云南核桃葉枯病病原鑒定及其生物學特性

樊炳君 趙玉美 陳俊珠 趙寧 楊斌 陳玉惠

摘要 為明確引起云南核桃葉枯病的病原及其生物學特性，本文對分離自葉枯病病斑上的一株擬盤多毛孢進行了形態學和分子生物學鑒定，并通過柯赫氏法則驗證其致病性;采用生長速率法、懸滴法和載玻片法研究其菌絲生長和孢子萌發的生物學特性。結果表明，該菌株為小孢擬盤多毛孢Pestalotiopsis microspora，是引起云南核桃葉枯病的新病原。該病原菌的最適生長溫度為20～25℃，最適光周期L∥D=12 h∥12 h，最適生長pH為4～8。病原菌的分生孢子萌發受pH和濕度的影響較大，在中性及堿性環境下不萌發，最適萌發pH為4～5;在高于90%的相對濕度下才能萌發。分生孢子在20～25℃下萌發率最高，全光照最適于孢子萌發;核桃葉汁液對分生孢子萌發有顯著的促進作用。

關鍵詞 核桃葉枯病; 小孢擬盤多毛孢; 菌株鑒定; 生物學特性

中圖分類號： S 436.65

文獻標識碼： A

DOI： 10.16688/j.zwbh.2019076

Identification and biological characteristics of a new pathogen causing the walnut leaf blight in Yunnan province

FAN Bingjun， ZHAO Yumei， CHEN Junzhu， ZHAO Ning， YANG Bin， CHEN Yuhui

（Southwest Forestry University， Kunming 650224， China）

Abstract

In the present study， the identification and biological characteristics of the pathogen causing the walnut leaf blight in Yunnan province were studied. The pathogenicity test was done based on the Kochs postulates; the pathogen was identified based on morphological characteristics and molecular evidence， and the biological characteristics were determined by using the methods including colony growth and spore germination. The results showed that the strain was identified as Pestalotiopsis microspora as the new pathogen of walnut leaf blight. The growth of P.microspora was best at 20-25℃， pH 4-8 on PDA medium， and the optimal light conditions were alternation of 12 h light and 12 h dark. The conidia were harder to germinate below 90% relative humidity or above pH 6. The conidia were best to germinate at 20-25℃; the optimum light conditions were full light， and the optimum pH values were 4-5. The walnut leaf juice had a remarkable promotion function to mycelium growth.

Key words

walnut leaf blight; Pestalotiopsis microspora; identification; biological characteristics

胡桃Juglans L.，又名核桃，隸屬于殼斗目Fagales胡桃科Juglandaceae的落葉喬木[1]，是我國重要的經濟林樹種，其果實營養豐富，且具有很好的保健作用，被譽為“21世紀的超級食品”。在我國，核桃主要分布在云南、四川、山西、陜西等地。核桃因其較高的經濟價值，近年來在我國的栽培面積正以每年10%的速度遞增，并已成為許多山區農民增收致富的支柱產業。據云南省林業廳統計，截至2017年底，云南核桃種植面積達288.1萬hm2，年產量300萬t，產值185億元，均居全國首位[2]，核桃產業在云南省的經濟發展中起著不可或缺的作用。然而，隨著核桃種植面積的擴大、品種單一種植及管理粗放等，目前已導致許多核桃種植區病害頻發且有逐年加重之勢，嚴重影響核桃的正常生長和結實，使核桃產量降低，給種植地區造成較大的經濟損失。

