酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法與甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)法檢測梅毒螺旋體感染的臨床價(jià)值

宋勝偉，曾茜茜

1 萬載縣疾病預(yù)防控制中心 （江西宜春 336100）；2 萬載縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 （江西宜春 336100）

梅毒主要由梅毒螺旋體（treponema palludim，TP）感染所致，具有危害大、傳染性強(qiáng)等特點(diǎn)，常見的傳播方式為血液傳播、性行為傳播、胎盤垂直傳播等；另外，該疾病臨床癥狀復(fù)雜，早期多于生殖器官上出現(xiàn)硬下疳，并隨著臨床分期加重，病原體隨血液循環(huán)向全身擴(kuò)散，逐漸侵襲體內(nèi)多器官，威脅患者的生命健康[1]。目前，臨床對(duì)于梅毒患者以早確診、早治療為主要原則，血清學(xué)檢測是臨床診斷梅毒的常用方法，主要包括甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（tolulized red unheated serum test，TRUST）法、梅毒螺旋體明膠顆粒凝聚試驗(yàn)（treponema pallidum particle assay，TPPA）法、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）法等[2]。其中TPPA 是臨床診斷準(zhǔn)確性高的方法，但費(fèi)用高，應(yīng)用具有一定的局限性，難以作為常規(guī)篩查項(xiàng)目；TRUST 法是常見的診斷方法，適用于大樣本篩查，但特異性差，易出現(xiàn)較高的假陽性、假陰性[3]；ELISA法操作簡單、靈敏度高，在梅毒檢測中具有良好的特異性，逐漸受到臨床廣泛關(guān)注[4]。本研究探討ELISA 法與TRUST法檢測TP 感染的臨床價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年7月至2019年7月于我院就診的疑似TP 感染患者86例作為研究對(duì)象，其中男49例，女37例；年齡24～62歲，平均（39.54±6.78）歲。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）存在硬下疳、淋巴結(jié)腫大、生殖器四周出現(xiàn)丘疹等；（2）臨床資料完整；（3）患者及其家屬均對(duì)本研究知情并自愿簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）伴有其他嚴(yán)重血液或代謝性疾病的患者；（2）合并惡性腫瘤的患者；（3）有肝腎功能障礙的患者。

1.2 方法

所有患者均于清晨抽取空腹靜脈血5 ml，并于常溫下靜置5 min 后離心取得上清液，使用ELISA 法及TRUST 法檢測；儀器選用上海天呈科技有限公司生產(chǎn)的ST-360酶標(biāo)儀，深圳市匯松科技有限公司提供的PW-960洗板機(jī)、微量加樣器。

兩種檢測方法均嚴(yán)格按照試劑盒操作說明進(jìn)行，具體如下。（1）ELISA 法：于包被板條孔中加入50 μl 待測標(biāo)本，并設(shè)立空白、陰性及陽性對(duì)照，溫度保持在37 ℃以下溫育1 h；將酶標(biāo)記物分別加入陰性及陽性對(duì)照孔，各50 μl，混勻后溫度保持在37 ℃以下溫育0.5 h；洗板后，將底物緩沖液分別加入各孔，各50 μl，混勻后溫度保持在37 ℃以下溫育0.5 h，并將終止液分別加入各孔混勻，各50 μl；等待酶標(biāo)儀顯示數(shù)據(jù)。（2）TRUST 法：于卡片圈內(nèi)放置50 μl 血清，整圈涂勻；搖勻抗原液后，使用試劑盒自帶的針頭加入1滴抗原液；于立體脫色搖床上放置卡片，以100 r/min 速度振蕩搖勻，時(shí)間設(shè)定為8 min，在亮光下觀察結(jié)果。

1.3 臨床評(píng)價(jià)

以TPPA 作為診斷金標(biāo)準(zhǔn)，評(píng)估ELISA 法與TRUST 法對(duì)TP 的診斷效能。（1）比較兩種檢測方法的陽性檢出率。（2）比較兩種檢測方法靈敏度、特異度及準(zhǔn)確度。靈敏度=真陽性/（真陽性+假陰性）×100%；準(zhǔn)確度=（真陽性+真陰性）/總例數(shù)×100%；特異度=真陰性/（假陽性+真陰性）×100%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種檢測方法陽性檢出率比較

86例疑似TP 感染患者中，經(jīng)TPPA 確診74例。ELISA法檢出陽性71例，陽性檢出率為82.56%；TRUST 法檢出陽性59例，陽性檢出率為68.60%。ELISA 法陽性檢出率高于TRUST 法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.536，P=0.033）。

