糖漿劑和合劑中防腐劑限量檢查方法的研究

(荊州市食品藥品檢驗所,湖北荊州 434000)

糖漿劑和合劑是藥物以一定形式分散于液體介質中所制成的供口服的液體分散體系。具有分散度大，吸收快；易于分劑量，服用方便；減少某些藥物的刺激性等優點。是應用廣泛的制劑類型。糖漿劑和合劑可能由于制劑和使用過程引入污染源，加入防腐劑是最為方便有效的措施。然而超量使用防腐劑存在中毒、致癌等健康風險，中國藥典2015版四部制劑通則中糖漿劑和合劑明確規定了苯甲酸和山梨酸用量不得過0.3%，羥苯酯類用量不得過0.05%[1]。本方法旨在采用高效液相色譜法限量檢測糖漿劑和合劑中的苯甲酸、山梨酸、羥苯甲酯、羥苯乙酯、羥苯丙酯和羥苯丁酯。

1 儀器與試劑

高效液相色譜儀：Thermo Ultimate3000；對照品苯甲酸（北京壇墨質檢科技有限公司，批號A1707298）、山梨酸（中國食品藥品檢定研究院，批號190126-201501）、羥苯甲酯（中國食品藥品檢定研究院，批號100278-201404）、羥苯乙酯（中國食品藥品檢定研究院，批號100847-201203）羥苯丙酯（中國食品藥品檢定研究院，批號100444-201403）、羥苯丁酯（中國食品藥品檢定研究院，批號110792-200503）；甲醇為色譜純，水為重蒸水，其余試劑為分析純；陰性樣品由實驗室自制；樣品來源于本所日常檢驗之樣品。

2 方法與結果

2.1 混合對照品溶液的制備

精密稱取苯甲酸、山梨酸、羥苯甲酯、羥苯乙酯、羥苯丙酯和羥苯丁酯對照品，加流動相B制成每1ml分別含苯甲酸60μg、山梨酸60μg、羥苯甲酯10μg、羥苯乙酯10μg、羥苯丙酯10μg、羥苯丁酯10μg的混合對照品溶液。

2.2 供試品的制備

精密量取樣品1ml，加濃鹽酸200μl振搖后用乙醇定容至50ml，振搖后靜置，取上清液過0.45μm濾膜濾過，取續濾液，即得。

2.3 色譜條件

色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱(5μm 4.6×250mm)；流動相：以甲醇為流動相A，0.02mol/L醋酸銨（含0.2%甲酸）-甲醇（85∶15）為流動相B；按表1梯度洗脫；流速：1.0ml·min-1；柱溫：40℃；檢測器：二極管陣列檢測器；檢測波長：228nm、256nm；進樣量20μl。

2.4 專屬性考察

取樣品和陰性樣品，按2.2項下方法處理。分別取混合對照品溶液、樣品溶液和陰性對照樣品20μl注入高效液相色譜儀，照2.3項下色譜條件檢測。從色譜圖可見該方法的專屬性較好，色譜圖見圖1、2。

2.5 檢測限考察

以對照品溶液進樣，信噪比為3∶1時的確定進樣量4ng為檢測限。

圖1 228nm高效液相色譜圖

圖2 256nm高效液相色譜圖

表1 梯度洗脫條件

表2 穩定性考察

表3 實驗結果

2.6 穩定性考察

取對照品溶液，分別在0、2、4、6、8、10小時時測定其峰面積，結果表明在10小時內各成分有較好的穩定性，結果見表2。

2.7 樣品限量檢查

取本所日常檢驗之19批次樣品按2.2項下處理，按2.3項下方法檢測限量，檢測結果根據中國藥典2015版四部制劑通則中糖漿劑和合劑限量規定判定，實驗結果見表3。

3 討論

3.1 色譜條件的選擇

檢測波長：考慮苯甲酸、山梨酸、羥苯甲酯、羥苯乙酯、羥苯丙酯和羥苯丁酯最大吸收波長差別較大且山梨酸、羥苯甲酯、羥苯乙酯、羥苯丙酯和羥苯丁酯最大吸收波長時苯甲酸響應值較小不適宜計算，綜合考慮選擇雙波長（228nm、256nm）一次檢測。流動相：經預試驗，在流動相加入醋酸有助于改善苯甲酸、山梨酸、羥苯甲酯的峰形和分離度。將0.02mol/L醋酸銨（含0.2%甲酸）與甲醇（85∶15）預先混合的目的是為了避免醋酸銨在梯度洗脫中因為有機相變化比例太大對儀器和色譜柱造成影響。流動相的梯度比例和時間是經過大量的預試驗最終確定的，主要是考慮大部分樣品在前20分鐘有大量的雜峰出現以及讓山梨酸和羥苯甲酯達到最佳分離度，而本研究過程中的難點也是山梨酸和羥苯甲酯的分離度。

3.2 小結

采用本方法檢測本單位日常抽檢之樣品，19批次中竟有15批次防腐劑用量超出限量，而中國藥典2015年版只對糖漿劑和合劑中防腐劑使用種類和用量做出了限制性規定，卻沒有提供法定的檢測方法，給目前的檢測工作帶來極大困擾。本方法在參考其他現行行業標準[2，3]的基礎上采用HPLC梯度洗脫的方法將糖漿劑和合劑中的限定使用的6種防腐劑成功分離，經驗證專屬性、耐用性好，檢出限滿足限量要求，適用于日常檢驗工作，為糖漿劑、合劑及其他液體制劑生產過程中質量控制和產品檢測提供了方法。