我國(guó)云南、湖北和山東葡萄產(chǎn)區(qū)霜霉病菌對(duì)甲霜靈的抗性檢測(cè)

周連柱 賈爽爽 孔繁芳 黃曉慶 張昊 王忠躍

摘要 為明確我國(guó)云南省賓川縣、湖北省公安縣和山東省煙臺(tái)市葡萄產(chǎn)區(qū)霜霉病菌對(duì)甲霜靈的抗性發(fā)生態(tài)勢(shì)，采用葉盤漂浮法測(cè)定了這3個(gè)產(chǎn)區(qū)共127株葡萄霜霉病菌對(duì)甲霜靈的抗性頻率及抗性水平。結(jié)果顯示，不同區(qū)域間病菌的抗性頻率和抗性水平均存在差異。其中，湖北省公安縣霜霉病菌的抗性頻率和抗性水平均較高，抗性頻率達(dá)92.0%，高抗菌株占76.0%，低抗菌株占16.0%，敏感菌株占8.0%;山東省煙臺(tái)市霜霉病菌的抗性頻率為74.0%，低抗菌株占64.0%，高抗菌株占10.0%，敏感菌株占26.0%;云南省賓川縣霜霉病菌的抗性頻率和抗性水平均較低，抗性頻率為29.6%，敏感菌株占70.4%，低抗菌株占29.6%，無高抗菌株。

關(guān)鍵詞 葡萄霜霉病菌; 甲霜靈; 抗性頻率; 抗性水平; 檢測(cè)

中圖分類號(hào)： S 436.631.1

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A

DOI： 10.16688/j.zwbh.2019108

Detection of resistance of Plasmopara viticola to metalaxyl in

grapevine areas of Yunnan， Hubei and Shandong in China

ZHOU Lianzhu， JIA Shuangshuang， KONG Fanfang， HUANG Xiaoqing，

ZHANG Hao， WANG Zhongyue

（State Key Laboratory for Biology of Plant Diseases and Insect Pests， Institute of Plant

Protection， Chinese Academy of Agricultural Sciences， Beijing 100193， China）

Abstract

In order to clarify the development of fungicide resistance of Plasmopara viticola to metalaxyl in Binchuan county， Yunnan province， Gongan county， Hubei province， and Yantai city， Shandong province in China， 127 isolates of P.viticola collected from these regions were investigated for their resistance frequency and resistance level to the metalaxyl of P.viticola with leaf disk floating method. The results showed that resistance frequency and levels of P.viticola were different among isolates from different regions. The resistance frequency and levels of P.viticola isolates in Gongan county of Hubei province were both higher， with the frequency of 92.0%， among which， the high-resistance type isolates accounted for 76.0%， the low-resistance type accounted for 16.0%， and the sensitive type accounted for 8.0%. The resistance frequency of the P.viticola in Yantai city of Shandong province was 74.0%， the low-resistant isolates accounted for 64.0%， high-resistant isolates accounted for 10.0%， and sensitive isolates accounted for 26.0%. However， the resistance frequency and levels of isolates in Binchuan county of Yunnan province were both lower， and the resistance frequency was 29.6%， the sensitive isolates accounted for 70.4%， the low-resistant isolates accounted for 29.6%， and no high-resistant isolates were found.

Key words

Plasmopara viticola; metalaxyl; resistance frequency; resistance level; detection