目前國內外關于核桃病害的研究主要集中在引起核桃炭疽病、黑斑病、枝枯病、潰瘍病等病害病原菌的鑒定、危害、防治等方面[36]。其中葉部病害研究較多的有白粉病Microspharea yamadai、炭疽病Gloeosporium fructigenum、褐斑病Marssonina juglandis、灰斑病Phyllosticta juglandis、葉斑病Alternaria alternata[7]等，未見對由擬盤多毛孢屬Pestalotiopsis真菌引起的核桃葉枯病的報道。本研究組在對云南省核桃主產區核桃病害調查過程中發現，部分地區的核桃發生嚴重的葉枯病，表現為整株葉片邊緣枯黃并逐漸向內擴展，最終全葉枯死，明顯影響植株的正常生長和核桃產量。通過對病組織的切片觀察，該病害由擬盤多毛孢屬真菌引起，為明確其病原菌種類及生物學特性，本研究采用形態學結合分子生物學手段對分離自病組織上的1株擬盤多毛孢（QZLL2菌株）進行了鑒定，同時通過接種驗證其致病性，并對其菌絲生長和分生孢子萌發的生物學特性進行了研究。為該病的發病規律研究、預測預報及防治等奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

擬盤多毛孢QZLL2菌株，由“云南核桃主要病蟲害種類及危害評價”項目組提供，保藏于西南林業大學生物化學教研室;一年生泡核桃Juglans sigillata Dode實生苗由云南省楚雄市大姚縣金碧鎮花卉公司提供。

1.2 菌株培養

從保藏試管中挑取供試菌株接種在PDA平板上，于25℃±2℃的恒溫培養箱中黑暗培養。

1.3 菌株鑒定

從已培養好的菌落邊緣挑取少量菌絲接種在PDA平板中央培養，每隔1 d觀察1次并記錄菌落生長狀況和形態特征，待菌落產孢后挑取少許子實體及孢子制備水浮載玻片，置于顯微鏡下觀察其產孢結構、孢子形態并測量孢子大小[8]，然后查閱相關資料[911]進行形態學鑒定。

同時，將培養好的菌株送昆明碩擎生物科技有限公司進行基因組提取，并以ITS1/ITS4和BT-2A/BT-2B為引物進行PCR擴增和測序。獲取ITS和β-微管蛋白基因序列后，在GenBank中采用BLAST軟件對測序結果進行同源性比對，并選擇合適的序列，通過Mafft軟件進行比對，運用BioEdit軟件對序列進行剪切，選擇擬盤多毛孢近緣屬五隔盤單毛孢Seiridium cardinale（AF40995，AF377298;AF320503）為外群，采用Paup軟件中的鄰接（neighbor-joining，NJ）法構建系統發育樹，自舉法（bootstrap）檢驗的重復數為1 000次。

1.4 菌株的致病性測定

1.4.1 接種

室外活體植株接種：從已大量產孢的菌落上挑取少許孢子，用無菌水制備成濃度為9.5×106個/mL的孢子懸浮液。在長勢、大小基本一致的3株健康核桃幼樹上選取位置相似的嫩葉各3片，經75%乙醇表面消毒后，用石英砂摩擦制造傷口，將孢子懸浮液涂抹在處理后的葉片上并套袋保濕，2 d后取袋，定期觀察葉片發病狀況，以涂抹無菌水的葉片為對照。

室內離體接種：取長勢、大小相似且健康的6片核桃新鮮幼葉，采用與室外接種相同的方法進行接種，然后將接種好的葉片放入鋪有保濕濾紙的培養皿中，置于25℃±2℃、L∥D=12 h∥12 h的培養室培養，接種2 d后觀察記錄葉片發病狀況。

1.4.2 菌株的再分離鑒定

采用組織分離法[12]從接種后發病葉的病組織上再分離供試病原菌，獲得純菌株后按1.3的方法再進行分離菌株的鑒定。

1.5 菌株的生物學特性研究

1.5.1 菌絲生長的生物學特性

采用生長速率法[12]測定供試菌株菌絲生長的生物學特性。具體方法為：選擇同一生長時期的菌落在無菌條件下用滅菌打孔器沿菌落邊緣打取大小相同的菌塊，置于PDA平板中央，在所設置的各條件（5、10、15、20、25、30、35、40℃ 8個溫度梯度;全光照、L∥D=12 h∥12 h、全黑暗3個光照條件;pH 2～11等10個不同pH梯度）下進行培養，每處理設3個重復。除不同溫度處理外，其余處理均在25℃±2℃下進行培養。培養48 h后，每隔2 d按十字交叉法測量菌落直徑，同時觀察產孢情況。

