野生何首烏組織培養(yǎng)研究

農(nóng)艷豐 韋宗雪 李健

摘 要：選用廣西百色當(dāng)?shù)匾吧问诪鯙樵囼?yàn)材料，以莖段為外植體，探究其最適宜的組織培養(yǎng)方案。結(jié)果表明：75%乙醇30s配合0.1%HgCl2消毒12min，可明顯控制外植體的污染率，是莖段分段滅菌中最適宜的方案;初代培養(yǎng)中，誘導(dǎo)腋芽選擇MS+6-BA 2.0mg/L+KT 1.0mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂7g/L培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，誘導(dǎo)率、總芽數(shù)及平均芽高均最高;無菌芽增殖時(shí)，添加50mL/L的椰汁配合6-BA 2.0mg/L，可得到最好的增殖率和芽數(shù);生根培養(yǎng)以1/2MS+NAA 0.2mg/L+IBA 0.1mg/L為最適宜生根配方;高山土是野生何首烏組培苗適宜的移栽基質(zhì)。

關(guān)鍵詞：何首烏;組織培養(yǎng);莖段

Abstract： In this study， the local wild Polygonum multiflorum in Guangxi was used as the research material， and the stems were used as explants to explore its most suitable tissue culture technology. The results showed that： 75% ethanol 30s with 0.1% HgCl2 disinfection for 12min could significantly control the contamination rate of explants， which was the most suitable scheme for segmental sterilization of stem segments; the selection of axillary buds in primary culture with MS+6-BA2.0mg/L+KT1.0mg/L+sucrose30g/L+agar 7g/L medium，which made the highest induction rate， total bud number and average bud height; 6-BA 2.0mg/L was added during sterile bud proliferation，The best growth rate and number of shoots were obtained with coconut milk 50mL/L; rooting culture with 1/2MS+NAA 0.2mg/L+IBA 0.1 mg/L was the most suitable rooting formula. The alpine soil was a suitable transplanting substrate for the wild Polygonum multiflorum tissue culture seedlings.

Key words： Polygonum multiforum; Tissue culture; Stem

何首烏（Polygonum multiforum Thunb.），又名首烏、夜交藤等，屬蓼科多年生纏繞藤本植物。何首烏塊根是我國傳統(tǒng)大宗中藥材，含有蒽醌類化合物、二苯乙烯苷類等多種成分，以及人體必需的多種氨基酸、微量元素。國內(nèi)外醫(yī)學(xué)研究[1-4]發(fā)現(xiàn)，何首烏具有降低血脂、提高血液循環(huán)等多種功效，對促進(jìn)消化系統(tǒng)的代謝功能、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌腸道平衡有較大的益處[5-6]。梅雪[7]、王子璐[8]等研究表明，何首烏具有與腎上腺皮質(zhì)激素具有同等作用的化學(xué)成分，可減少機(jī)體對脂質(zhì)的吸收，抑制膽汁酸的合成，促進(jìn)膽汁的下泄作用。何首烏可提高人體造血能力[9-10]。除此之外，何首烏的多糖成分對免疫功能的調(diào)節(jié)也有較好的效果[11-12]。

隨著社會(huì)的快速發(fā)展，人們對補(bǔ)藥的需求越發(fā)重視。由于何首烏具有延緩衰老、治療脫發(fā)、白發(fā)、促進(jìn)心腦血管的血液循環(huán)等多種突出效果，使得人們對何首烏的需求日益增多。國內(nèi)外市場的巨大需求，導(dǎo)致野生何首烏亂挖濫采的現(xiàn)象越來越多，野生資源日漸枯竭，產(chǎn)量降低，引起市場的供求關(guān)系緊張，使得何首烏逐漸成為市場的緊俏貨。何首烏以傳統(tǒng)的種子、塊根、扦插繁殖為主要栽培模式，而組織培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用推廣范圍依舊很窄，年供比達(dá)不到市場的需求量。張宗珍[13]、曾文丹[14]等研究表明，改變何首烏傳統(tǒng)栽培方式具有必要性和緊迫性。當(dāng)前，何首烏組織培養(yǎng)技術(shù)在我國的研究應(yīng)用仍較少，曾文丹等[15]選用栽培何首烏嫩莖進(jìn)行快繁技術(shù)探究，篩選出芽體滅菌的最佳時(shí)間8min，不定芽增殖激素選擇是TDZ和NAA配合;袁紅霞等[16]對塊根誘導(dǎo)愈傷組織進(jìn)行研究，得出塊根消毒搭配是70%乙醇+0.1%升汞;MS+2，4-D2.0mg/L+6-BA0.5mg/L為最適誘導(dǎo)培養(yǎng)基。

本研究在前人研究的基礎(chǔ)上，以野生何首烏莖段為外植體，探究不同因子對其組織培養(yǎng)的影響，為進(jìn)行大規(guī)模種植，加快工業(yè)化生產(chǎn)，增加種苗來源提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 本試驗(yàn)選用廣西百色野生的何首烏，莖段均在試驗(yàn)時(shí)采摘的新鮮材料，藤蔓和葉片均無病害，符合試驗(yàn)選材要求。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 預(yù)處理及滅菌 選擇健康無病害、病斑的野生何首烏枝條，流水沖洗干凈，用手術(shù)剪將枝條剪成帶腋芽的莖段。莖段分成3個(gè)部分，芽尖最上部分3～5個(gè)節(jié)間點(diǎn)為頂端部分、依次中部、下部，倒入洗衣粉溶液浸泡10min，流水沖洗15min，備用。在超凈工作臺(tái)上使用0.1%升汞配合75%乙醇對外植體滅菌，設(shè)置升汞滅菌時(shí)間6～12min。每個(gè)處理分別接種40管，每管接種1個(gè)，7d后觀察統(tǒng)計(jì)莖段污染率。

1.2.2 莖段初代培養(yǎng) 選擇MS為基本培養(yǎng)基，固定KT濃度、添加不同濃度6-BA激素探究誘導(dǎo)腋芽的效果。每處理分別接種40管，每管接種1個(gè)，30d后統(tǒng)計(jì)誘導(dǎo)率和出芽數(shù)。

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（責(zé)編：張宏民）