由葡萄單軸霉Plasmopara viticola，Berk et Curtis 引起的葡萄霜霉病是世界和我國(guó)葡萄生產(chǎn)中危害最為嚴(yán)重的一種卵菌病害。該病原菌是一種二倍體活體營(yíng)養(yǎng)型專性寄生菌[1]，可危害葡萄的所有綠色幼嫩組織，主要包括葉片、嫩枝、新梢、花序、幼果等[2]。侵染后造成葉片焦枯早落、樹梢扭曲變形、花序干枯死亡等，嚴(yán)重阻礙葡萄葉片的光合作用、影響樹體的健康生長(zhǎng)和葡萄果實(shí)營(yíng)養(yǎng)的貯藏，最終造成產(chǎn)量和品質(zhì)的下降，并且該病害傳播迅速，病害流行時(shí)危害巨大[3]。生產(chǎn)上防治該病害的措施很多，其中最普遍最有效的方法還是使用化學(xué)殺菌劑[45]。為了有效防控該病害，大量特異性內(nèi)吸性殺菌劑被相繼研發(fā)推廣使用，如甲霜靈、嘧菌酯、烯酰嗎啉等[68]。這些特異性殺菌劑在短期內(nèi)使得葡萄霜霉病得到有效的防控，但許多國(guó)家相繼報(bào)道，隨著藥劑的普遍頻繁使用，病菌對(duì)藥劑敏感性下降，導(dǎo)致殺菌劑的防效下降[89]。植物病原菌抗藥性給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)帶來了巨大損失[1012]。

甲霜靈（metalaxyl）屬于苯基酰胺類殺菌劑，是該類殺菌劑中使用最為頻繁和普遍的一種藥劑，該殺菌劑與同類殺菌劑之間存在交互抗性，抗性風(fēng)險(xiǎn)高且能夠穩(wěn)定遺傳[1315]。該藥劑最早于1977年被引入用來防治卵菌病害，對(duì)疫病和霜霉病有較好的防治效果[16]。鑒于其獨(dú)特的殺菌特性和良好的防治效果，一經(jīng)上市便得到廣泛推廣與應(yīng)用。但人們?cè)谝朐撍巹┓乐尾『r(shí)忽略了其抗性風(fēng)險(xiǎn)，在投入市場(chǎng)后不久各國(guó)便相繼報(bào)道一些病原卵菌對(duì)其敏感性下降，1978年以色列最早報(bào)道用該藥劑防治黃瓜霜霉病失敗[17]，F(xiàn)ourie等[18]報(bào)道南非地區(qū)葡萄霜霉病菌對(duì)甲霜靈的抗性頻率高達(dá)94.2%，其他地區(qū)也出現(xiàn)了類似的抗性情況[1920]。在國(guó)內(nèi)，多個(gè)地區(qū)的多種病原菌也都對(duì)甲霜靈產(chǎn)生了嚴(yán)重的抗性[2123]。Sun等[24]發(fā)現(xiàn)采自我國(guó)不同地區(qū)的392株葡萄霜霉病菌中敏感菌株占13%，低抗菌株占26%，高抗菌株占61%，處于中上等水平抗性，表明我國(guó)葡萄霜霉病菌對(duì)甲霜靈已普遍產(chǎn)生了抗性。為治理甲霜靈的抗性問題，一些作用機(jī)理不同的新藥劑被相繼開發(fā)應(yīng)用，特別是羧酸酰胺類殺菌劑烯酰嗎啉替代甲霜靈在一定程度上緩解了由甲霜靈抗性引發(fā)的問題。但隨著藥劑使用年限的增加以及不合理的使用，市場(chǎng)上普遍使用的各類內(nèi)吸性殺菌劑也都相繼出現(xiàn)了抗性問題[2527]。加之新藥劑的研發(fā)工作難度較大，年限較長(zhǎng)，因此，現(xiàn)有藥劑的充分合理使用，以及一些因抗藥性問題而暫停使用的藥劑的恢復(fù)使用是保障農(nóng)業(yè)安全生產(chǎn)的前提，而病原菌抗藥性檢測(cè)則為藥劑合理使用和恢復(fù)使用提供了科學(xué)依據(jù)。