1.5.2 孢子萌發的生物學特性

1.5.2.1 溫度、光照對孢子萌發的影響

采用載玻片法研究溫度、光照對供試菌株分生孢子萌發的影響。具體方法為：在滅菌的載玻片上倒入水瓊脂培養基，待其凝固后，用滅菌涂布棒蘸取濃度為9.5×106個/mL的孢子懸浮液，均勻地涂于水瓊脂板上，然后將載玻片放入鋪有濕潤濾紙的培養皿中，置于所設各溫度（5、10、15、20、25、30、35、40℃）和光照條件（全光照、L∥D=12 h∥12 h、全黑暗）下進行培養，溫度試驗在冰箱（5℃、10℃）和恒溫培養箱中進行，光照試驗在光照培養箱中于25℃±2℃下進行，8 h后鏡檢計數孢子萌發情況。

1.5.2.2 pH對孢子萌發的影響

采用懸滴法研究pH對供試菌株分生孢子萌發的影響。具體方法為：在滅菌凹片中分別加入pH為2、3、4、5、6、7、8、9的水溶液30 μL，再分別各加入10 μL的孢子懸浮液，然后將凹片置于25℃±2℃的恒溫培養箱中培養，8 h后鏡檢計數孢子萌發情況。

1.5.2.3 濕度對孢子萌發的影響

采用小容器空氣濕度法[12]設置70%、80%、90%、100%、100%+水，5個不同相對濕度條件。然后按1.5.2.1的方法制備水瓊脂板并分別將其放在上述不同濕度條件下，在25℃±2℃下培養并于8 h后鏡檢計數孢子萌發情況。

1.5.2.4 核桃葉汁液對孢子萌發的影響

參照陳長卿等[13]的方法研究寄主汁液對孢子萌發的影響。10%核桃葉汁液的制備：采集長勢、大小相似且健康的泡核桃葉片，剪碎稱重后均分為兩份。一份放入燒杯加蒸餾水煮沸2 min;另一份放入研缽加入適量蒸餾水研磨2 min。然后分別在5 000 r/min下離心5 min，取上層液體重復離心兩次，合并上清液并用蒸餾水將其稀釋成10%的核桃葉汁液。

取制備好的兩種核桃葉汁液分別替代蒸餾水制備水瓊脂板。然后按1.5.2.1中的方法在25℃±2℃下完成兩種核桃葉汁液對孢子萌發影響的試驗。

1.6 結果觀察及數據分析

孢子萌發試驗中，每個項目設置3個重復，每種試驗條件下鏡檢的孢子數不少于200個。觀察至萌發率達到90%以上停止，以芽管長度超過孢子直徑的1/2為萌發標準。

孢子萌發率=孢子萌發數孢子總數×100%。

各試驗項目所獲數據通過SPSS Statistics軟件進行差異顯著性分析。

2 結果與分析

2.1 菌株的致病性

核桃葉枯病在野外的典型癥狀為：發病初期，葉片上出現圓形或近圓形水漬狀深褐色小病斑（主要分布在葉中脈外靠近葉緣處），后逐漸向周圍擴展成近圓形、橢圓形或不規則的病斑，同時病斑中部顏色變

