艾葉揮發油體外抗菌試驗

李成賢 曹洪志

宜賓職業技術學院，四川宜賓 644003

艾葉是一種菊科多年生灌木狀草本植物艾的葉片，是常用中藥，因其具有藥源豐富、價格低廉、副作用小、安全性高等特點而被廣泛使用。目前，艾葉的應用采用湯劑、灸劑等傳統劑型較多，艾葉揮發油為艾葉的主要有效成分。為了更好地開發艾葉新產品，本試驗采用超聲波萃取方式提取艾葉揮發油，探討艾葉揮發油對大腸桿菌、雞白痢沙門氏桿菌體外抑菌效果，為艾葉在臨床上的抗菌作用提供一定的研究基礎[1]。

1 材料與方法

1.1 材 料

1）宜賓職業技術學院畜牧獸醫專業畜產品安全檢測實驗室提取的河南蘄艾艾葉揮發油。

2）選擇供試菌種和培養基：大腸桿菌、雞白痢沙門氏桿菌由宜賓職業技術學院畜牧獸醫專業微生物實驗室提供。

1.2 試驗主要儀器

無菌工作室、電子天平、離心機、無菌移液槍、培養箱、高壓蒸汽滅菌鍋、酒精燈、培養皿、鑷子、無菌濾紙、打孔機2-HOLE PUNCH、量筒、燒杯、直尺、剪刀、玻璃棒。

1.3 試驗主要試劑

營養瓊脂培養基、慶大霉素藥敏紙片、氟苯尼考藥敏紙片藥片（杭州微生物試劑有限公司提供）。

1.4 試驗方法

1）培養基及供試菌液的準備。制作供藥敏試驗用的營養瓊脂培養基；分別用麥康凱瓊脂培養基、HE 瓊脂培養基及營養瓊脂培養基對大腸桿菌、雞白痢沙門氏菌進行復蘇培養，并將復蘇后的菌種接種營養肉湯于37 ℃振蕩培養箱中進行4 h 增菌培養。

2）藥敏試驗。在無菌工作臺上用滅菌移液管吸取菌液2 mL 到營養瓊脂平板上，小心來回傾斜平板，使菌液均勻覆蓋過平板表面，然后傾斜平板，用移液管吸去多余菌液。在平板中貼3 張彼此有一定間距的濾紙紙片（Φ：5 mm），使3 張紙片的連線接近等邊三角形，然后在每張紙片中央用微量移液器加上等量艾葉提取物，置37 ℃恒溫培養箱中培養（每種菌做6 個梯度，每個梯度做3 個重復，并做相應對照，詳見表1）。

2 結果與分析

培養結束后，用直尺測定大腸桿菌、雞白痢沙門氏菌在加入艾葉提取物后抑菌圈的大小。

2.1 不同濃度艾葉提取物對大腸桿菌組抑菌作用的影響

從表2可以看出，大腸桿菌組抑菌圈大小隨艾葉提取物濃度的增加，抑菌圈呈增大的趨勢，5.00 μL/L 組抑菌圈大小平均為1.20 cm，2.50 μL/L 組抑菌圈大小平均為0.90 cm、1.25 μL/L 組抑菌圈大小平均為0.73 cm、0.60 μL/L 組抑菌圈大小平均為0.60 cm，空白、0.30、0.15 μL/L 組均未見抑菌圈，說明艾葉提取物抑菌效果隨濃度增加抑菌效果越明顯，量少沒有抑菌作用。與對照組中氟苯尼考抑菌圈（3.96 cm）、慶大霉素抑菌圈（2.13 cm）相比，5.00 μL/L 艾葉提取物抑菌的效果較弱。

2.2 不同濃度艾葉提取物對雞白痢沙門氏菌抑菌作用的影響

從表3可以看出，雞白痢沙門氏菌組抑菌圈大小隨艾葉提取物濃度的增加，抑菌圈呈增大的趨勢，5.00 μL/L 組抑菌圈大小平均為0.90 cm，2.50 μL/L組抑菌圈大小平均為0.70 cm，1.25 μL/L 組、0.60 μL/L組、空白、0.30 μL/L 組、0.15 μL/L 組均未見抑菌圈，說明艾葉提取物抑菌效果隨濃度增加抑菌效果越明顯，量少沒有抑菌作用。與對照組中氟苯尼考抑菌圈（0.73 cm）相比，5.00 μL/L 組抑菌效果較好，氟苯尼考抑菌圈大小同2.50 μL/L 組相當。與慶大霉素抑菌圈（2.13 cm）相比，5.00 μL/L 艾葉提取物抑菌的效果較弱。