云南省賓川縣是我國(guó)葡萄產(chǎn)業(yè)近年來興起的主力軍，種植面積17.3萬hm2，是我國(guó)縣級(jí)葡萄種植面積最大的產(chǎn)地，為我國(guó)干熱河谷地帶葡萄種植的代表;湖北省公安縣葡萄產(chǎn)業(yè)是我國(guó)南方多雨多濕地區(qū)（長(zhǎng)江流域包括兩湖、江浙皖及上海等我國(guó)中南部區(qū)域）葡萄規(guī)模種植的代表，葡萄種植面積4 000余hm2，明確該地區(qū)病菌的抗藥性情況對(duì)指導(dǎo)我國(guó)整個(gè)中南部地區(qū)抗藥性檢測(cè)和治理工作具有重要的意義;山東省煙臺(tái)市是膠東半島最重要的葡萄產(chǎn)區(qū)，也是我國(guó)現(xiàn)代葡萄產(chǎn)業(yè)的發(fā)源地，種植模式和種植歷史可以代表我國(guó)整個(gè)北方葡萄產(chǎn)業(yè)（有霜霉病危害的埋土防寒區(qū)），種植面積超過66.66萬hm2，該區(qū)域用藥歷史較長(zhǎng)，葡萄霜霉病菌的抗藥性是整個(gè)北方地區(qū)抗藥性的縮影。以上3個(gè)地區(qū)囊括了我國(guó)不同地理區(qū)域、不同氣候條件下葡萄產(chǎn)業(yè)情況，明確此3個(gè)區(qū)域葡萄霜霉病菌的抗藥性對(duì)該區(qū)域以及相同環(huán)境下的其他葡萄產(chǎn)區(qū)霜霉病的防治和探索抗藥性發(fā)生發(fā)展的規(guī)律性以及對(duì)今后更精確的區(qū)域細(xì)分抗藥性檢測(cè)及治理有重要的指導(dǎo)意義。本研究擬采用葉盤漂浮法檢測(cè)以上3個(gè)葡萄主產(chǎn)區(qū)霜霉病菌對(duì)甲霜靈的抗性，通過分析其抗性頻率及抗性水平，明確田間抗藥群體的發(fā)生發(fā)展動(dòng)態(tài)，為葡萄霜霉病的科學(xué)防治、甲霜靈藥劑的抗性治理以及苯基酰胺類殺菌劑的恢復(fù)使用提供科學(xué)的指導(dǎo)。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 供試藥劑

87%甲霜靈原藥由先正達(dá)（中國(guó)）投資有限公司提供，將原藥用甲醇溶液配制成濃度為50 mg/mL的母液，置于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2 接種材料

試驗(yàn)中接種材料為葡萄霜霉病菌感病品種‘里扎馬特，采自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院廊坊中試基地，摘取當(dāng)年生副梢頂端第4～5片的健康嫩葉。

1.1.3 供試菌株

于2017年間，在葡萄生長(zhǎng)季節(jié)收集了我國(guó)云南省賓川縣、湖北省公安縣和山東省煙臺(tái)市3個(gè)主要葡萄產(chǎn)區(qū)霜霉病樣，通過分離純化得到127株葡萄霜霉病菌（表1）。供試菌株P(guān)V和YQ為本實(shí)驗(yàn)室先前獲得的對(duì)甲霜靈敏感性明確的葡萄霜霉病菌株，其中，PV為甲霜靈敏感菌株，YQ為甲霜靈抗性菌株。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 葡萄霜霉病菌對(duì)甲霜靈的抗性檢測(cè)

采用葉盤漂浮法[28]進(jìn)行抗藥性檢測(cè)。將事先配制好的50 mg/mL甲霜靈母液用無菌水稀釋至10、100 μg/mL，加入直徑9 cm培養(yǎng)皿中，每皿20 mL藥液，以滅菌水加入相同體積的溶劑作為對(duì)照，并且所有濃度梯度中溶劑的含量不超過0.5%。將供試的‘里扎馬特健康嫩葉在室內(nèi)用清水清洗干凈葉面上的塵土，在1%次氯酸鈉溶液中浸泡30 s后用無菌水沖洗3遍，再用滅菌的濾紙將葉片表面的水滴吸干凈，在超凈臺(tái)中用滅菌的打孔器制成直徑為15 mm的葉盤，將其葉背面向上漂浮于配制好的藥液中，每皿10個(gè)葉盤，每個(gè)濃度3個(gè)重復(fù)。將分離純化得到的新鮮孢子囊用無菌水洗脫后配制成濃度為1×105個(gè)/mL 孢子囊懸浮液，用移液槍滴在葉盤中央，每個(gè)葉盤10 μL，試驗(yàn)中以敏感菌株P(guān)V作為陰性對(duì)照，抗性菌株YQ作為陽性對(duì)照，相同體積無菌水作為空白對(duì)照。將所有藥皿黑暗處理24 h后用無菌濾紙片小心吸取葉盤上殘留的液滴，后置于溫度為21℃，相對(duì)濕度為100%，L∥D=16 h∥8 h光暗交替的人工氣候箱中培養(yǎng)。陰性對(duì)照菌株P(guān)V僅在空白對(duì)照組中發(fā)病，在其他藥劑濃度下不發(fā)病;陽性對(duì)照菌株YQ同時(shí)在空白對(duì)照組和兩個(gè)藥劑試驗(yàn)組中均發(fā)病，視為試驗(yàn)正常，否則視為試驗(yàn)失敗。待對(duì)照組正常發(fā)病后，調(diào)查記錄供試菌株的發(fā)病情況。

