早期微量喂養早產兒腸道菌群變化特征與喂養不耐受發生的關系研究

李海燕 陳影宇 李玉琴 官銳明

【摘要】 目的：探究早期微量喂養早產兒腸道菌群變化特征與喂養不耐受發生的關系。方法：選取筆者所在醫院2019年1-6月收治的40例早期微量喂養早產兒，觀察組為喂養不耐受早產兒確診者，對照組為同時期喂養耐受早產兒，以喂養不耐受發生24 h內（T1）和喂養不耐受恢復后（T2）為時間節點，采集各早期微量喂養早產兒的糞便標本，利用PCR技術進行菌群分析，對比其腸道菌群變化情況差異。結果：T1時，觀察組在腸道的肺炎克雷伯菌和大腸桿菌水平明顯高于對照組，乳酸桿菌和雙歧桿菌水平明顯低于對照組（P<0.05）;T2時，觀察組與對照組的上述腸道菌群水平比較差異均無統計學意義（P>0.05）。結論：在早期微量喂養早產兒中，腸道菌群的變化參與喂養不耐受的發生，其中不耐受發生尤其與肺炎克雷伯菌和大腸桿菌水平增加有一定關系。

【關鍵詞】 早期微量喂養早產兒 腸道菌群 喂養不耐受 變化特征

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2020.10.062 文獻標識碼 B 文章編號 1674-6805（2020）10-0-03

Study on the Relationship between the Change Characteristics of Intestinal Microflora and the Incidence of Feeding Intolerance in Early Micro-feeding Premature Infants/LI Haiyan， CHEN Yingyu， LI Yuqin， GUAN Ruiming. //Chinese and Foreign Medical Research， 2020， 18（10）： -150

[Abstract] Objective： To investigate the relationship between the change of intestinal microflora and the incidence of feeding intolerance in early micro-feeding premature infants. Method： This research selected 40 early micro-feeding premature infants admitted to our hospital from January to June 2019. The observation group were infants with feeding intolerance while the control group with feeding tolerance. Within 24 hours of the feeding intolerance onset （T1） and after the recovery of feeding intolerance （T2） as the time node， the stool samples collected from each early micro-feeding premature infants were analyzed by PCR to compare the changes of intestinal microflora. Result： At T1， the numbers of intestinal Klebsiella pneumonia and Escherichia coli in the observation group were significantly higher than that of the control group， but the numbers of Lactobacillus and Bifidobacteria were significantly lower than that of the control group （P<0.05）. Moreover， at T2， there were no significant differences in the expression of the above intestinal microflora between the observation group and the control group （P>0.05）. Conclusion： In early micro-feeding premature infants， the change of intestinal microflora may contribute to the development of feeding intolerance. And the incidence of feeding in tolerance is particularly associated with the increased level of Klebsiella pneumonia and Escherichia coli.

[Key words] Early micro-feeding premature infants Intestinal microflora Feeding intolerance Change characteristics

First-authors address： Huidong County Maternal and Child Health Family Plan Service Center， Huidong 516300， China

目前早產兒在我國的發生率連年攀升，并隨著醫學和生命支持科技的精進，早產兒的成活率也日益提高[1]。其中保障早產兒生命的重中之重是提供充分營養支持，而予以營養支持的最普適方式是胃腸道喂養[2]。然而早產兒由于孕周小、胃腸道發育不足、消化吸收不協調等原因容易引發喂養不耐受（如嘔吐、腹脹、胃潴留等現象），延長住院時長且不利于早產兒的生存質量[3]。早期微量喂養是國內外多采用的早產兒喂養方式，其帶來的早期腸內營養能夠激發胃腸道的運動和激素分泌，增強胃腸道的免疫和消化能力，從而促進胃腸道發育[4]，降低早產兒喂養不耐受的發生率[5]。縱使如此，在早期微量喂養早產兒中，喂養不耐受現象仍極小部分存在，而有研究指出，異常的腸道菌群定植與早產兒喂養不耐受有關[6]，腸道菌群對早產兒的免疫、屏障、腸道營養、激素分泌等有著一定影響[7]。因此，本研究對早期微量喂養中表現喂養耐受和不耐受早產兒的腸道菌群進行分析研究，探討腸道菌群變化特征與喂養不耐受發生的關系，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院在2019年1-6月收治的40例早期微量喂養早產兒，喂養不耐受標準：早產兒在喂養1周內出現嘔吐（每天嘔吐次數不少于3次）、腹脹（24 h腹圍增多1.5 cm）的表征[8-9]。納入標準：（1）均為本院新生胎兒且胎齡30～37周，出生體重

1 500～2 500 g，無臍繞頸或者窒息史;（2）均予以早期微量喂養;腸內食物無法消化，鼻飼下胃潴留≥喂入量50%，出現腹脹或嘔吐或兩者兼具，干擾親屬喂養計劃。排除標準：（1）消化道先天畸形者;（2）壞死性小腸結腸炎（NEC）者;（3）抗生素、益生菌制劑服用者;（4）合并其他嚴重疾病者。早產兒監護人知情且簽署同意書，且該研究方案獲得倫理委員會批準。根據喂養是否不耐受分為兩組，喂養不耐受早產兒20例，設為觀察組，喂養耐受早產兒20例，設為對照組。兩組早產兒性別、胎齡、體重、生產方式、喂養方式等各項臨床基本資料比較，差異均無統計學意義（P>0.05），見表1。

