丹參的活性成分篩選及體外活性測試

計雅佳 強圍 那文鈺 孔書悅 祝霖露（西北民族大學化工學院，蘭州榆中730124）

隨著人們生活水平的提高和生活習慣的改變，高血脂癥的發病率明顯增加，受到人們廣泛關注，降低血脂，抑制動脈硬化的發展是防止由心腦血管等疾病引起死亡的重要手段。丹參是一種天然植物，具有降血脂的功效，本文章主要研究丹參的主要成分丹酚酸的降血脂功效，利用紫外分光光度法測定丹酚酸對脂肪酶的降血脂活性，并與市售藥物奧利司他相比較。

1 篩選部分

1.1 用ADME篩選篩選成分

如果一個分子符合Lipinski 的“五定律”，那么它具有良好的吸收和滲透性。從TCMSP 數據庫中篩選符合條件的成分，OB被用來確定生物活性分子作為治療劑的類藥物性質。用DL參數估計了預期化合物的溶解度和化學穩定性本文篩選出OB≥50%，DL≥0.18，ALog P≤5，Caco-2≥0.40，MW≤500 的SDC 有效化學成分。然后，Pubchem 數據庫（https：//Pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）進一步規范了結構和名稱。所得分子如表1所示。

通過上述表格，我們了解在丹酚酸中活性較好的成分是丹酚酸B，所以我們選擇丹酚酸B來進行如下實驗。

2 體外活性測試部分

2.1 胰脂肪酶活力的測定

稱取PNP 標準品70mg，使用二甲基亞砜溶解，定容到100ml，制成濃度為5mmol/L的母液。使用上述母液配制不同濃度的pnp溶液，以緩沖液做對照，使用紫外分光光度法在405nm波長處測吸光度，每個濃度下測定三次，做出A-c 的濃度坐標圖。

配制不同濃度的丹酚酸B和奧利司他溶液，吸取不同濃度的以上溶液0.5ml、Tris-HCL 緩沖液3ml 和脂肪酶溶液1.5ml 于37℃下保溫10min，加入已預熱的PNPP 底物溶液起始反應，37℃反應10min后加入6ml乙醇和0.5ml 濃鹽酸終止反應，在紫外分光光度計405nm下測定其吸光度。根據標準曲線，計算抑制率，以奧利司他為對照，測定。

抑制率計算：抑制率%=（Aa-Ab）/Ae（Ae：不加樣品時吸光度 Ab：加入樣品但未加底物和酶時 Aa：加入樣品時吸光度）

3 結果及討論

3.1 4-硝基苯酚的標準曲線

將PNP稀釋成不同濃度，利用紫外分光光度計在405nm處測定其吸光度，以不同濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線，如圖

圖1 4-硝基苯酚的標準曲線

表1 SDC中選定候選化合物的信息

獲得的曲線方程為y=13.307x+0.0908，此標準曲線的相關性為0.9707，證明實驗相關性很好，實驗可行性高。

3.2 不同濃度抑制劑對胰脂肪酶的影響

由圖2可知，對丹酚酸B來說，濃度越大，抑制率越高，抑制效果越好。圖3隨著奧利司他濃度的增加，抑制率在不斷提高，但之后隨著濃度的增加，抑制效果趨于平緩，這說明抑制劑對脂肪酶抑制作用具有濃度依賴性，證明奧利司他對胰脂肪酶具有一定的抑制作用，但是抑制效果有待進一步提高。由圖2圖3對比可知，丹酚酸B與奧利司他相比，丹酚酸B的抑制效果明顯比奧利司他要好

圖2丹酚酸B對胰脂肪酶抑制作用的影響

圖3奧利司他對胰脂肪酶抑制作用的影響