1.2.2 葡萄霜霉病菌對(duì)甲霜靈的抗性水平

根據(jù)Fourie等的研究結(jié)果，葡萄霜霉病菌對(duì)甲霜靈的最小抑制濃度（MIC）值為0.1 μg/mL并以此為敏感菌株參考標(biāo)準(zhǔn)[18]。參考Stahle-Csech的抗性倍數(shù)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)[28]，抗性倍數(shù)（RF）=檢測(cè)菌株的MIC值/敏感參考菌株的MIC值。抗性倍數(shù)（RF）>100即表示產(chǎn)生了抗性，定義當(dāng)MIC=1 μg/mL，RF=10時(shí)為敏感菌株;當(dāng)MIC=10 μg/mL，RF=100時(shí)為低抗;當(dāng)MIC≥100 μg/mL，RF≥1 000時(shí)為高抗。因此，在葡萄霜霉病菌對(duì)甲霜靈的抗性試驗(yàn)研究中采用的兩個(gè)區(qū)分濃度為10 μg/mL和100 μg/mL[18]，即菌株引起空白對(duì)照發(fā)病，但經(jīng)10 μg/mL藥液處理的葉盤未發(fā)病定義為敏感，為敏感菌株;對(duì)照組和10 μg/mL藥液處理的葉盤發(fā)病但經(jīng)100 μg/mL藥劑處理的葉盤未發(fā)病定義為低水平抗性，抗性倍數(shù)為100倍，為低水平抗性菌株;能引起經(jīng)100 μg/mL藥劑處理的葉盤發(fā)病的菌株定義為高水平抗性，抗性倍數(shù)為1 000倍，為高抗菌株。

2 結(jié)果與分析

2.1 葡萄霜霉病菌對(duì)甲霜靈的抗性頻率

本研究采用葉盤漂浮法測(cè)定了我國(guó)云南省賓川縣、湖北省公安縣和山東省煙臺(tái)市3個(gè)地區(qū)127株葡萄霜霉病菌對(duì)甲霜靈的抗性情況（表2）。檢測(cè)的3個(gè)地區(qū)127株葡萄霜霉病菌中抗性菌株91株，整體抗性頻率較高，達(dá)71.7%。但不同地區(qū)間病菌的抗性頻率存在明顯差異，抗性頻率最高92.0%，最低29.6%，相差較大。

2.2 葡萄霜霉病菌對(duì)甲霜靈的抗性水平

將檢測(cè)的127株葡萄霜霉病菌進(jìn)行抗性水平劃分，各地區(qū)葡萄霜霉病菌對(duì)甲霜靈的不同抗性類型占比如表3所示。127株葡萄霜霉病菌中敏感菌株36株，占總檢測(cè)菌株的28.3%，低水平抗性菌株48株，占37.8%，高水平抗性菌株43株，占33.9%，病菌整體以低抗和高抗類型為主，整體抗性水平較高。不同地區(qū)霜霉病菌對(duì)甲霜靈的抗性水平不同，且抗性頻率較高的地區(qū)其抗性水平也存在較大的差異。山東省煙臺(tái)市葡萄產(chǎn)區(qū)霜霉病菌的抗性水平較低，病菌抗性類型以低抗為主，占該地區(qū)檢測(cè)菌株的64.0%，高抗類型占10.0%，抗藥性風(fēng)險(xiǎn)較高;湖北省公安縣葡萄產(chǎn)區(qū)霜霉病菌的抗性頻率和抗性水平均較高，病菌多為高抗類型，占該地區(qū)檢測(cè)菌株的76.0%，低抗類型占16.0%，敏感型占8.0%，抗藥性較為嚴(yán)重;云南省賓川縣葡萄產(chǎn)區(qū)霜霉病菌的抗性頻率和抗性水平均較低，病菌以敏感類型為主，占70.4%，低抗類型占29.6%，無高抗類型菌株。

