玉環剪豆地方性種質資源鑒定評價

沈文英 屠昌鵬 陳涵豐 龔 芬 王建軍

（1.浙江省玉環市農業農村和水利局，浙江 玉環317600；2.浙江省農業科學院作物與核技術利用研究所，浙江 杭州310021）

玉環剪豆是一種軟莢豌豆，為浙江省玉環市地方特色蔬菜品種，在當地種植歷史悠久，因使用剪刀采收豆莢而得名。玉環剪豆的嫩莢色澤翠綠，口感清脆，鮮美爽口，可炒食、做菜飯，且熟性強。玉環剪豆生長勢強，適應性廣，易種植（不用搭支架），秋末采收上市，可填補蔬菜市場供應淡季，經濟效益較高。收獲后殘留的豆莢莖和葉可用作飼料或綠肥。

1 特征特性

玉環剪豆根系發達，可深入土壤層1 m以下，有根瘤菌；莖半直立，偶爾發生分枝，莖長約1 m、圓形中空；葉互生為羽狀復葉，小葉2～3對，頂端呈卷須狀，葉柄與莖交界處有2片托葉，葉片表面有明顯不規則白色斑點及蠟粉；始花一般在主蔓上，花蝶形紫紅色，每節葉腋獨立，葉腋花青斑明顯；主蔓可生10個莢以上，豆莢扁長綠色、長寬比為5∶1，平均莢長6 cm、寬1.2 cm；嫩莢百莢重約150 g，腹側縫隙兩側單行，鮮莢壁較其他剪豆品種薄，熟豆莢干縮，種子呈皺粒狀，種皮有小褐色斑點，千粒重為232.15 g。

2 栽培要點

玉環剪豆播種期和鮮莢采摘期較長，玉環地區8月至翌年1月均可播種。10月份播種，翌年1月開始開花，嫩豆一直可采收至4月份，嫩莢產量300～400 kg/667 m2，高的可達500 kg/667 m2以上；8月上旬播種，10月份開始采收豆莢，采收至翌年2～3月，可采收10次以上。播種早，采收豆莢批次多，產量高。若肥水供應充足，植株基部可再抽生分枝，分枝可繼續結莢，有利于延長豆莢采收期和提高豆莢產量。玉環剪豆主要以嫩莢供食用，嫩莢自下而上逐漸成熟，需及時采收。一般開花后10 d左右，莢壁微凸、籽粒還沒完全發育時采摘（每3 d采收1次），此時莢色嫩綠，莢殼肥嫩，品質最佳。采摘過早產量低，采摘過晚則籽粒中淀粉含量增高，鮮味下降。嫩莢采收后不可長時間置于袋子內，以免嫩莢因呼吸作用變色而降低商品性[1]。

3 DNA指紋圖譜構建

為鑒定與評價玉環剪豆與其他剪豆品種的差異性，顯示其地方特色，我們選擇在玉環地區具有較大影響力的其他剪豆品種大溪剪豆與玉環剪豆進行DNA指紋圖譜構建。

3.1 材料與方法

3.1.1 試驗材料

供試材料為大溪剪豆、玉環剪豆。

3.1.2 試驗方法

（1）基因組DNA提取：取適量玉環剪豆和大溪剪豆幼嫩葉片，采用CTAB-氯仿-異戊醇法提取剪豆基因組DNA（Liueta1.，2007）。（2）PCR與產物檢測：剪豆PCR反應體系20μL，包括模板DNA（10 ng/μL）2.0μL，10×buffer 2.0μL、dNTPs（10 mmol/L）2.0μL、primer（10 mmol/L）1.0μL、TaqPloymerase（2 U/μL）0.5μL、ddH2O 12.5μL。PCR反應程序為94℃5 min、94℃45 s、51℃45 s、72℃1.5 min，共35循環；72℃10 min，16℃保存。跑電泳時，瓊脂糖膠濃度為2.5%。

3.2 凝膠電泳結果與分析

利用6對ISSR標記引物（6對ISSR標記引物序列見表1）對玉環剪豆和大溪剪豆基因組DNA進行PCR擴增鑒定[2～4]。擴增鑒定結果見圖1（每對ISSR標記左側條帶為玉環剪豆，右側為大溪剪豆）。

表1 6對ISSR標記引物信息

圖1 6對ISSR標記對玉環剪豆和大溪剪豆的擴增結果

由圖1（凝膠電泳結果）可知，6對ISSR標記引物對玉環剪豆和大溪剪豆基因組DNA擴增后均表現出差異。其中UBC 807和UBC 825標記在玉環剪豆中擴增出1條帶，而在大溪剪豆中擴增出2條帶；UBC 8和UBC 861在玉環剪豆中擴增出2條帶，而在大溪剪豆中擴增出1條帶；UBC 41和UBC 817在玉環剪豆中擴增出2條帶，而在大溪剪豆中未能擴增出相應的條帶。可見，利用以上6對ISSR標記可對玉環剪豆和大溪剪豆進行指紋圖譜鑒定。2個剪豆品種的DNA擴增結果顯示出其品種間的多態性差異，突出了玉環剪豆的地方品種特色。