人乳頭瘤病毒E6/E7 mRNA檢測聯合薄層液基細胞學檢測在宮頸病變篩查中的應用價值

韓少聰，史惠蓉，肖靜文，翟延玨，張 錦

(鄭州大學第一附屬醫院婦科，河南 鄭州 450002)

宮頸癌在全球女性常見惡性腫瘤中居第4位，我國癌癥登記數據顯示，宮頸癌的發病率和死亡率呈現逐年升高趨勢[1]。我國女性正面臨著宮頸癌的嚴重威脅，故而宮頸癌的防治工作顯得尤為重要。宮頸癌是唯一可以通過早期篩查發現并預防的惡性腫瘤，在宮頸病變發展過程中，持續性高危人乳頭瘤病毒(human papilloma virus,HPV)感染起重要作用。高危型HPV持續感染可導致癌基因E6、E7的轉錄表達，其表達產物E6、E7蛋白是導致宮頸上皮內瘤變(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)和宮頸癌發生的關鍵[2]。在此過程中，mRNA的轉錄是必須的，HPV E6/E7 mRNA的檢測可以用來評估宮頸細胞的異常情況[3-4]。本文主要研究HPV E6/E7 mRNA檢測、液基薄層細胞學檢測(thinprep cytologic test，TCT)及兩者聯合檢測在識別宮頸病變中的應用價值，以期找到更高效的宮頸病變篩查辦法。

1 資料與方法

1.1 一般資料以2017年9月至2018年4月在鄭州大學第一附屬醫院就診的5 431例患者為病例收集范圍，篩選出均行HPV E6/E7 mRNA檢測、TCT及陰道鏡下宮頸活檢組織病理的患者共388例，年齡20～75歲。排除標準：妊娠期患者；既往或現患有宮頸疾病患者；有免疫抑制治療史者；月經期內患者；合并其他系統惡性腫瘤患者。

1.2 方法

1.2.1 HPV E6/E7 mRNA檢測 采用宮頸穩態檢測試劑盒(鄭州科蒂亞生物技術有限公司)進行檢測，該試劑盒利用QuantivirusTM支鏈DNA雜交捕獲原理，可以定量檢測14種高危HPV，分別為 HPV 16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68型。其檢測探針是針對14種高危HPV的E6/E7 mRNA，只要其中任一種存在就顯示陽性。操作嚴格按照試劑盒說明進行，根據E6/E7 mRNA的拷貝數、產品臨床實驗閾值等由配套軟件自動判讀檢測結果，≥1.0為陽性，<1.0 為陰性。

1.2.2 TCT 充分暴露宮頸后，用細胞采樣器的無菌毛刷放在宮頸管移行帶，毛刷順時針轉動8～10圈，刷頭在保存液中洗涮10次后保留在保存液中。診斷方法采用國際癌癥協會推薦的伯塞斯達系統(2001)分類標準分為：未見上皮內病變及惡性腫瘤細胞(陰性)，不典型鱗狀細胞(包括不確定意義的非典型鱗狀細胞及不排除高級別鱗狀上皮內瘤變的非典型細胞)、低級別鱗狀上皮內瘤變、高級別鱗狀上皮內瘤變、鱗癌(陽性)。

1.2.3 陰道鏡宮頸活檢組織病理學檢查 陰道鏡下宮頸多點活檢,所有病理標本均由專業病理醫師閱片，組織病理學診斷結果分為：慢性宮頸炎(陰性)，低級別宮頸上皮內瘤變、高級別宮頸上皮內瘤變及原位癌、浸潤性宮頸癌(陽性)。

1.3 統計學處理采用SPSS 22.0進行統計分析，計數資料用百分數表示，比較用χ2檢驗，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 陰道鏡宮頸活檢組織病理、TCT及HPV E6/E7 mRNA檢測結果388例患者中，HPV E6/E7 mRNA陽性的281例(72.4%)，多于TCT陽性231例(54.4%)，差異有統計學意義(χ2=14.350，P<0.05)。陰道鏡宮頸組織活檢病理檢查結果示：慢性宮頸炎167例(陰性)，低級別鱗狀上皮內病變、高級別鱗狀上皮內病變及原位癌、浸潤性宮頸癌(陽性)共221例。見表1。

表1 陰道鏡宮頸活檢組織病理、TCT及HPV E6/E7 mRNA檢測結果 n(%)

2.2 HPV E6/E7 mRNA檢測及TCT篩查宮頸病變結果將HPV E6/E7 mRNA、TCT分別與陰道鏡宮頸活檢組織病理(金標準)進行同步盲法比較，判定該方法對宮頸病變的篩查診斷價值。其中HPV E6/E7 mRNA篩查宮頸病變的敏感性為85.9%，特異性為45.5%，陽性預測值為67.6%，陰性預測值為71.0%；TCT篩查宮頸病變的敏感性為72.8%，特異性為72.4%，陽性預測值為69.7%，陰性預測值為61.8%。HPV E6/E7 mRNA比TCT篩查宮頸病變的敏感性更高，但特異性有所降低。見表2、3。