3 討論

葡萄霜霉病是危害葡萄最為嚴(yán)重的一類卵菌病害，目前，生產(chǎn)上防治該病的主要方式還是化學(xué)防治。然而，殺菌劑的大量頻繁使用導(dǎo)致病菌產(chǎn)生抗藥性的風(fēng)險(xiǎn)增加，田間病菌產(chǎn)生抗藥性后藥劑的防效下降，為了達(dá)到相同的防治效果，生產(chǎn)者加大用藥劑量，增加施藥次數(shù)，在高強(qiáng)度的藥劑選擇壓下，抗藥性群體數(shù)量迅速上升，最終導(dǎo)致防治失敗。據(jù)報(bào)道，生產(chǎn)上常用的防治霜霉病的幾大類藥劑的防治效果都在逐年下降，如烯酰嗎啉[29]、嘧菌酯[30]等，加之新藥劑研發(fā)工作難度較大，因此，科學(xué)充分地利用現(xiàn)有藥劑是有效防控霜霉病的重要手段，而了解田間病原菌抗藥性的發(fā)展動(dòng)態(tài)與趨勢(shì)是科學(xué)用藥的前提和保證。

病菌抗藥性的產(chǎn)生不僅增加了生產(chǎn)成本，還加重了農(nóng)藥殘留和環(huán)境污染。為了避免和延緩病菌抗藥性的產(chǎn)生，延長(zhǎng)藥劑的使用壽命，需對(duì)田間病原菌進(jìn)行抗藥性檢測(cè)，明確其抗性頻率和抗性水平。本研究明確了我國(guó)云南省賓川縣、湖北省公安縣和山東省煙臺(tái)市3個(gè)地區(qū)葡萄霜霉病菌對(duì)甲霜靈的抗性情況，測(cè)定的127株葡萄霜霉病菌中敏感菌株占28.3%，低抗菌株占37.8%，高抗菌株占33.9%，病菌整體以低抗和高抗類型為主。此結(jié)果相較于Fourie等關(guān)于南非地區(qū)葡萄霜霉病菌對(duì)甲霜靈抗性的報(bào)道，抗性頻率和抗性水平均較低[18]。而相較于2010年Sun等報(bào)道的國(guó)內(nèi)葡萄霜霉病菌對(duì)甲霜靈的抗性情況，病菌的抗性頻率和抗性水平也有所降低[24]。病菌對(duì)甲霜靈抗性的下降可能與該藥劑的限制使用有關(guān)，自病菌對(duì)甲霜靈抗性普遍發(fā)生后，各國(guó)各地區(qū)均開始限制甲霜靈的使用，不再作為主打藥劑單一使用，僅作為混劑或與其他藥劑輪換使用[3133]。這在一定程度上降低了藥劑的選擇壓，抗性群體逐漸被淘汰，病菌的敏感性逐漸恢復(fù)，但敏感性恢復(fù)所需的具體年限目前還尚未明確。

