥機中先進行預凍處理12h，隨后讓制劑在真空下自然升溫升華，持續10小時，取出制劑加蓋密封。

2.6 評價凍干產品的制備效果

2.6.1 凍干產品形態 取適量已制成的奧沙利鉑納米結構脂質載體凍干制劑，加注射用水復溶稀釋，經過濾、染色處理后，自然干燥，在電鏡下觀察凍干制劑的形態。結果發現，奧沙利鉑納米結構脂質載體未進行凍干處理前的形態結構呈圓形，粒子之間分散均勻，見圖1;而經凍干處理后的制劑粒子分散較好，只有少數粒子之間略有黏連，見圖2。

2.6.2 凍干制劑的粒徑 經測定，奧沙利鉑納米結構脂質載體凍干制劑復溶后的產品粒徑（121.03±18.41）nm，較凍干處理前的（118.56±20.33）nm略有變大，但差異不明顯。

2.6.3 凍干制劑的Zeta電位 凍干前的奧沙利鉑納米結構脂質載體的Zeta-15.9mV，凍干處理后的Zeta電位-15.2mV，無顯著的差異。

2.6.4 凍干制劑的包封率 未進行凍干前，奧沙利鉑納米結構脂質載體的包封率為70.2%，凍干處理后的包封率68.9%，提示經凍干處理后藥物制劑的包封率無明顯改變，可滿足藥物實際需求。

2.6.5 凍干制劑的穩定性 將凍干制劑在常溫下保存3個月，結果顯示，保存第1個月、2個月、3個月的制劑外觀無顯著變化，平均粒徑依次為（121.21±18.59）nm、（121.95±18.01）nm、（122.03±17.84）nm，包封率依次為68.6%、68.4%、68.3%，提示凍干制劑的穩定性良好。

3 討論

凍干保護劑，又稱為骨架支撐劑，主要是用于維持納米結構脂質載體的微觀結構穩定，使粒子之間不容易出現聚集黏連。甘露醇結構上的羥基可與粒子表面的基團結合形成氫鍵，其在脫水中能夠代替水的作用，阻止粒子聚集，故應用甘露醇作為凍干保護劑可獲得外觀致密光滑、復溶迅速的制劑。與此同時，本研究經單因素試驗后發現，在優選的處方和凍干工藝條件下制備的注射用奧沙利鉑納米結構脂質載體凍干制劑穩定可行，符合制備要求，可推廣應用。

參考文獻：

[1] 魏曉慧，徐宇虹.脂質體納米藥物的“成分-結構-性質”關系研究[J].中國醫藥工業雜志，2019，50（10）：1126-1135.

[2] 曾春穎，陸蕭筠，梅興國.奧沙利鉑溶液的水解氧化機制及穩定性研究進展[J].中國藥學雜志，2013，48（5）：326-330.

[3] 王健昭，李亞楠，熊曄蓉，等.奧沙利鉑脂質體的制備及體外釋藥研究[J].藥學研究，2016，35（4）：217-221，225.