淺呈灰色，邊緣深褐色，病健交界區分明顯。隨著病

害的繼續發展，葉緣處病斑相互連接成片;病害后期，受害葉緣所有病斑聯合成片，病斑顏色繼續變淺呈黃白色，邊緣褐色，病斑上出現明顯或不明顯的輪紋，葉片干枯卷曲，脫落（圖1a）。采用QZLL2菌株進行的人工接種試驗結果顯示，室內外接種后的核桃葉會出現相似的病害癥狀。室外活體接種8 d后，接種葉片出現近圓形或橢圓形的深褐色水漬狀病斑，接種16 d后，病斑向內擴展，中央顏色變淺，呈灰白色，邊緣深褐色，有明顯輪紋出現（圖1b-1）;室內離體接種4 d后，接種葉邊緣出現零星的黑色小點，8 d后出現不規則連片黑褐色病斑，其上可見有絨毛狀白色菌絲生長（圖1c-1）;接種16 d后，接種葉的大部分已變黑，有的甚至全葉變黑死亡。而對照均未出現異常癥狀（圖1b-2和c-2）。

從接種葉片病組織上再分離獲得的菌株QZLL3菌落及分生孢子的形態、顏色等均與原菌株（圖2、圖3）相似，表明QZLL2菌株為核桃葉枯病的病原菌。

2.2 菌株鑒定

2.2.1 形態鑒定

QZLL2菌株在PDA上（25±2）℃黑暗條件下培養8 d后菌落直徑達8.50 cm，白色絨毛狀，質地較密;菌落背面淡黃色，具不明顯圓形輪紋（圖2）;培養14 d后，菌落上產生黑色分生孢子堆。分生孢子長梭形或細紡錘形，直或稍彎曲，具4個隔膜，分隔處稍縊縮，頂端具2～4根附屬絲，長4.5～25.0 μm，基部1根附屬絲，長2.75～7.75 μm。分生孢子由5個細胞組成，兩端細胞無色，中間3個細胞暗褐色至淺褐色。分生孢子長20.0～27.0 μm、寬5.5～6.5 μm，長寬比為3.64～4.15，3色胞長13.0～18.5 μm（圖3）。

經查閱相關文獻，根據形態特征和培養性狀，該菌株與小孢擬盤多毛孢Pestalotiopsis microspora的形態相似[910，1415]。

2.2.2 分子生物學鑒定

原菌株QZLL2和接種后發病組織上再分離菌株QZLL3經ITS和β-tubulin基因測序，分別得到大小為576 bp和581 bp的2條rDNA-ITS序列片段和2條序列一致（455 bp）的β-tubulin基因序列片段，將其提交GenBank（ITS序列登錄號分別為MK064588和MK064589，β-tubulin基因序列登錄號MK478772）并與相關核酸序列進行同源性比對，它們的ITS序列與Pestalotiopsis microspora（KT366172、KT372347）的同源性達到100%，在系統發育樹（圖4）上同屬一個分支，而它們的β-tubulin基因序列與P.microspora（KU377338）的同源性也達到100%（圖5），表明QZLL2和QZLL3兩個菌株與小孢擬盤多毛孢P.microspora的親緣關系最近。結合形態和分子生物學分析，QZLL2和QZLL3菌株都為小孢擬盤多毛孢。

2.3 菌絲生長的生物學特性

2.3.1 溫度對菌絲生長的影響

QZLL2菌株在5～30℃范圍內均能生長，在低于15℃下生長速度明顯下降，高于30℃條件下菌絲完全不能生長。菌絲在20～25℃下生長旺盛，生長速度最快，也最易產孢，8 d時其菌落直徑與其他溫度下生長的菌落直徑間均存在顯著差異（表1）。

2.3.2 光照對菌絲生長的影響

半光照和全黑暗條件下供試菌株的生長無明顯差異，兩種條件都有利于菌絲的生長和產孢，而連續光照則不利于該菌株菌絲的生長，菌落生長慢且菌絲稀薄，菌落直徑與半光照和黑暗下的菌落直徑間存在顯著差異（表2）。