進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，不同區(qū)域葡萄霜霉病菌對(duì)甲霜靈的抗性情況存在差異。葡萄霜霉病是一種典型的雨水性病害，潮濕的環(huán)境有利于霜霉病的暴發(fā)流行，各地區(qū)不同的氣候條件導(dǎo)致霜霉病的發(fā)生狀況不同，相應(yīng)的用藥劑量和頻次存在差異，造成病菌抗藥性發(fā)生、發(fā)展?fàn)顩r不同。位于我國(guó)中南部的湖北省公安縣，多雨水導(dǎo)致霜霉病發(fā)生危害重、農(nóng)藥使用頻次高，病菌的抗性頻率高達(dá)90%以上，且抗性水平較高，明顯高于其他地區(qū);位于我國(guó)膠東半島的山東省煙臺(tái)市氣候條件相對(duì)干燥，但用藥歷史較長(zhǎng)，病菌的抗性頻率和抗性水平也較高，抗性頻率為74.0%，病菌以低抗類型為主;云南省賓川縣葡萄種植歷史較短，雖然該區(qū)域干熱少雨，但因葡萄生育期較長(zhǎng)，葡萄霜霉病發(fā)生危害時(shí)間長(zhǎng)，導(dǎo)致用藥頻次多。據(jù)報(bào)道，該地區(qū)馬鈴薯晚疫病菌對(duì)甲霜靈的抗藥性較為嚴(yán)重[3435]。本研究結(jié)果顯示該地區(qū)葡萄霜霉菌對(duì)該藥劑的抗性頻率和抗性水平均較低，此結(jié)果可能與該地區(qū)甲霜靈的限制使用有關(guān)，近年來甲霜靈已不再作為主打藥劑單一使用，降低了藥劑的選擇壓。葡萄霜霉病菌抗藥性的發(fā)生發(fā)展具有一定的規(guī)律性，相同用藥水平下病菌抗藥性發(fā)展大致相同，國(guó)內(nèi)其他葡萄產(chǎn)區(qū)病菌的抗藥性可根據(jù)以上3個(gè)產(chǎn)區(qū)抗藥性情況進(jìn)行初步判定，但若要明確具體的抗藥性情況，還需對(duì)具體產(chǎn)區(qū)進(jìn)行抗藥性檢測(cè)。各地區(qū)可依據(jù)當(dāng)?shù)夭≡目顾幮运胶桶l(fā)展動(dòng)態(tài)適時(shí)調(diào)整相應(yīng)的防治策略。

病原菌抗藥性的發(fā)生發(fā)展與市場(chǎng)的藥劑選擇和農(nóng)戶的用藥習(xí)慣等密切相關(guān)。殺菌劑的不合理使用是導(dǎo)致抗藥性問題產(chǎn)生的主要原因，而化學(xué)藥劑的科學(xué)合理使用則是解決抗藥性問題的重要措施之一。研究表明，限制內(nèi)吸性殺菌劑在作物一個(gè)生長(zhǎng)季節(jié)的使用次數(shù)以及不同作用機(jī)理殺菌劑之間的輪換使用或者混用能夠有效降低病原菌的抗性水平[36]。針對(duì)甲霜靈的抗性問題，國(guó)際殺菌劑抗性工作委員會(huì)明確提出生產(chǎn)中甲霜靈應(yīng)作為保護(hù)劑使用而非治療劑，同一作物一個(gè)生長(zhǎng)季節(jié)內(nèi)使用次數(shù)在2～4次，且兩次施藥需間隔14 d以上[37]。因此，對(duì)于本研究中湖北省公安縣和山東省煙臺(tái)市等病菌抗藥性嚴(yán)重及抗藥性風(fēng)險(xiǎn)較高的地區(qū)，應(yīng)停止甲霜靈的使用，選擇其他與之無正交互抗性的替代藥劑，避免抗藥性問題進(jìn)一步發(fā)展;而對(duì)于云南省賓川縣病菌抗性頻率和抗性水平較低的地區(qū)，可根據(jù)甲霜靈的使用建議，繼續(xù)科學(xué)合理地使用。本研究明確了我國(guó)云南省賓川縣、湖北省公安縣和山東省煙臺(tái)市葡萄產(chǎn)區(qū)霜霉病菌對(duì)甲霜靈的抗性頻率和抗性水平，為各地區(qū)葡萄霜霉病菌的科學(xué)防治、現(xiàn)有藥劑的科學(xué)合理使用提供了理論依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1] WONG F P， BURR H N， WILCOX W F. Heterothallism in Plasmopara viticola [J]. Plant Pathology， 2001， 50（4）： 427432.

