熒光PCR溶解曲線法檢測結核分枝桿菌氟喹諾酮類藥物突變的臨床應用價值

鄒遠嫵 王婷 李王平

中國是耐藥結核病高負擔國家，低治愈率、高死亡率是耐藥結核病的治療難點。WHO將氟喹諾酮類藥物列為A類核心藥物，用于治療耐多藥結核病[1]，在我國因該類藥物較易獲得，故被廣泛應用。導致近年來該藥耐藥率逐漸上升。可靠的藥物敏感性試驗(drug sensitivity test,DST)結果是耐藥結核病實施化學治療的基礎[2]。耐藥結核病的診斷主要依靠細菌耐藥表型檢測和基因型檢測，表型檢測法可靠性和可重復性較好[3]，但其或檢測周期長，或費用高。隨著分子生物技術的發展，以及近年來對結核分枝桿菌 (Mycobacterium tuberculosis,MTB)耐藥機制的深入研究，通過檢測MTB耐藥基因突變快速診斷耐藥結核病成為可能。國內大多文獻只報道MTB對一線抗結核藥物突變的檢測，對二線抗結核藥物耐藥突變研究多因病例少，代表性差[4]。本研究應用溶解曲線法檢測MTB臨床分離株對二線抗結核藥物氟喹諾酮類藥物的耐藥突變，以評價溶解曲線法在耐藥結核病診治中的應用價值。

資料與方法

一、菌株來源

收集本實驗室經臨床患者痰液分枝桿菌液體培養陽性并鑒定為MTB臨床分離株555株，同時進行熒光 PCR 溶解曲線法和羅氏藥物敏感試驗檢測其對氟喹諾酮類藥物耐藥情況，以羅氏藥敏法為金標準，對檢測結果進行統計分析。

二、檢測方法

1、分離培養，儀器及配套試劑和MGIT培養管均來自美國BD公司，臨床標本按要求進行前處理后接種到MGIT培養管，并將其放入Bactec MGIT 960 分枝桿菌液體培養系統進行孵育。……