ER-α和PR在前列腺癌組織中的表達(dá)及臨床意義

史校學(xué)，康鄭軍，朱海鵬

鄭州大學(xué)第五附屬醫(yī)院泌尿外科，鄭州450000

前列腺癌（prostate cancer，PСa）是男性常見的惡性腫瘤，近年來，中國(guó)PСa的發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，病死率與發(fā)病率的比值約為50%[1]。前列腺的解剖部位隱蔽，多數(shù)患者確診時(shí)往往已處于晚期，失去了行早期根治性手術(shù)切除的機(jī)會(huì)，因此病死率較高[2]。既往文獻(xiàn)表示，雄激素剝奪療法是PСa及其轉(zhuǎn)移癌的有效治療方法[3]。但非雄激素依賴性PСa的發(fā)生率逐年增多，相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，PСa術(shù)后化療聯(lián)合內(nèi)分泌治療的療效與PСa組織中雌激素受體（estrogen receptor，ER）β的表達(dá)情況呈明顯負(fù)相關(guān)[4]。目前，關(guān)于ER、孕激素受體（progesterone receptor，PR）與PСa患者預(yù)后關(guān)系的研究較少。基于此，本研究探討了ER-α、PR在PСa組織中的表達(dá)水平及其與PСa患者臨床特征和預(yù)后的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2012年1月至2015年12月鄭州大學(xué)第五附屬醫(yī)院收治的PСa患者和同期良性前列腺增生（benign prostatic hyperplasia，BPH）患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①PСa患者均經(jīng)病理學(xué)檢查和影像學(xué)檢查確診為局限性PСa，BPH患者均經(jīng)病理檢查確診；②PСa患者均接受過PСa根治術(shù)治療；③臨床資料和隨訪資料均完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并嚴(yán)重的器官功能障礙；②合并其他部位惡性腫瘤；③存在其他泌尿系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)疾病；④既往接受過放化療和內(nèi)分泌治療。根據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，本研究共納入66例PСa患者和60例BPH患者。PСa組患者的年齡為56～84歲，平均年齡為（66.59±13.08）歲。BPH組患者的年齡為47～81歲，平均年齡為（64.63±14.16）歲。兩組患者的年齡比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。收集PСa患者的PСa組織標(biāo)本和BPH患者的BPH組織標(biāo)本。

1.2 檢測(cè)方法

采用免疫組化SP法檢測(cè)，所有PСa患者的組織標(biāo)本均經(jīng)10%甲醛固定液固定后，常規(guī)石蠟包埋，2 μm厚連續(xù)切片，切片烤干后經(jīng)二甲苯脫蠟，梯度乙醇脫水干燥，3%過氧化氫室溫孵育，消除內(nèi)源性過氧化物酶活性，250 ml枸櫞酸緩沖液（pH6.0）抗原熱修復(fù)8 min，采用磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）沖洗后置入濕盒，加入ER、PR單克隆抗體（均購(gòu)自由福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司），4℃冰箱孵育過夜后加入生物素標(biāo)記二抗，二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色，蘇木精復(fù)染，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，干燥后封片；利用光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞染色情況。采集患者外周靜脈血，采用酶聯(lián)免疫吸附（enzyme-linked immunoreaction，ELISA）法檢測(cè)前列腺特異抗原（prostate specific antigen，PSA）水平，試劑盒由熱景生物技術(shù)有限公司提供。

1.3 染色結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

ER、PR陽(yáng)性細(xì)胞表現(xiàn)為細(xì)胞核出現(xiàn)淡黃色或棕黃色顆粒。根據(jù)細(xì)胞染色強(qiáng)度分為細(xì)胞無著色、淡黃色、棕黃色，隨機(jī)選取10個(gè)高倍鏡視野，觀察ER、PR陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比。若細(xì)胞無著色或無淡黃色、棕黃色顆粒為陰性，反之為陽(yáng)性；陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比≤10%為陰性，＞10%為陽(yáng)性。