2.3.3 pH對菌絲生長的影響

QZLL2菌株菌絲生長的pH范圍廣泛，在pH 3～11的環境下均能生長，但在pH 4～8下生長最好，生長4、6、8 d時彼此間沒有顯著差異。在pH 9的環境下菌絲生長速度較快，但菌落生長相對較差，在pH高于10和低于3時菌絲生長都會受到一定抑制。培養10 d后，該菌株僅在pH 5和6的培養基上產孢（表3）。

2.4 分生孢子萌發的生物學特性

2.4.1 溫度對分生孢子萌發的影響

供試菌株的分生孢子在10～35℃條件下均可萌發（圖6）。在20～30℃范圍內萌發速度最快，25℃下的萌發率最高，8 h的萌發率達到20.50%，24 h時達到91.48%;在10℃和35℃下，孢子的萌發速度和萌發率都受到一定抑制。

2.4.2 光照對分生孢子萌發的影響

供試菌株的分生孢子在不同光照下都能萌發，處理24 h后孢子萌發率均超過了60%。其中，全光照最有利于分生孢子的萌發，培養16 h時萌發率已超過90%，其次為半光照。全黑暗下萌發率相對較低，但24 h后其萌發率仍能達到60%以上（圖7）。

2.4.3 pH對分生孢子萌發的影響

不同pH條件下QZLL2菌株分生孢子的萌發率見圖8。圖8顯示，分生孢子在偏酸性條件下都能萌發，而在中性和偏堿性條件下不萌發。其中在pH 為4和5的條件下分生孢子萌發率較高，培養24 h的萌發率分別達到86.21%和78.26%，而在pH 為6條件下，培養8 h和16 h的萌發率都較低，分別僅為1%和7.62%，但在培養至24 h時，萌發率可達到70.15%。

2.4.4 相對濕度對孢子萌發的影響

環境相對濕度對供試菌株分生孢子萌發的影響較大，孢子在相對濕度90%以上才能萌發，且濕度越大萌發率越高。在100%+水的相對濕度條件下分生孢子萌發最好，處理16 h時萌發率已超過60%，24 h時達到86.87%（圖9）。

2.4.5 寄主葉片汁液對孢子萌發的影響

圖10顯示，新鮮和加熱處理后的核桃葉汁液對供試菌株分生孢子萌發的影響無顯著差異。同對照相比，兩者對孢子的萌發都具有明顯的促進作用，尤其在早期最為明顯，8 h時孢子的萌發率便均已超過90%，分別達到91.87%和93.60%，而對照僅為18.81%。

3 討論

擬盤多毛孢屬Pestalotiopsis是一類常見的植物病原菌，主要危害植物的葉、枝和果實，引起枝枯、葉斑和果實黑斑病等，嚴重影響受害植物的生長發育及經濟價值[1618]。擬盤多毛孢屬真菌作為病原菌，有些種的寄主范圍較為廣泛，同一個種可侵染多種植物或同種植物的不同部位，產生相同或不同的病害癥狀[1920]。目前國內已報道的寄主植物以經濟林木和園林樹木為主，病原菌種類有小孢擬盤多毛孢、韋斯梅擬盤多毛孢Pestalotiopsis vismiae、棒狀擬盤多毛孢P.clavispora等，其中以小孢擬盤多毛孢引起的病害最多，包括了葉部病害[21]、枝干病害[10]和果實病害[22]等。據前人報道，由小孢擬盤多毛孢引起的葉部病害雖然在不同受害植物上的危害癥狀有所不同，但一般都表現為受害葉初期多出現淺褐色或褐色圓形或不規則小斑點，后逐漸形成中央黃褐色或灰白色，邊緣黑褐色的橢圓形、圓形或不規則病斑，后期病斑連接成片，有的后期病斑上可見明顯或不明顯的輪紋，最終葉片枯死脫落或不脫落[1415，2325]。本研究中所報道的QZLL2菌株在云南核桃葉上所致病害癥狀與上述報道的葉部病害癥狀基本一致。