1.2 方法

1.2.1 標本采集 以喂養不耐受發生24 h內（T1）和喂養不耐受恢復后（T2）為時間節點，分別采集兩組早期微量喂養早產兒的糞便標本，每次采集新鮮糞便1 g于無菌采集管，2 h內凍存于-80 ℃冰箱等待分析，樣品均送檢“達安”第三方檢測。

1.2.2 標本處理 （1）DNA提取：糞便微生物總DNA提取參照QIAamp DNA Stool Mini Kit（美國Qiagen公司）試劑盒說明書嚴格進行;（2）DNA PCR擴增：遵照試劑盒說明書操作，利用PCR對細菌16SrRNA 基因的V3～V5區域開展特異性擴增，引物序列分別為5-CCATCTCATCCCTGCGTGTCTCCGACTCAG-3和5-CCTATCCCCTGTGTGCCTTGGCAGTC TCAG-3，重復擴增3次;（3）純化、定量及測序：應用AxyPrep DNA Gel Extraction Kit（美國Axygen Biosciences公司）進行凝膠DNA片段純化，并應用QuantiFluorTM-ST（美國Promega公司）熒光定量系統進行定量，最終由Illumina Hiseq5000實施測序。

1.3 觀察指標

比較T1和T2兩組早期微量喂養早產兒腸道菌群變化情況。

1.4 統計學處理

本研究數據采用SPSS 19.0統計學軟件進行分析和處理，計量資料以（x±s）表示，采用t檢驗，計數資料以率（%）表示，采用字2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

T1時，觀察組腸道的肺炎克雷伯菌和大腸桿菌水平明顯高于對照組，而乳酸桿菌和雙歧桿菌水平明顯低于對照組（P<0.05）;而T2時，觀察組與對照組的上述腸道菌群水平比較，差異均無統計學意義（P>0.05），見表2。

3 討論

腸道菌群在人體健康中發揮著不可或缺的作用，其與宿主通過互相作用、互相影響以達成腸道的微生態平衡[10]，研究證實腸道菌群能夠產生酶類、參與物質代謝、促進免疫器官成熟并調節免疫機能等[11]。而早產兒與足月兒相比腸道微生物環境不穩定，腸道菌群定植延遲，菌群種類多樣性不足，有益菌種水平缺乏[12]，這種失衡狀態將導致喂養不耐受、敗血癥等發生[13]。

本研究發現，在予以早期微量喂養的早產兒中，發生喂養不耐受狀況的T1時，喂養不耐受者的腸道肺炎克雷伯菌和大腸桿菌水平明顯高于喂養耐受者，而乳酸桿菌和雙歧桿菌兩種有益菌群水平明顯低于喂養耐受者（P<0.05）;而隨著喂養不耐受狀況恢復，T2時喂養不耐受者與喂養耐受者在上述腸道菌群水平比較差異均無統計學意義（P>0.05）。這表明肺炎克雷伯菌和大腸桿菌水平的增加與早期微量喂養早產兒的喂養不耐受有著一定關系，考慮可能為引發喂養不耐受的危險因素。由此，在早期微量喂養早產兒中，腸道菌群的水平變化參與喂養不耐受的發生，其中不耐受發生尤其與肺炎克雷伯菌和大腸桿菌水平增加有一定關系。

參考文獻

[1] Yuanyuan Y，Rui L，Jing W，et al.Knowledge of healthcare providers regarding breastfeeding preterm infants in mainland China[J].BMC Pediatrics，2018，18（1）：251.

[2]郭景華，龍文香.早期腸內外營養對早產兒生長發育的影響[J].現代醫藥衛生，2017，33（7）：1070-1072.

[3]黃希，彭文濤，陳瓊，等.我國早產兒喂養不耐受研究現狀的可視化分析[J].重慶醫學，2017，46（29）：4093-4095.

[4]袁艷麗，陳京立.不同喂養策略在早產兒喂養不耐受中應用的研究進展[J].中國護理管理，2017，17（4）：507-510.

[5]李秋芳，王華，劉丹，等.早期持續微量配方奶喂養方案在極低體重早產兒腸道營養中的應用[J].中華護理雜志，2015，50（10）：1163-1166.

[6] Indrio F，Riezzo G，Cavallo L，et al.Physiological basis of food intolerance in VLBW[J].Journal of Maternal-Fetal Medicine，2011，24（s1）：64-66.

[7] Isolauri E.Development of healthy gut microbiota early in life[J].J Paediatr Child Health，2012，48（s3）：1-6.

[8] Fanaro S.Feeding intolerance in the preterm infant[J].Early Human Development，2013，89（5）：S13-S20.

[9]敖余森，胡香梅，陳運彬，等.早期喂養降低窒息早產兒喂養不耐受的臨床研究[J].中國新生兒科雜志，2012，27（2）：51-53.

[10]唐京，陳明，柯文燦，等.乳酸菌在疾病防治和人體保健中的應用研究進展[J].微生物學雜志，2017，37（4）：98-107.

[11] Saavedra J M，Dattilo A M.Early Development of Intestinal Microbiota： Implications for Future Health[J].Gastroenterology Clinics of North America，2012，41（4）：717-731.

[12] Sharma B C，Singh J.Probiotics in management of hepatic encephalopathy[J].Metabolic Brain Disease，2016，31（6）：1295-1301.

[13] Ignacio L，Alfaleh K.Feeding Intolerance in Preterm Infants Fed with Powdered or Liquid Formula：A Randomized Controlled，Double-blind Pilot Study[J].European Journal of Pediatrics，2013，172（4）：529-536.

（收稿日期：2019-12-12） （本文編輯：郎序瑩）