表2 HPV E6/E7 mRNA篩查宮頸病變價值分析 n

表3 TCT篩查宮頸病變價值分析 n

2.3 HPV E6/E7 mRNA檢測聯合TCT篩查宮頸病變價值分析本研究采用并聯試驗進行聯合檢測(即HPV E6/E7 mRNA檢測及TCT任何一項為陽性即為陽性)。HPV E6/E7 mRNA檢測聯合TCT篩查宮頸病變的敏感性為95.9%，特異性為31.7%，陽性預測值為65.0%，陰性預測值為85.4%，篩查宮頸病變的敏感性明顯高于兩者單獨應用，特異性明顯降低，但HPV E6/E7 mRNA檢測聯合TCT篩查顯著降低了漏診率，明顯提高了宮頸病變篩查效果。見表4。

表4 HPV E6/E7 mRNA聯合TCT篩查宮頸病變價值分析 n

2.4 HPV E6/E7 mRNA檢測與TCT在篩查宮頸病變中的一致性分析388例患者中HPV E6/E7 mRNA檢測與TCT這2種方法檢測的一致性是63.9%。248例診斷結果一致的病例中包括2種方法均陽性186例和均陰性62例。診斷結果不一致的140例，包括HPV E6/E7 mRNA檢測陽性而TCT陰性95例、TCT陽性而HPV E6/E7 mRNA檢測陰性45例。

2.5 HPV E6/E7 mRNA檢測、TCT、HPV E6/E7 mRNA 檢測聯合TCT篩查篩查宮頸病變的價值比較HPV E6/E7 mRNA聯合TCT篩查宮頸病變的敏感性(95.9%)高于HPV E6/E7 mRNA檢測(85.9%)及TCT(72.8%)，HPV E6/E7 mRNA檢測聯合TCT篩查宮頸病變的特異性雖有所降低，但宮頸病變篩查的漏診率較兩者單獨使用時明顯下降。

3 討論

宮頸癌為女性常見惡性腫瘤，也是唯一可早期篩查、診斷和治療的惡性腫瘤。近年來宮頸癌發病率逐年上升，對婦女健康產生較大的威脅，宮頸病變篩查在宮頸癌診治過程中尤為重要。宮頸癌的發病機制與HPV感染密切相關。大部分人HPV感染僅是暫時和一過性的,可自行消退，只有約30%患者HPV感染后呈持續狀態，在致癌因素和免疫因素共同作用下經過5～10 a才會發展為癌前病變和宮頸癌。只有不到10%的人群才會整合和進展[5]。在HPV整合到宿主細胞后，HPV過度表達E6/E7，并可顯著介導抑癌基因p53和Rb的降解,從而通過干擾細胞周期、免疫逃逸等機制導致細胞發生癌變[6]。

目前常用的篩查方法為HPV DNA檢測、TCT檢查。HPV DNA檢測是宮頸癌高危人群和癌前病變篩查的有效手段[7]。TCT是宮頸細胞學篩查的主要手段。但是TCT結果存在一定的假陰性率，通常和病理診斷醫師的經驗有關；宮頸癌細胞發生形態異常通常為晚期，易限制TCT對于宮頸癌的早期診斷。HPV DNA檢測聯合TCT篩查宮頸癌前病變是一種更高效的篩查方案[8]。HPV DNA檢測僅僅為病因學檢測，但病毒是否復制、是否在宮頸病變進展過程中發揮作用均無法體現。在DNA發揮作用過程中，mRNA是必不可少。HPV E6/E7 mRNA檢測可以判斷病毒是否處于活動期，故HPV E6/E7 mRNA檢測可作為宮頸病變篩查的一種有效手段。

本研究結果表明，HPV E6/E7 mRNA篩查宮頸病變的敏感性高于TCT，特異性低于TCT，陰性預測值高于TCT，陽性預測值低于TCT；敏感性較高的檢查適合作為篩選的一線方案。TCT特異性較高，但有研究[9]證實包括TCT在內的細胞學檢查也只能發現約51%的宮頸病變。在宮頸癌前病變篩查中可采用一次取樣同時送HPV E6/E7 mRNA檢測和TCT的方法，取樣方便，操作簡單，且無創[10]。HPV E6/E7 mRNA檢測聯合TCT對宮頸病變篩查的敏感性高于HPV E6/E7 mRNA或TCT單獨應用。研究[11-12]表明，HPV E6/E7 mRNA聯合細胞學檢測極大提高了敏感性與陰性預測值，聯合應用2種篩查方式可以明顯提高宮頸癌前病變的篩查效果。

綜上所述，HPV E6/E7 mRNA檢測聯合TCT可以作為更高效的宮頸病變篩查辦法。篩查宮頸病變原則上應盡量減少漏診，同時也不能誤診為假陽性，因此單一的篩查方法不能完全滿足上述要求。HPV E6/E7 mRNA檢測聯合TCT能夠早期及時、準確診斷宮頸癌前病變，更好彌補這種缺陷，對于宮頸病變的篩查具有重要價值，將最大程度篩查出陽性宮頸病變，減少宮頸癌的發病率，造福更多的女性患者。