關于核桃葉枯病的研究，徐陽等[26]曾報道了一種在和田地區由鏈格孢菌Alternaria alternata引起的核桃葉枯病，但該病害的癥狀與本研究中的葉枯病病害癥狀有所不同。而對于由小孢擬盤多毛孢引起的核桃葉枯病，至今尚未見國內外有相關報道。馬建鵬等[27]曾報道擬盤多毛孢危害云南核桃的葉、花、枝和果并對其進行了防治研究，但至今未見有關病原菌種的鑒定報道。而國內有學者證實，小孢擬盤多毛孢可危害與核桃同屬胡桃科Juglandaceae的山核桃屬Carya浙江山核桃C.cathayensis的果實引起黑斑病，嚴重影響其產量和品質[6]。本研究中的病原菌小孢擬盤多毛孢是否也能危害云南核桃的花、枝和果值得做進一步的驗證。

本研究對引起云南核桃葉枯病的小孢擬盤多毛孢QZLL2菌株的菌絲生長和分生孢子萌發的生物學特性進行了研究。結果表明，該菌株的菌絲生長對環境的要求相對較低，與引起其他植物病害的同種病原小孢擬盤多毛孢菌絲生長的生物學特性相似[28]。而作為侵染源的分生孢子在10～35℃、pH 4～6和3種不同的光照條件下都能很好地萌發，但相對濕度必須達到90%及以上時孢子才能萌發。因此，林間濕度是該病害流行的主要影響因子。

本研究在完成柯赫氏法則驗證試驗時，由于室外環境較為復雜，溫度、光照、濕度及其他生物等外界因素難以控制，導致室外活體接種成功率較低。而室內接種則因條件易于控制，接種成功率較高。但由于室內為離體接種且接種葉較為幼嫩，因此，所表現出的癥狀與自然發病葉和室外活體接種葉所表現出的癥狀存在一定差異。此外，本研究僅對小孢擬盤多毛孢單獨侵染核桃葉部時的發病情況進行研究，該病原菌是否會與其他病原共同侵染核桃葉還有待后續研究。

參考文獻

[1] 匡可任， 路安民， 等. 中國植物志第十二卷[M]. 北京： 科學出版社， 1979.

[2] 許新橋， 孟丙南. 我國核桃產業潛力及發展對策研究[J]. 林業經濟， 2013（2）： 3438.

[3] KARACA G H， ERPER I. First report of Pestalotiopsis guepinii causing twig blight on hazelnut and walnut in Turkey [J]. Plant Pathology， 2010， 50（3）： 415.

[4] SINGH B， KALHA C S， RAZDAN V K， et al. First report of walnut canker caused by Fusarium incarnatum from India [J]. Plant Disease， 2011， 95（12）： 15871587.

[5] 曹揮， 張利軍， 王美琴. 核桃病蟲害防治彩色圖說[M]. 北京： 化學工業出版社， 2014.

[6] 張傳清， 徐志宏， 孫品雷， 等. 新病害——山核桃果實黑斑病病原菌的鑒定[J]. 植物保護， 2010， 36（4）： 160162.

[7] 巨云為， 趙盼盼， 黃麟， 等. 薄殼山核桃主要病害發生規律及防控[J]. 南京林業大學學報（自然科學版）， 2015， 39（4）： 3136.

[8] 魏景超. 真菌鑒定手冊[M]. 上海：上海科學技術出版社， 1998.

[9] 葛起新， 陳育新， 徐同. 中國真菌志. 第38卷， 擬盤多毛孢屬[M]. 北京： 科學出版社， 2009.

[10]REN Haiying， LI Gang， QI Xingjiang， et al. Identification and characterization of Pestalotiopsis spp. causing twig;blight disease of bayberry （Myrica rubra Sieb. & Zucc） in China [J]. European Journal of Plant Pathology， 2013， 137（3）： 451461.

[11]GUBA E F. Monograph of Monochaetia and Pestalotia [M]. Cambridge： Harvard University Press， 1961.