1.4 觀察指標(biāo)及隨訪

比較兩組患者ER-α、PR的陽(yáng)性表達(dá)情況，記錄腫瘤直徑、Gleason評(píng)分，檢測(cè)PSA水平，分析ER-α、PR陽(yáng)性表達(dá)率與PСa患者臨床特征的關(guān)系。隨訪3年，分析ER-α、PR陽(yáng)性表達(dá)率與PСa患者無病生存期的關(guān)系。無病生存期指手術(shù)日至首次復(fù)發(fā)日、死亡日或末次隨訪日（最先發(fā)生者）的時(shí)間[5]。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析；采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ER-α、PR陽(yáng)性表達(dá)率的比較

PСa組織中ER-α、PR的陽(yáng)性表達(dá)率為53.03%（35/66）、37.88%（25/66），分別明顯高于BPH組織中的28.33%（17/60）、10.00%（6/60），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=7.909、13.168，P＜0.01）。

2.2 ER-α、PR陽(yáng)性表達(dá)情況與PCa患者臨床特征的關(guān)系

腫瘤直徑＞1.5 cm、Gleason評(píng)分為8～10分、PSA＞7 ng/ml的PСa患者PСa組織中ER-α的陽(yáng)性表達(dá)率均明顯高于腫瘤直徑≤1.5 cm、Gleason評(píng)分＜8分、PSA≤7 ng/ml的PСa患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=13.960、7.145、15.654，P＜0.01）。腫瘤直徑＞1.5 cm、Gleason評(píng)分為8～10分、PSA＞7 ng/ml的PСa患者PСa組織中PR的陽(yáng)性表達(dá)率均高于腫瘤直徑≤1.5 cm、Gleason評(píng)分＜8分、PSA≤7 ng/ml的PСa患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=10.123、6.496、9.962，P＜0.05）。（表1）

表 1 不同臨床特征PСa患者PСa組織中ER-α、PR的陽(yáng)性表達(dá)情況（n=66）

2.3 ER-α、PR陽(yáng)性表達(dá)與PCa患者臨床特征的相關(guān)性

Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示，PСa組織中ER-α、PR的陽(yáng)性表達(dá)情況與PСa患者的腫瘤直徑、Gleason評(píng)分和PSA水平均呈正相關(guān)（P＜0.01）。（表2）

表 2 ER-α、PR陽(yáng)性表達(dá)與PСa患者臨床特征的相關(guān)性

2.4 ER-α、PR陽(yáng)性表達(dá)與PCa患者無病生存期的關(guān)系

66例PСa患者均完成術(shù)后隨訪，截至隨訪結(jié)束，復(fù)發(fā)者18例（27.27%），復(fù)發(fā)患者的無病生存期為7～33個(gè)月，中位無病生存期為17個(gè)月。ER-α、PR陽(yáng)性表達(dá)情況均與PСa患者的無病生存期有關(guān)（χ2=6.160、4.217，P＜0.05）。（表3）

表 3 ER-α、PR陽(yáng)性表達(dá)與PСa患者無病生存期的關(guān)系

3 討論

PСa是一種性激素依賴性疾病，而相關(guān)流行病學(xué)報(bào)道顯示，PСa是老年男性常見的惡性腫瘤[5]。老年男性雄激素水平明顯低于中青年男性，因此，雄激素水平不是發(fā)生PСa的唯一影響因素。但目前雌激素與PСa發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系尚未明確，仍需進(jìn)一步研究。PSA是臨床上應(yīng)用最廣泛的PСa篩查指標(biāo)[6]。ER-α和ER-β是ER的兩種類型。近年來，國(guó)內(nèi)關(guān)于ER-α的相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道較少。魯克慶等[7]指出，ER-α能夠促進(jìn)PСa的發(fā)生與發(fā)展。Daniels等[8]探討了腫瘤相關(guān)間質(zhì)在PСa發(fā)生中的作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，腫瘤相關(guān)間質(zhì)中ER-α和ER-β的陽(yáng)性表達(dá)率明顯下調(diào)，而PСa腫瘤相關(guān)間質(zhì)中ER-α的表達(dá)情況與腫瘤分化階段和腫瘤分期呈正相關(guān)。黃卓雅等[9]研究發(fā)現(xiàn)，BPH組和PСa組患者的ER、PR陽(yáng)性表達(dá)率無明顯差異。對(duì)于ER-α在BPH和PСa中的作用，目前仍無定論。基于此，本研究探究了ER-α和PR在PСa中的表達(dá)情況及其與患者預(yù)后的關(guān)系，為ER-α和PR在PСa臨床診治中的應(yīng)用提供參考依據(jù)。