[2] 史大衛(wèi)， 高建國(guó)， 何素珍. 葡萄霜霉病和缺鎂癥的區(qū)別及防治[J]. 落葉果樹， 2006， 38（1）： 53.

[3] 王忠躍. 中國(guó)葡萄病蟲害與綜合防控技術(shù)[M]. 北京： 中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社， 2009.

[4] SPENCER-PHILIPS P T N， GISI U， LEBEDA A. Advances in downy mildew research [M]. Netherlands： Kluwer Academic Publishers， 2002： 119159.

[5] 葉正和， 王文相， 張愛芳， 等. 我國(guó)卵菌病害化學(xué)防治概況[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2000， 28（4）： 530533.

[6] ALBERT G， CURTZE J， DRANDAREVSKI C A. Dimethomorph （CME 151）， a novel curative fungicide [C]∥British Crop Protection Conference-Pests and Diseases， 1988， 1： 1724.

[7] 司乃國(guó)， 劉君麗， 馬學(xué)明. 卵菌病害的化學(xué)防治現(xiàn)狀與防治策略[J]. 農(nóng)藥， 2000， 39（2）： 710.

[8] GISI U， WALDNER M， KRAUS N， et al. Inheritance of resistance to carboxylic acid amide （CAA） fungicides in Plasmopara viticola [J]. Plant Pathology， 2010， 56（2）： 199208.

[9] GISI U， SIEROTZKI H， COOK A， et al. Mechanisms influencing the evolution of resistance to QoI inhibitor fungicides [J]. Pest Management Science， 2002， 58（9）： 859867.

[10]周明國(guó). 植物病原菌抗藥性群體的形成[J]. 中國(guó)植保導(dǎo)刊， 1995（2）： 2122.

[11]馬輝杰， 王文橋. 黃瓜霜霉病菌抗藥性的發(fā)生及化學(xué)防治[J]. 河北農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2010， 14（8）： 3641.

[12]GISI U， SIEROTZKI H. Fungicide modes of action and resistance in downy mildews [J]. European Journal of Plant Pathology， 2008， 122（1）： 157167.

[13]DIRIWACHTER G， SOZZI D， NEY C， et al. Cross-resistance in Phytophthora infestans and Plasmopara viticola against different phenylamides and unrelated fungicides[J]. Crop Protection， 1987， 6（4）： 250255.

[14]高智謀， 鄭小波， 陸家云. 疫霉菌對(duì)殺菌劑抗性遺傳研究進(jìn)展（綜述）[J]. 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)， 1999， 26（2）： 155161.

[15]CRUTE I R， HARRISON J M. Studies on the inheritance of resistance to metalaxyl in Bremia lactucae and on the stability and fitness of field isolates [J]. Plant Pathology， 2010， 37（2）： 231250.

[16]URECH P A， SCHWINN F， STAUB T. CGA48988， a novel fungicide for the control of late blight， downy mildew and related soil borne diseases [C]∥British Crop Protection Conference. 1977： 623631.

[17]REUVENI M， EYAL H， COHE Y. Development of resistance to metalaxyl in Pseudoperonospora cubensis [J]. Plant Disease， 1980， 64（12）： 11081109.

[18]FOURIE P H. Metalaxyl sensitivity status of downy mildew populations in Western Cape vineyards [J]. South Africa Journal of Enology and Viticulture， 2017， 25（1）： 1922.

[19]DEAHL K L， DEMUTH S P， SINDEN S L， et al. Identification of mating types and metalaxyl resistance in North American populations of Phytophthora infestans [J]. American Potato Journal， 1995， 72（1）： 3549.

[20]DAVIDSE L C. Biochemical aspects of phenylamide fungicides-action and resistance [J]. Ciência e Tecnologia de Alimentos， 1987， 28（2）： 400407.

[21]李煒， 張志銘， 李川， 等. 馬鈴薯晚疫病菌對(duì)瑞毒霉抗性的測(cè)定[J]. 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)， 1998， 21（2）： 6365.

[22]王文橋， 嚴(yán)樂恩. 黃瓜和葡萄霜霉病菌對(duì)不同內(nèi)吸殺菌劑的交互抗藥性[J]. 植物保護(hù)學(xué)報(bào)， 1996， 23（1）： 8488.

