不同頻率點(diǎn)按推拿刺激骨骼肌細(xì)胞對(duì)MyoD、Myf-5 的影響

范宏元 向開(kāi)維 孫珺 孫弘揚(yáng)

( 貴州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院 貴州 貴陽(yáng) 550000)

推拿學(xué)是中醫(yī)的重要組成部分，而手法在推拿學(xué)中占有十分重要的地位[1]。推拿手法本質(zhì)上屬于機(jī)械力刺激，手法通過(guò)其力學(xué)效治療臨床許多疾患的細(xì)胞生物力學(xué)原理之一，隨著細(xì)胞組學(xué)[2]等多學(xué)科的發(fā)展，推拿的機(jī)制已經(jīng)從簡(jiǎn)單的操作方法、經(jīng)驗(yàn)總結(jié)向療效機(jī)制研究方向發(fā)展。

1.資料與方法

1.1 一般資料

動(dòng)物選取普通級(jí)健康大鼠40 只，體重質(zhì)量1.8 ～2.5kg，雌雄不限。

1.2 方法

分組實(shí)驗(yàn)鼠分籠飼養(yǎng)，適應(yīng)性飼養(yǎng)7d 后，隨機(jī)分為正常組A、損傷組B、低頻組C 和高頻組D，各10 只。

在實(shí)驗(yàn)前1d 禁食禁水，并8%硫化鈉溶液雙腿去毛。用3%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉（注射劑量：1.5mL·kg），麻醉成功后將大鼠固定在自制打擊器上，將200g 重的砝碼通過(guò)與其直徑相當(dāng)?shù)乃芰瞎茏?0cm 高處垂直自由落在大鼠小腿后側(cè)、踝關(guān)節(jié)上方2.5cm 處，連續(xù)打擊2 次，打擊面積約2 m（兩條后肢均造模）。半小時(shí)后可見(jiàn)打擊局部出現(xiàn)散在出血點(diǎn)，皮下瘀腫，但皮膚完整無(wú)破損且無(wú)骨折。

C 組、D 組均于造模后第4 天開(kāi)始按摩治療，由具有執(zhí)業(yè)醫(yī)師資格證的推拿方向研究生經(jīng)由推拿按摩測(cè)試儀測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)后執(zhí)行。

取材與預(yù)處理A 組實(shí)驗(yàn)鼠于第3 天處死取材,BC、D 組實(shí)驗(yàn)鼠用于損傷模型于損傷后第10 天處死取材。HE 染色4%多聚甲醛固定液中固定4h 后取出肌肉標(biāo)本，常規(guī)乙醇梯度脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，切片，片厚5μm。取其中一部分切片常規(guī)法行HE 染色。于100 倍光鏡觀察后，200 倍光鏡下對(duì)目標(biāo)進(jìn)行照相，并記錄下至少5 個(gè)不同視野。用免疫組織化學(xué)ABC 法檢測(cè)MyoD、Myf-5 基因的表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS13.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，數(shù)據(jù)結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2.結(jié)果

B、C 組和D 組同A 組相比Myf5 具有明顯表達(dá)（P ＜0.01）經(jīng)按摩干預(yù)，Myf5 的表達(dá)水平C 組與D 組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.01）。同樣MyoD B、C 組和D 組同A 組相比MyoD B 具有明顯表達(dá)（P ＜0.01）經(jīng)按摩干預(yù)，MyoD B 的表達(dá)水平C組與D 組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.01），見(jiàn)表。

表 Myf5 和MyoD 相對(duì)表達(dá)量的差異（±s）

表 Myf5 和MyoD 相對(duì)表達(dá)量的差異（±s）

注:C、D 組與A 組相比*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01；C、D 組與B 組相比★P＜0.05，★★P ＜0.01；C、D 組與B 組相比◆P ＜0.05，◆◆P ＜0.01。

組別 N Myf5 MyOD正常組（A） 10 7.88±021 14.93±0.18損傷組（B） 10 4.97±0.18 12.34±0.18低頻組（C） 10 6.74±0.18**★★ 13.34±0.18**★★高頻組（D） 10 5.92±0.18**★★ 13.36±0.18**★★

3.討論

生肌調(diào)節(jié)因子由MyoD、MyoG、Myf-5、MRF4 等4 個(gè)家族成員組成，具有極其相似的結(jié)構(gòu)特征。Myf-5 對(duì)骨骼肌發(fā)生起重要的調(diào)節(jié)作用，可激活肌肉的基因轉(zhuǎn)錄，抑制細(xì)胞生長(zhǎng)周期，促進(jìn)細(xì)胞分化。生肌調(diào)節(jié)因子Myf-5 是與骨骼肌的生成有重要關(guān)系的因，可促進(jìn)損傷部位成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化為纖維細(xì)胞，利于傷口的愈合，促進(jìn)新陳代謝，加快炎癥消散。本研究發(fā)現(xiàn)，10Hz 和40Hz頻率振動(dòng)干預(yù)均可提高大鼠下肢骨骼肌中的Myf5 和MyoD 蛋白表達(dá)水平，低頻（10Hz）較高頻（40Hz）刺激效果更顯著。不同的推拿手法振動(dòng)刺激對(duì)肌肉力量提升有良好作用，且得到的效果也不同。

手法的技術(shù)特征研究為其他研究的基礎(chǔ)。將手法產(chǎn)生的生物效應(yīng)與手法操作的具體參數(shù)密切聯(lián)系起來(lái)，如手法的力量大小、方向、頻率等，才能有效的優(yōu)化力學(xué)參數(shù)。目前,由于手法操作的技術(shù)規(guī)范不統(tǒng)一，不同研究者所得到的結(jié)果很難互相印證或比較，尚無(wú)法得出系統(tǒng)全面的研究結(jié)論。