成都市2019年豬O型口蹄疫免疫抗體監測與分析

李俐睿，李敏，周瀟瀟，李桂黎，岳建國，張定

（四川省成都市動物疫病預防控制中心，四川 成都 610041）

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病。主要感染牛、豬等偶蹄類動物，主要臨床特征為成年動物的口舌黏膜、皮膚、蹄部形成糜爛、潰瘍病灶，幼齡動物多因心肌炎而致死亡率升高。該病對生豬養殖業的危害極大，我國將其列為一類疫病，在《2017年國家動物疫病強制免疫計劃》文件中口蹄疫繼續作為強制免疫的病種。

為做好重大動物疫病的防疫工作，成都市于2019 年春秋兩季為管轄的15 個區（市）縣發放了豬O型口蹄疫疫苗，并進行集中免疫。為及時評估免疫效果，我們對所有發放該疫苗的區（市）縣的部分規模化養豬場、散養戶和屠宰廠的豬只進行血清樣品采集和疫抗體水平監測。現報告如下：

1 材料

1.1 檢測試劑 豬O 型口蹄疫病毒抗體檢測ELISA試劑盒，無錫優聯生物科技有限公司生產，批號：190403。

1.2 樣品 血清樣品采集自成都市管轄的15個區（市）縣的規模化豬場、散養戶和屠宰廠，共計1 980份樣品。

2 方法

2.1 檢測準備

2.1.1 在使用前，所有的試劑盒組分都必須恢復到室溫（20～25 ℃）。

2.1.2 洗滌液稀釋：使用前，20倍洗滌液應搖動至沉淀的鹽溶解（最好在不超過40 ℃水中加熱5～10 min），然后用蒸餾水或去離子水作20 倍稀釋（如：50mL的20倍洗滌液加入950mL蒸餾水中）。

血清樣品稀釋：在血清稀釋板中按1∶40稀釋（如：195 μL樣品稀釋液中加5 μL待檢血清）。

對照血清稀釋：在血清稀釋板中按1∶4 稀釋（如：180 μL樣品稀釋液中加60 μL對照血清）。

2.2 操作步驟

2.2.1 根據檢測樣品數量取出對應的檢測板條，每孔加入稀釋好的工作洗滌液200 μL，重復洗板2次，最后一次在吸水材料上拍干。

2.2.2 將稀釋好的待檢血清、陰性對照和陽性對照各取100 μL 加至抗原包被板中，待檢血清設1孔，陰性、陽性對照血清各設2孔。輕輕搖勻孔中樣品，置37 ℃溫育30 min。

