大腸桿菌對(duì)大鼠腸上皮細(xì)胞IEC-6LncRNA 表達(dá)的調(diào)控

張明昱 宋婉瑩 趙鵬偉 李存保（通訊作者）

（1 內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院 內(nèi)蒙古 呼和浩特 010010）

（2 內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 內(nèi)蒙古 呼和浩特 010010）

大腸桿菌引起的腸道炎癥，在臨床中最為常見(jiàn)[1-2]。LncRNA（長(zhǎng)鏈非編碼RNA，Long non-coding RNA）對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)，分化等諸多生理活動(dòng)有調(diào)控作用[3-4]。本研究就大腸感染感染大鼠腸上皮細(xì)胞后LncRNA 發(fā)生的變化進(jìn)行研究，旨在為進(jìn)一步研究LncRNA在大腸桿菌感染大鼠腸上皮細(xì)胞后的調(diào)節(jié)機(jī)制奠定基礎(chǔ)，為深入的臨床應(yīng)用提取條件。

1.實(shí)驗(yàn)材料

大鼠腸上皮細(xì)胞IEC-6 購(gòu)自中科院上海細(xì)胞庫(kù)，大腸桿菌ATCC8739 購(gòu)自貝納生物。

2.實(shí)驗(yàn)方法

2.1 MTT 檢測(cè)最佳的細(xì)菌濃度

用0，101，102和103個(gè)/ml 的大腸桿菌作用于大鼠腸上皮細(xì)胞IEC-6 中并于第0，24，48 和72h 檢測(cè)。在酶標(biāo)儀490nm 波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度（OD）值，依照公式計(jì)算細(xì)胞增殖率，細(xì)胞生長(zhǎng)率（%）=（OD 藥物/OD 對(duì)照）×100%

2.2 大腸桿菌對(duì)大鼠腸上皮細(xì)胞LncRNA 表達(dá)影響的分析

用最佳濃度的細(xì)菌作用IEC-6 細(xì)胞后提取RNA，送測(cè)序公司進(jìn)行分析。并對(duì)所得結(jié)果進(jìn)行生物信息學(xué)的分析。

3.結(jié)果

3.1 最佳的大腸桿菌作用細(xì)胞的濃度

通過(guò)MTT 檢測(cè)得到了如下結(jié)果。大腸桿菌能夠抑制MFC 細(xì)胞的增殖，且呈劑量和時(shí)間依賴(lài)性。作用細(xì)胞時(shí)間72 小時(shí)，隨細(xì)菌濃度的增加，對(duì)細(xì)胞增殖的抑制率也逐漸增加，但當(dāng)細(xì)菌作用時(shí)間達(dá)到48 小時(shí)時(shí)細(xì)胞幾乎全部死亡。在12h 時(shí)細(xì)胞的生長(zhǎng)已經(jīng)受到抑制，而且103個(gè)/ml 和104個(gè)/ml 的大腸桿菌對(duì)細(xì)胞抑制作用顯著高于10 個(gè)/ml 和102個(gè)/ml 組，見(jiàn)表。

表 不同作用時(shí)間不同濃度大腸桿菌對(duì)MFC 細(xì)胞增殖的抑制率

3.2 大腸桿菌對(duì)大鼠腸上皮細(xì)胞LncRNA 表達(dá)影響的分析

提取大腸桿菌作用后的大鼠腸上皮細(xì)胞的RNA 后送測(cè)序公司進(jìn)行分析。得到了6 個(gè)有可能參與此過(guò)程的RNA，見(jiàn)圖1。

圖1 大腸桿菌對(duì)大鼠腸上皮細(xì)胞LncRNA 表達(dá)影響的分析

4.討論

腸炎主要是由細(xì)菌，病毒，寄生蟲(chóng)等相關(guān)病原微升物引起的，臨床主要表現(xiàn)為腹痛，腹瀉，便希并常帶血。該病在夏季最為常見(jiàn)，上吐下瀉是其主要癥狀[5-6]。LncRNA 其長(zhǎng)度均大于200，且為非編碼RNA，研究發(fā)現(xiàn)，LncRNA 對(duì)細(xì)胞周期，細(xì)胞分化等諸多的生命活動(dòng)均有很好的調(diào)控作用[4]。本研究通過(guò)對(duì)大腸桿菌作用后的大鼠腸上皮細(xì)胞的RNA 后送測(cè)序公司進(jìn)行分析。得到了6 個(gè)有可能參與此過(guò)程的RNA。為進(jìn)一步的深入研究奠定基礎(chǔ)。