[23]祝海娟， 劉大偉， 張艷菊， 等. 黃瓜霜霉病菌對(duì)甲霜靈的抗藥性[J]. 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)， 2016， 29（8）： 18691874.

[24]SUN Haiyan， WANG Hancheng， STAMMLER G， et al. Sensitivity of Chinese isolates of Plasmopara viticola to metalaxyl and dimethomorph [J]. Journal of Phytopathology， 2010， 158（6）： 450452.

[25]王喜娜. 我國(guó)主要葡萄產(chǎn)區(qū)霜霉菌對(duì)烯酰嗎啉和嘧菌酯的抗藥性分析[D]. 北京： 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院， 2017： 34.

[26]JACKSON K L， YIN J， JI P. Sensitivity of Phytophthora capsici on vegetable crops in Georgia to mandipropamid， dimethomorph， and cyazofamid [J]. Plant Disease， 2012， 96（9）： 13371342.

[27]TOOFFOLATTI S L， VENTURINI G， CAMPIA P， et al. Sensitivity to cymoxanil in Italian populations of Plasmopara viticola oospores [J]. Pest Management Science， 2015， 71（8）： 11821188.

[28]STAHLE-CSECH U， GISI U， SOZZI D. Determination of the sensitivity of Plasmopara viticola to phenylamides [J]. EPPO Bulletin， 2010， 22（2）： 314316.

[29]BLUM M， WALDNER M， GISI U. A single point mutation in the novel PvCesA3 gene confers resistance to the carboxylic acid amide fungicide mandipropamid in Plasmopara viticola[J]. Fungal Genetics and Biology， 2010， 47（6）： 499510.

[30]CHIN K M， CHAVAILLAZ D， KAESBOHRER M， et al. Characterizing resistance risk of Erysiphe graminis f.sp. tritici to strobilurins [J]. Crop Protection， 2001， 20（2）： 8796.

[31]COHEN Y， REUVENI M. Occurrence of metalaxyl-resistant isolates of Phytophthora infestans in potato fields in Israel [J]. Phytopathology， 1983， 73（6）： 925927.

[32]HARTMAN G L， HUANG Y H. Characteristics of Phytophthora infestans isolates and development of late blight on tomato in Taiwan [J]. Plant Disease， 1995， 79（8）： 849852.

[33]REIS A， SMART C D， FRY W E， et al. Characterization of isolates of Phytophthora infestans from southern and southeastern Brazil from 1998 to 2000 [J]. Plant Disease， 2007， 87（8）： 896900.

[34]曹繼芬， 孫道旺， 楊明英， 等. 云南省馬鈴薯、番茄晚疫病菌對(duì)甲霜靈敏感性及地理分布[J]. 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)， 2007， 20（5）： 10271031.

[35]霍超，曹繼芬，王昌命，等.云南省昆明市馬鈴薯晚疫病菌甲霜靈抗藥性監(jiān)測(cè)[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2018，46（12）：156157.

[36]畢秋艷， 馬志強(qiáng)， 韓秀英， 等. 葡萄霜霉病菌對(duì)甲霜靈抗藥性治理及其田間抗藥菌株遺傳穩(wěn)定性分析[J]. 植物病理學(xué)報(bào)， 2014， 44（3）： 302308.

[37]FRAC.General Use Recommendations [EB/OL].http：∥www.frac.info/expert-fora/phenylamides/general-use-recommendations.

（責(zé)任編輯：楊明麗）

收稿日期： 20190306?? 修訂日期： 20190416

基金項(xiàng)目：葡萄及瓜類化肥農(nóng)藥減施技術(shù)集成研究與示范（2018YFD0201300）;中央級(jí)公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)（S2019XM04）;國(guó)家葡萄產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系（CARS-29）

致? 謝： 參加本試驗(yàn)部分工作的還有江代禮、譚翰杰、張能和紀(jì)燁斌等同學(xué)，特此一并致謝。

通信作者E-mail：張昊zhanghao@caas.cn; 王忠躍wangzhy0301@sina.com

#為并列第一作者