基于葉綠體18S、CP12、CP15序列的西藏巨柏群體多態性遺傳評價

張粟斌，雷 培，王子越，林可心，代靖嬈，段澤浩，孟凡娟

(東北林業大學 生命科學學院，黑龍江 哈爾濱 150040)

巨柏Cupressusgigantea為柏科Cupressaceae柏木屬Cupressus常綠喬木，又名雅魯藏布江柏木，為西藏特有的珍稀樹種，同時也是西藏特有的古樹，壽命可達千年，材質優良，而且具有生態環境保護功能，是當地重要的造林、水土保持以及用材樹種[1-4]。由于巨柏種群分布較為狹窄，天然更新困難，加之自然死亡以及人工砍伐等諸多因素的干擾，導致巨柏群體數量急劇減少，已成為我國瀕危物種[5-6]。因此，了解巨柏遺傳多樣性特性，明確這個古老樹種的遺傳特性，對于揭示西藏巨柏的起源、保護和利用均具有重要意義。

葉綠體DNA(cpDNA)在多數被子植物中屬母系遺傳[7]，其中非編碼區變異豐富，對其進行測序分析可以廣泛用于樹木的遺傳多樣性和系統發育等研究[8-9]。此外，cpDNA用于樹木起源與演化、種質資源保護等方面也較多[10-12]。本研究通過對67份西藏巨柏個體的葉綠體3個非編碼區進行測序分析，明確西藏巨柏樹種的起源與演化，從而為西藏巨柏種質資源保護和利用提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗材料為雅魯藏布江沿岸的巨柏種子，源自8個巨柏居群，共計67個個體，樣品取樣地信息見表1。將種子播種，獲得的苗木葉片，直接進行凍存，存入-80 ℃超低溫冰箱，以備后期葉片的總DNA提取。

表1 8個居群的樣本信息

1.2 總DNA提取

采用改良后的CTAB法[10]提取巨柏葉片DNA，隨后分別使用紫外光光度法和瓊脂糖凝膠電泳法檢測DNA濃度和純度，取達到要求的DNA稀釋至20 ng·μL-1，保存在-20 ℃冰箱用于PCR擴增。……