[12]方中達. 植病研究方法[M]. 第3版. 北京： 中國農業出版社， 1998： 24151.

[13]陳長卿， 張博， 楊麗娜， 等. 越橘圓斑病病原菌鑒定及其生物學特性[J]. 東北林業大學學報， 2011， 39（1）： 9598.

[14]陳劍， 紀燁斌， 張能， 等. 短穗魚尾葵灰斑病菌的鑒定及生物學特性[J]. 植物保護， 2011， 37（4）： 4851.

[15]崔朝宇， 王園秀， 蔣軍喜， 等. 美國紅楓褐斑病病原菌鑒定[J]. 林業科學， 2015， 51（10）： 142147.

[16]LIU Y J， HUANG B， WU Z H. First report of Pestalotiopsis vismiae causing trunk disease of Chinese hickory （Carya cathayensis） in China [J]. Plant Disease， 2014， 98（11）： 1588.

[17]KEITH L M， VELASQUEZ M E， ZEE F T. Identification and characterization of Pestalotiopsis spp. causing scab disease of guava， Psidium guajava， in Hawaii [J]. Plant Disease， 2006， 90（1）： 1623.

[18]陳南泉， 林河通， 陳藝暉， 等. 橄欖小孢擬盤多毛孢（Pestalotiopsis microspora）的生物學特性研究[J]. 保鮮與加工， 2016（3）： 510.

[19]趙洪海， 岳清華， 梁晨. 藍莓擬盤多毛孢枝枯病的病原菌[J]. 菌物學報， 2014， 33（3）： 577583.

[20]趙景楠， 馬喆， 劉正坪， 等. 草莓擬盤多毛孢葉斑病的病原菌[J]. 菌物學報， 2016， 35（1）： 114120.

[21]CHANG T H， LIM T H， CHUNG B K， et al. Studies on cultural characteristics Pestalotiopsis theae causing leaf blight on oriental persimmon tree [J]. Korean Journal of Plant Pathology， 1997， 13（4）： 232238.

[22]ZHANG C Q， LIU Y H， WU H M， et al. Baseline sensitivity of Pestalotiopsis microspora， which causes black spot disease on Chinese hickory （Carya cathayensis）， to pyraclostrobin [J]. Crop Protection， 2012， 42： 256259.

[23]鄭麗， 楊興玉， 謝昌平， 等. 油棕苗期葉斑病的病原鑒定及其生物學特性研究[J]. 中國油料作物學報， 2014， 36（6）： 794801.

[24]管斌， 徐超， 張紅巖， 等. 紅葉石楠葉斑病病原菌分離鑒定及致病性測定研究[J]. 西部林業科學， 2013， 42（2）： 5661.

[25]牛曉慶， 陳良秋， 付登強， 等. 油茶葉枯病菌的鑒定及生物學特性研究[J]. 熱帶作物學報， 2013， 34（2）： 352357.

[26]徐陽， 劉雪峰， 蔣萍， 等. 和田地區核桃葉枯病病原菌的鑒定[J]. 西部林業科學， 2012， 41（3）： 102105.

[27]馬建鵬， 涂國信， 孔暄， 等. 核桃病害病原菌Pestalotiopsis sp. 的防治研究[J]. 林業調查規劃， 2010， 35（6）： 9395.

[28]丁榕， 王延麗， 李博勛， 等. 杧果擬盤多毛孢葉枯病菌鑒定及其生物學特性研究[J]. 中國南方果樹， 2010， 39（4）： 2024.

（責任編輯：田 喆）

收稿日期： 20190224?? 修訂日期： 20190322

基金項目：?云南省林業科技創新項目（2014cX05）;云南省教育廳項目（2016YJS101）

致? 謝： 參加本試驗部分工作的還有江代禮、譚翰杰、張能和紀燁斌等同學，特此一并致謝。

通信作者?E-mail：cyh196107@126.com

#?為并列第一作者