2.2.3 甩掉板孔中的溶液，每孔加入稀釋好的工作洗滌液200 μL，甩掉板孔中的溶液，最后一次在吸水材料上用力扣板，盡可能不要有殘留液體，共計洗滌5次。

2.2.4 每孔中加酶標抗體100 μL，置于37 ℃溫育30 min。

2.2.5 甩掉板孔中的溶液，洗滌5次，洗滌方法同2.2.3。

2.2.6 每孔加顯色液A 50 μL，再加顯色液B 50 μL，室溫（20～25 ℃）避光反應10 min。

2.2.7 每孔加終止液50 μL，10 min 內測定結果（測定前在震蕩器上輕輕震動一下）。

2.3 結果判定 在酶標儀上用630 nm 波長測各孔吸光OD值（650 nm波長也可以）。

2.3.1 成立條件 陽性對照平均OD630nm值與陰性對照平均OD630nm值之差＞0.5。

2.3.2 計算公式 S/P＝樣品OD630nm值÷陽性對照孔平均OD630nm值

2.3.3 陰、陽性判定 如果S/P≥0.20，樣品判為陽性；如果S/P＜0.20，樣品判為陰性。

3 結果

3.1 共檢測免疫豬O 型口蹄疫血清樣品1 980份，合格1 752 份，平均合格率為88.48%。詳見表1。

3.2 在435份規模場豬血清中，合格407份，平均合格率為93.56%。

3.3 在735份散養戶豬血清中，合格653份，平均合格率為88.84%。

3.4 在810份屠宰廠豬血清中，合格692份，平均合格率為85.43%。

4 分析討論

4.1 口蹄疫的日常預防 口蹄疫病毒具備高度傳染性，環境適應性強，在生豬排泄物和分泌物中能長時間生存，在高溫和低溫環境中依舊具備感染性，但對于酸堿性環境的適應比較差［2］。因此在飼養過程中，需要注意保持圈舍衛生，及時清理糞便，并定期對場內公共環境和圈舍使用過氧乙酸或燒堿等酸堿溶液進行消毒處理。

4.2 疫苗免疫 目前，豬O型口蹄疫是成都地區要求強制免疫的血清型。養殖中疫苗的預防接種并不是接種次數越多越好，需先做好流行病學調查，摸清本地流行的血清型毒株，再制定科學的免疫程序。在全國其他地區，豬口蹄疫病毒毒株從O型到多種毒株型不等，比如A型病毒暴發的概率正在增加。豬口蹄疫變種病毒增多，口蹄疫滅活疫苗的類型隨之增多［3］，因此做好本地疫病的流行病學調查十分重要。

不同飼養階段的豬群，其免疫效果也存在較大的差距。黃寶學等［4］研究發現，母豬的O 型口蹄疫免疫抗體合格率最高，這可能與常年的春秋集中反復免疫有關，其后依次為仔豬、公豬、后備豬、育肥豬和保育豬。保育豬在斷奶后母源抗體逐漸消失，在集中免疫后效果也不好，因此保育豬就成為了口蹄疫抗體水平較低、抗病力最薄弱的豬群，此時做好加強免疫十分重要。同時需要注意的是，部分母源抗體水平較高的仔豬進行首免后，其抗體水平因疫苗的干擾也有可能會暫時下降［5-6］，這時不能盲目地做加強免疫，而是注重飼養管理，控制好環境溫度，在飼料及飲水中添加黃芪多糖等預防藥物，以提升豬群非特異性免疫能力，避免應激，防止繼發感染［7-8］。

5 結論

本研究對1 980 份不同來源的豬血清O 型口蹄疫病毒抗體進行了檢測，其中檢出陽性1 752份，平均合格率為88.48%。達到了O型口蹄疫免疫抗體平均合格率70%以上的標準，符合農業農村部規定的要求，在臨床上能對豬群產生相應的免疫保護作用，表明成都市在2019年對豬O型口蹄疫的強制免疫工作達到了預期的效果。同時從表1 可以看出，規模場的免疫效果明顯好于散養戶。這與規模場的規范化養殖、疫苗的規范化保存、制定科學的免疫程序以及專業防疫人員的免疫操作水平有一定的關系。若發生口蹄疫，散養戶是最危險的薄弱環節，對整個地區的疫病防控具有嚴重的潛在威脅［1］。

表1 2019年成都市豬O型口蹄疫免疫抗體檢測結果

本次檢測成都市15 個區縣的1 980 份豬血清樣品中，雖然豬O型口蹄疫病毒抗體的平均合格率都在80%以上，但還是有少量不合格的免疫豬群。鑒于口蹄疫病毒的高度接觸性和對養殖業的巨大危害，仍需要積極探討在飼養和防疫過程中出現的各種問題，縣級相關部門要做好本區域的流行病學調查，科學地開展防疫工作。同時，散養戶作為常態化的防控薄弱環節應重點關注，這就要加強基層防疫員的管理和定期培訓。在春秋集中免疫工作中，由于基層防疫員免疫注射工作量大，可能會出現疫苗保存是否妥當，免疫時是否按最新的程序操作，養殖戶補欄后補免工作是否跟進等問題，縣級相關部門應定期組織基層防疫員和養殖戶培訓學習，強化規范免疫意識，從而保障成都地區生豬生產的健康發展。