本研究結(jié)果顯示，PСa患者ER-α、PR的陽(yáng)性表達(dá)率均高于BPH患者，說明ER-α、PR的陽(yáng)性表達(dá)率與PСa的發(fā)生可能有關(guān)。PСa組織中PСa的陽(yáng)性表達(dá)率高于正常前列腺組織和前列腺增生組織（P＜0.05）[10]。ER影響腫瘤發(fā)生的機(jī)制較為復(fù)雜，楊丹等[11]指出，ER通路不僅可通過激活STAT3、核因子κB（nuclear factor of kappa B，NF-κB）信號(hào)通路從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生，還可通過磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol-3-kinase，PI3K）、叉頭框結(jié)構(gòu)蛋白A（forkhead box protein A，F(xiàn)oxA）等參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，調(diào)節(jié)腫瘤免疫應(yīng)答。Grindstad等[12]在PСa間質(zhì)及上皮中發(fā)現(xiàn)廣泛存在的PR，并發(fā)現(xiàn)PGRA和PGRB受體表達(dá)的不平衡導(dǎo)致機(jī)體激素依賴性組織中孕酮信號(hào)發(fā)生變化，PGRB高水平可能調(diào)節(jié)作為腫瘤驅(qū)動(dòng)因子的受體或通過受體本身的致癌化來轉(zhuǎn)化。

本研究還發(fā)現(xiàn)，腫瘤直徑＞1.5cm、Gleason評(píng)分＞8分、PSA水平＞7 ng/ml的PСa患者的ER-α、PR陽(yáng)性表達(dá)率更高。Spearman相關(guān)性分析結(jié)果也顯示，PСa組織中ER-α、PR的陽(yáng)性表達(dá)情況與PСa患者的腫瘤直徑、Gleason評(píng)分和PSA水平均呈正相關(guān)（P＜0.01），表明ER-α、PR參與PСa的進(jìn)展。在預(yù)后方面，隨訪3年內(nèi)，66例PСa患者中復(fù)發(fā)患者為18例，復(fù)發(fā)患者術(shù)前ER-α、PR陽(yáng)性表達(dá)率均高于非復(fù)發(fā)患者；ER-α、PR陽(yáng)性表達(dá)的PСa患者的無病生存期估計(jì)值均低于ER-α、PR陰性表達(dá)患者，表明ER-α、PR陽(yáng)性表達(dá)率可負(fù)性影響患者的術(shù)后預(yù)后情況。這考慮與ER-α、PR陽(yáng)性表達(dá)率高的患者的腫瘤潛在惡性程度更高有關(guān)，同時(shí)此類患者術(shù)后更易發(fā)生轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)，因此，無病生存期短。

綜上所述，PСa患者的ER-α、PR陽(yáng)性表達(dá)率高，ER-α、PR的陽(yáng)性表達(dá)率與腫瘤直徑、Gleason評(píng)分和PSA水平均呈正相關(guān)，且ER-α、PR陽(yáng)性表達(dá)的PСa患者的無病生存期估計(jì)值更短，因此，ER-α、PR的表達(dá)情況與PСa的發(fā)生、發(fā)展及患者預(yù)后均有關(guān)。但是，本研究受限于觀察時(shí)間不足，對(duì)患者預(yù)后的研究?jī)H限于觀察其無病生存期，可能影響預(yù)后相關(guān)結(jié)論的嚴(yán)謹(jǐn)性和科學(xué)性，期待更多長(zhǎng)期隨訪的研究進(jìn)行補(bǔ)充。