31例新型冠狀病毒感染病例咽拭子與痰標本病毒核酸檢測的比較

郭晶晶 方 茜 劉亞楠 曲 沛 馬雪瀛 王 爽 方 偉 周 茹 張 響 湯云霞 楊思園 于鳳婷 王雅杰*

(1.首都醫科大學附屬北京地壇醫院檢驗科,北京 100015；2.首都醫科大學附屬北京地壇醫院感染急診中心實驗室,北京 100015)

2019年12月,新型冠狀病毒肺炎(COVID-19)疫情發生以來，此疫情已成為全世界高度關注和共同面對的嚴峻問題[1-3]。患者到醫院就診所采集的標本類型和質量，關系到是否及時準確的確診結果，為比較不同呼吸道標本的病毒核酸檢測效果[4]，本研究對31 例新型冠狀病毒確診病例的咽拭子與痰標本進行病毒核酸結果的比較。

1 對象與方法

1.1 研究對象

收集自 2020 年2 月1 日至2月15日首都醫科大學附屬北京地壇醫院檢測的918份樣本中31例確診為新型冠狀病毒陽性患者同一時間采集的咽拭子與痰標本，對結果進行觀察比較。31例確診患者中，男性11例(35.48%)，女性20例(64.52%)，年齡32～92歲。

1.2 病毒核酸的檢測

RNA 提取：對臨床采集的標本進行水浴56 ℃，30 min滅活；咽拭子直接水浴56 ℃，30 min滅活；黏稠的痰，加入適量的痰消化液，10 min，待呈均質后水浴56 ℃，30 min滅活。提取病毒的 RNA 采用 QIAamp viral RNA mini kit(Qiagen公司, 德國)試劑盒，從 140 μL 的標本(咽拭子和痰標本)中獲得 60 μL 的總RNA溶液，提取的RNA立即使用。

1.3 人體上皮細胞RNP基因、病毒ORF1ab基因、N基因的檢測

采用熒光PCR方法進行檢測，儀器為ABI 7500，應用2019株新型冠狀病毒(2019-novel coronavirus, 2019-nCoV)核酸檢測試劑盒(上海伯杰醫療科技有限公司)進行人體上皮細胞基因RNP、病毒ORF1ab基因、N基因的檢測。按照試劑盒說明書配制體系，ABI 7500 熒光定量 PCR 儀不選 ROX 校正，淬滅基團選 None, 反應程序見表1。判定標準：陽性(Ct值≤38，典型擴增曲線)，灰區(Ct值>38)，陰性(Ct值>38 或無，無擴增曲線)。

表1 反應程序

2 結果

2.1 檢測COVID-19核酸標本情況

2020年2月1日至2月15日首都醫科大學附屬北京地壇醫院檢測新型冠狀病毒肺炎核酸標本數量為918份，其中咽拭子標本617份(67.21%)，痰標本230份(25.05%)，鼻咽標本38份(4.14%)，血漿和尿的數量分別為17份(1.85%)、16份(1.74%)(表2)。

表2 首都醫科大學附屬北京地壇醫院檢測新型冠狀病毒肺炎核酸標本類型及數量

咽拭子標本所占比例為67.21%，痰標本所占比例為25.05%，鼻咽拭子所占比例為4.14%，其他標本所占比例均小于2%。痰標本的陽性率為36.52%，咽拭子陽性率為12.64%，鼻咽拭子陽性率為13.16%，血漿和尿的陽性率為0。31例患者在確診后，住院治療期間，同一時間留取咽拭子和痰標本的核酸檢測對比結果見表3。

2.2 基因檢測結果

31例病例的咽拭子和痰標本中，人體上皮細胞RNP基因均呈現明顯典型的擴增信號曲線。31例患者的咽拭子核酸結果中，28例患者均顯示陰性，第9例和第16例患者的咽拭子為單基因陽性，第17例為雙基因陽性；同時采集的痰標本結果顯示，18例患者均為單基因陽性，13例患者為雙基因陽性。痰標本的病毒ORF1ab基因和N基因核酸檢測擴增曲線的Ct值小于咽拭子標本的Ct值。

3 討論

從918份樣本數據的類型分布看，咽拭子標本所占比例為67.21%，痰標本所占比例為25.05%，鼻咽拭子所占比例為4.14%，其他標本所占比例均小于2%。咽拭子標本所占比例較高，這符合臨床標本采集指南，而且對于臨床的實際操作較之其他標本類型，更簡單易行。但是從各類標本的陽性率看，痰標本的陽性率為36.52%，咽拭子陽性率為12.64%，鼻咽拭子陽性率為13.16%，血漿和尿的陽性率為0。

表3 31例2019-nCoV確診病例咽拭子和痰標本相關基因核酸檢測Ct值

RNP: ribonucleoprotein;Ct: cyde threshold.

31例新型冠狀病毒確診病例的咽拭子與痰標本分別進行人體上皮細胞RNP基因，病毒ORF1ab基因、N基因核酸檢測結果進行比較(表2)。

通過檢測咽拭子和痰標本的人體上皮細胞RNP基因來評估標本的采集質量及核酸提取質量，人體上皮細胞RNP基因均呈現明顯典型的擴增信號曲線，表明這31例新型冠狀病毒確診病例的咽拭子與痰標本的標本質量及核酸提取效果均符合要求[5]。

對于新型冠狀病毒的實驗室檢測，本研究采用實驗室檢測技術指南[6]發布的 2019-nCoV熒光PCR檢測引物和探針，對31例 2019-nCoV 確診病例的咽拭子和痰標本分別進行病毒ORF1ab基因及N基因核酸檢測。痰標本的病毒含量均高于咽拭子標本，痰標本的檢測效果優于咽拭子。

病毒ORF1ab基因、N基因的檢測結果顯示，31例患者的咽拭子核酸結果中，28例患者均顯示陰性，第9例和第16例患者的咽拭子為單基因陽性，第17例為雙基因陽性；同時采集的痰標本結果顯示，18例患者均為單基因陽性，13例患者為雙基因陽性。痰標本的病毒ORF1ab基因和N基因核酸檢測擴增曲線的Ct值小于咽拭子標本的Ct值。這可能與痰標本的病毒含量高于咽拭子標本有關，依據標本采集指南[7]、臨床表現咳嗽、肺炎等，新型冠狀病毒主要侵襲感染下呼吸道細胞，所以采集下呼吸道標本對病毒的檢出更加有優勢，咽拭子檢出率低，有可能與護士采樣手法、采樣位置靠近咽部外側或患者病程所含病毒量不同有關。

本研究結果也提示，在新型冠狀病毒感染肺炎病例實驗室確診及出院實驗室診斷時，以咽拭子病毒核酸檢測陰性作為排除感染及治愈標準在實施過程中需謹慎，必要時應當采集痰等下呼吸道標本進行檢測。

患者到醫院就診所采集的標本類型和質量，關系到檢測結果的準確性[8-9]，也關系到是否及時準確的確診[10]，早發現、早隔離、早治療，從而減少健康人群被感染的概率[11-13]。本研究結果為新型冠狀病毒實驗室檢測[14-15]中標本的類型選擇及防控措施等提供了一些建議。由于標本數量較少，在此后工作中，將進一步收集更多的數據進行比較分析，為患者的早日康復，提供更有利的科學證據。