粘液型細菌的菌懸液配制及與非粘液型細菌的耐藥性分析

吉維民

(江蘇省寶應縣人民醫院，江蘇 寶應)

0 引言

臨床實驗室經常見到粘液型細菌生長，粘液型細菌較常見的有，肺炎克雷伯菌，銅綠假單胞菌，肺炎鏈球菌，少見的有，腦膜炎奈瑟菌，流感嗜血桿菌，金黃色葡萄球菌。粘液型細菌的粘液組成，主要是細菌的莢膜，由粘多糖構成主要成份[1]，因為粘液有其疏水性，細菌懸濁液0.5 麥氏單位，準確配制有實際困難。我們根據多年的經驗，進行一些實驗，以便能在實驗中有所發現，找出簡便可行的辦法。

1 材料和方法

取我院近年來培養出的，很明顯的粘液型細菌，用無菌棉簽沾取目標菌，與無菌生理鹽水充分混勻，孵育一定時間進行比濁，比濁儀使用梅里埃產品。配制一定濁度的粘液型細菌菌懸液，在37度孵育時間與濁度變化，如表1。常見粘液型細菌與非粘液型同期同種細菌，體外藥敏試驗結果比較，結果見表2。藥敏結果判讀按CLSIC2018，微生物實驗操作按《全國臨床檢測操作規程》第4版操作規范。統計學方法：采用SSPS 20.0 進行數據的統計學分析。

2 結果

表1 主要粘液型細菌菌懸液在37℃孵育時間與濁度變化(n=20，濃度：麥氏單位)

結果表明：孵育30 分后，所配菌懸液，混合較均勻，可調至0.5麥氏單位，無肉眼可見凝塊，統計學分析有顯著意義P＜0.05。沒有孵育的或孵育時間較短的樣本，不易形成均勻菌懸液，孵育時間過長，菌懸液的濃度不易掌握，臨床實驗室操作起來也不方便。因此建議對粘液型細菌菌懸液的配制采用本方法。粘液狀細菌其折光強粘液樣的外層為莢膜層，莢膜是由疏水性多肽糖物質構成，是細菌的毒力因子。

3 討論

細菌在感染人體時，會產生或丟失一部份莢膜，也就是常說的細菌的毒力變異，在革蘭染色中，有一層厚厚的折光層，莢膜幫助細菌抵制外來因素，從而逃避藥物的作用[2]，使感染細菌的毒力增強，它又稱為毒力因子。我們在工作中發現，莢膜厚度與毒力呈正相關，而在實驗檢測中，因為配制懸濁液與普通易散于生理鹽水中的細菌，不一樣的是，直接做藥敏試驗，無論是K-B 法還是MIC法，結果都有一定影響，通過孵育能使實驗配制菌懸液操作容易些，還可使一部份細菌增加親水性，孵育與否的結果，兩者有一定差異[3]。按照本方法，使用生理鹽水配制，以防富營養物質促使細菌分裂生長，使得濃度不易掌握，又能使得細菌分散開來，雖然不能洗脫外層莢膜，但能使細菌表層的莢膜變小。

粘液型病原菌，相對同種非粘液型對抗生素較敏感，在三代頭孢菌素上表現的更明顯，差異有顯著性，大多數抗生素相對粘液型細菌更敏感，總體來看還是比較接近[4]，粘液型細菌藥敏試驗，一致性較難掌握，實驗須更加細心，特別是懸制液的配制，起著很重要的作用。我們采取的方法能很好的解決這部分問題，具體規范化還需進一步研究，以使實驗重復性達到要求[5]。回顧性分析本院的粘液型細菌檢出率有增加趨勢。粘液層使細菌耐受環境的能力變強，對藥物滲透入細菌形成障礙，可表現為藥敏試驗耐藥性增強。而實驗室藥物統計分析并非如此，耐藥性分析的結果，反而是粘液型細菌較敏感，統計學分析有顯著意義P＜0.05。原因可能是粘液型細菌大多數是野生菌株所致。

表2 主要常見粘液型細菌與非粘液型同期同種細菌藥敏結果比較(耐藥率%)

據報道肺炎克雷伯菌的拉絲長度和它的毒力強度呈正相關[6]，我們工作中發現有一定道理。我們發現銅綠假單的水溶性色素和粘液呈負相關，水滴狀的銅綠少見明顯金屬光澤的色素，偶見有粘液樣的金黃色葡萄球菌，鏡下并不見像其它幾種水滴樣細菌有厚厚的折光層，根據本文可得出，經過37℃孵育30 分鐘的菌懸液效果最好，因此，一般工作中可采用37℃孵育30 分鐘。有莢膜細菌大都屬野生菌株，且在多種標本中都算病原菌，比如痰，分泌物等，臨床屬病原菌[7]，根據對這幾種臨床常見病原菌的耐藥性分析，區分粘液型與否對感染病原菌與否，對毒性分析，對藥物敏感性都有價值。

綜上所述，粘液型細菌是值得重視的病原菌，本文所用方法，所統計的結果，在臨床上用一定的應用價值，對感染性疾病的治療，預后都有指導意義。