2.3 相同濃度的艾葉提取物對不同菌種的抑菌作用

艾葉提取物5.00、2.50、1.25 μL/L 對大腸桿菌、雞白痢沙門氏菌2 種菌抑菌圈大小可見圖1～圖3。從圖中可以看出，艾葉提取物5.00、2.50 μL/L對大腸桿菌的作用較好、對雞白痢沙門氏菌次之。艾葉提取物1.25 μL/L 對雞白痢沙門氏菌沒有抑菌作用。

圖1 艾葉提取物5.00 μL/L 組對2 種菌的抑菌作用

表1 藥敏試驗處理

表2 大腸桿菌組抑菌圈大小

表3 雞白痢沙門氏菌組抑菌圈大小

圖2 艾葉提取物2.50 μL/L 組對2 種菌的抑菌作用

圖3 艾葉提取物1.25 μL/L 組對2 種菌的抑菌作用

2.4 對照組對不同菌種的抑菌作用

試驗過程中，大腸桿菌組、雞白痢沙門氏菌組選擇氟苯尼考和慶大霉素作對照，從圖4可以看出，氟苯尼考對大腸桿菌的作用較雞白痢沙門氏菌強；慶大霉素對大腸桿菌和雞白痢沙門氏菌作用相當；氟苯尼考對大腸桿菌的作用比慶大霉素好，慶大霉素對雞白痢沙門氏菌比氟苯尼考好。

圖4 對照組對2 種菌的抑菌作用

3 討 論

艾葉揮發油為艾葉的主要有效成分，研究發現，艾葉在體外對炭疽桿菌、甲型溶血性鏈球菌、乙型溶血性鏈球菌、白喉桿菌、肺炎雙球菌、金黃色葡萄球菌、枯草桿菌等均有抑制作用。李建明等[2]研究證實，艾葉提取物對黃瓜的保鮮作用有良好的抑菌效果。Ahameethuni-sa 等[3]研究發現，艾草提取物對大腸桿菌有抑制效果，而對金黃色葡萄球菌和糞腸球菌沒有作用。運用超聲波法提取艾葉的有效成分，能夠對常見病原菌金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌和大腸桿菌有較好的抑菌效果[4-5]。劉巍等[6]將艾葉用水提取，用其水提取液對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、肺炎雙球菌、表皮葡萄球菌、白色念珠菌的體外抗菌效果進行試驗研究，結果證明艾葉水煎液對這5 種致病菌均有明顯的抗菌作用。游思湘等[1]2011年采用水蒸汽蒸餾提取艾葉揮發油，得到淡黃色艾葉揮發油，提取率為0.65%。體外抑菌試驗結果表明，艾葉揮發油對炭疽桿菌抑制作用最強，對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌也有較強的抑菌作用，但對巴氏桿菌、鏈球菌、沙門氏菌的抑菌效果不明顯；盧學根[7]以自來水作溶劑得到艾葉提取液，該提取液對細菌的抑制效果較好，尤其對金黃色葡萄球菌的效果最好，對酵母菌的效果一般，對霉菌的效果不明顯。此外，該提取液MIC 為50%，在酸性環境中（pH 3～6）作用較好，但熱穩定性不好，經90 ℃以上、15 min 處理其抑菌作用不明顯。

本試驗也證實艾葉揮發性提取物體外對大腸桿菌、雞白痢沙門氏菌均有抑菌作用，提取物濃度越高，抑菌作用越明顯。但與慶大霉素、氟苯尼考對大腸桿菌和雞白痢沙門氏菌抑菌作用相比，最大濃度5.00 μL/L 組的效果均不如慶大霉素、氟苯尼考的效果好。

4 小 結

本試驗對艾葉提取物抑菌作用進行研究，艾葉提取物對大腸桿菌、雞白痢沙門氏菌均有抑菌作用，對大腸桿菌的效果比對雞白痢沙門氏菌效果好。5.00 μL/L 組效果最好、2.50 μL/L 組次之，1.25、0.60 μL/L 組對大腸桿菌有抑菌作用，但對雞白痢沙門氏菌無抑菌作用，0.60 μL/L 以下濃度對大腸桿菌、雞白痢沙門氏菌均無抑菌作用。提取物濃度越高，抑菌作用越明顯，低濃度無抑菌作用。