miR-3662在膽囊癌組織中的表達(dá)及對(duì)膽囊癌細(xì)胞增殖的影響

蔡煒龍 余勝 汪偉民 樓能

膽囊癌是膽道系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一[1-2]。由于缺乏早期臨床表現(xiàn)，膽囊癌患者確診時(shí)往往已是中晚期，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移發(fā)生率高，失去根治性手術(shù)機(jī)會(huì)，預(yù)后差[3]。因此，尋求新的膽囊癌診療靶點(diǎn)尤為重要。miRNA是一類非編碼小RNA分子，幾乎參與了細(xì)胞生命周期的全過(guò)程，可作為轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)因子調(diào)控靶基因的表達(dá)[4-6]。目前有研究表明，miR-3662在急性白血病、黑色素瘤及肝癌等惡性腫瘤中異常表達(dá)，并在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著重要作用[7-9]。本研究擬通過(guò)檢測(cè)miR-3662在人膽囊癌組織中的表達(dá)水平，并觀察其對(duì)人膽囊癌細(xì)胞增殖能力的影響，從而探討miR-3662作為膽囊癌新的治療靶點(diǎn)的可能性，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料和方法

1.1 主要材料和試劑 30對(duì)人膽囊癌組織及其癌旁組織標(biāo)本源自2015年至2019年本院普外科接受手術(shù)治療、并經(jīng)術(shù)后病理證實(shí)為原發(fā)性膽囊癌的30例患者；SPF級(jí)BALB/c雄性裸鼠8只，4～6周，體重（25.67±3.47）g，購(gòu)于中國(guó)科學(xué)院上海動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。人膽囊癌細(xì)胞株GBC-SD和SGC-996由中國(guó)科學(xué)院上海生命研究院細(xì)胞資源中心提供，DMEM培養(yǎng)基和FBS購(gòu)于美國(guó)Gibco公司，miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒和實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRTPCR）試劑盒購(gòu)于大連Takara公司，miR-NC和miR-3662購(gòu)于上海拓然生物科技有限公司，脂質(zhì)體2000（Lipofectamine 2000）購(gòu)于美國(guó)Invitroen公司，CCK-8試劑盒、結(jié)晶紫購(gòu)于上海碧云天生物科技有限公司。本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 人膽囊癌組織及其癌旁組織中miR-3662相對(duì)表達(dá)量檢測(cè) 采用qRT-PCR法。研磨膽囊癌組織及其癌旁組織，加入Trizol提取組織或細(xì)胞的總RNA，檢測(cè)RNA的濃度和純度；……