2.2 兩種檢測方法靈敏度、特異度及準(zhǔn)確度比較

ELISA 法靈敏度、準(zhǔn)確度均高于TRUST 法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；兩種檢測方法特異度比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1～2。

表1 兩種方法檢出結(jié)果比較（例）

表2 兩種方法靈敏度、特異度及準(zhǔn)確度比較（%）

3 討論

近年來，梅毒發(fā)病率逐年增長，已成為世界廣泛關(guān)注的健康問題。梅毒傳染性強(qiáng)、潛伏期長，潛伏期及Ⅱ期患者臨床癥狀不明顯，多為皮膚表現(xiàn)，易被患者忽略，而梅毒患者感染艾滋病概率是健康人群的5倍以上，因此，加強(qiáng)TP 檢測尤為重要[5]。近年來，血清學(xué)檢測應(yīng)用較為廣泛，具有操作簡單、重復(fù)性高的優(yōu)勢，且感染患者2周左右即可出現(xiàn)血清學(xué)反應(yīng)，適用于大面積篩查[6]。目前，臨床血清學(xué)檢測方法較多，每種方法均具有一定臨床價(jià)值，如何選取靈敏度、準(zhǔn)確度更高的檢測方式成為臨床研究的重點(diǎn)。

TPPA 是敏感性及特異性均較高的檢測方法，具有良好的診斷準(zhǔn)確性，但受試劑價(jià)格限制，難以在臨床廣泛應(yīng)用，無法作為常規(guī)篩查項(xiàng)目。TRUST 法是臨床常用的血清學(xué)檢測方式，試劑價(jià)格低廉、操作簡便，且檢測時(shí)間短，可測定抗體滴度，適用于早期診斷及評(píng)估預(yù)后效果[7]；該方法通過在甲苯胺紅溶液內(nèi)置入性病研究實(shí)驗(yàn)室（venereal disease research laboratorytest，VDRL）抗原煉制而成，主要檢測患者血清中的反應(yīng)素，因此，檢出結(jié)果迅速。但患者TP 感染4～10周左右，血清內(nèi)出現(xiàn)部分特異性或非特異性抗體，且治療后血清內(nèi)非特異性抗體會(huì)向陰性轉(zhuǎn)化，致使TRUST 法敏感性較差，在潛伏期、Ⅰ期、Ⅲ期檢測中效果欠佳，不利于臨床診療[8]。本研究結(jié)果顯示， ELISA 法陽性檢出率高于TRUST 法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；ELISA 法靈敏度及準(zhǔn)確度均高于TRUST 法，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；兩種檢測方法特異度比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；表明ELISA 法用于TP 感染檢測中的臨床價(jià)值顯著，陽性檢出率、靈敏度及準(zhǔn)確度高。ELISA 法原理是雙抗原夾心及酶聯(lián)免疫吸附法，對(duì)TP 特異性抗原具有重組作用，純度高；該方法主要通過對(duì)梅毒免疫球蛋白M（IgM）及免疫球蛋白G（IgG）混合抗體進(jìn)行檢測，敏感性及特異性高，且可進(jìn)行多份樣本檢測，更加方便快捷，并通過酶標(biāo)儀判斷結(jié)果，數(shù)據(jù)更具有客觀性[9]；同時(shí)，ELISA 法檢測后，數(shù)據(jù)可于計(jì)算機(jī)內(nèi)長期保存，便于輸血后感染責(zé)任界定。但ELISA 法仍存在一定不足，因梅毒特異性抗體出現(xiàn)早、消失慢，治療后仍可檢測出，若出現(xiàn)特定情況，ELISA 法檢測呈終身檢出狀態(tài)，不適用于療效判定；此外，ELISA 法具有一定假陽性、假陰性，主要因?yàn)門P 侵入人體后，梅毒抗體表面抗原會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生刺激作用，合成TP 特異性抗體，但部分患者血清內(nèi)存在內(nèi)源性物質(zhì)，從而影響檢測結(jié)果；另外，抗原與抗體間會(huì)出現(xiàn)交叉反應(yīng)，產(chǎn)生非特異性吸附能力，使得假陽性出現(xiàn)[10]。由此可見，TRUST 法適用于預(yù)后療效評(píng)估，ELISA 法適用于大范圍篩查及診斷，將兩種檢測方法聯(lián)合應(yīng)用，可結(jié)合各自優(yōu)點(diǎn)，提高臨床診斷準(zhǔn)確性，利于評(píng)估預(yù)后效果。

綜上所述，ELISA 用于檢測TP 感染的陽性檢出率、靈敏度及準(zhǔn)確度均高于TRUST 法，可提高診斷準(zhǔn)確性。