黃芪多糖對動物免疫器官生長發育的影響

馬發順，范樂樂，時志琪，梁秀麗，宋玉偉，元雪湞

（1.安陽工學院生物與食品工程學院，河南安陽455000；2.河南省獸用生物制品研發與應用國際聯合實驗室/河南省動物疫病防控與營養免疫院士工作站，河南安陽455000；3.河南省獸藥飼料監察所，鄭州450000）

中藥黃芪為蒙古黃芪或膜莢黃芪的干燥根，其中最主要的活性成分是多糖、皂甙、黃酮等[1]。黃芪多糖（APS）具有促進動物免疫器官發育、提高機體免疫力、促進生長發育等功能，是較好的免疫調節劑。楊慶芳等[2]、柳志余等[3]和孫波等[4]研究表明，肉雞和珍珠雞日糧中添加APS可提高日增重和免疫器官功能；蒙洪嬌等[5]和李春鳳等[6]研究表明，APS可提高仔豬日增重和免疫功能；桑秋凌等[7]認為APS可增強大鼠細胞免疫功能；蔣瑞雪等[8]研究了APS對小鼠免疫功能的影響；葛斌等[9]研究了APS對小鼠的抗衰老作用機制。上述研究主要集中在APS對動物的生產性能和免疫功能方面，而針對動物免疫器官生長發育的研究比較少。筆者以昆明鼠為試驗動物，在APS生物活性檢測的基礎上研究其對小鼠免疫器官的影響，為以后APS的作用機理研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗動物

昆明小鼠（SPF級）購自河南省實驗動物中心。飼養室保持空氣流通，自然光照，溫度控制在20～26℃，濕度控制在40%～70%；所用飼料（SPF級），購自河南省實驗動物中心；飲水為去離子水；保持小鼠生活環境清新，保持飼料、飲水清潔。

1.1.2 試驗儀器和藥品

電子天平（型號ES3200），天津市德安特傳感技術有限公司生產；獨立送風隔離籠具（型號IVCII），上海康為醫療科技發展有限公司生產；黃芪多糖注射液（規格以葡萄糖計100mL：1.0g），河南省各獸藥廠提供；氯化鈉注射液（規格0.90%），河南科倫藥業有限公司生產。

1.2 方法

1.2.1 試驗設計

取體重18～20 g健康昆明鼠64只，隨機分為8組，每組8只；其中4組為試驗組，4組為對照組。安排4種APS樣品進行試驗，每1種樣品設1組試驗，1組對照。試驗組每只腹腔注射黃芪多糖注射液0.5 mL/d，對照組注射等量生理鹽水；試驗期為7 d。

1.2.2 測定項目

最后1次注射APS 24 h后將小鼠處死，稱量小鼠的體重、脾重和胸腺重，并計算脾指數和胸腺指數；脾指數=脾臟重(mg)/體重(g)，胸腺指數=胸腺重(mg)/體重(g)。再計算試驗組相對于對照組的增長率：增長率=(試驗組測量值－對照組測量值)/對照組測量值×100%。按照《中華人民共和國獸藥典》（2015版二部）的規定，試驗組與對照組脾指數差值≥2判定樣品為合格，差值＜2判定樣品為不合格。

1.2.3 數據分析

使用Excel 2010軟件進行數據整理和描述統計，試驗組與對照組間的比較采用t檢驗法，數據以“平均數±標準差”表示。

2 結果與分析

2.1 各項目初步統計結果

APS生物活性檢測各項目測定結果見表1。

從表1可以看出，脾重和脾指數在4種樣品試驗組與對照組間均差異極顯著（P＜0.01），胸腺重1種樣品差異極顯著（P＜0.01）、2種樣品差異顯著（P＜0.05）；胸腺指數1種樣品差異極顯著（P＜0.01）、1種樣品差異顯著（P＜0.05）；體重2種樣品差異極顯著（P＜0.01）、1種樣品差異顯著（P＜0.05），但樣品S2t值為負值。從變異系數（CV）來看，胸腺重和胸腺指數變異程度較大，其次是體重，脾重和脾指數變異程度最小。

表1 各項目測定結果

2.2 各項目增長情況

比較各項目試驗組相對于對照組的增長情況，計算的絕對差值和增長率見表2。

表2 各項目試驗組相對于對照組的增長情況

從表2可以看出，體重項差值大小順序為：S3、S4、S1、S2，脾重項為：S1、S3、S4、S2，胸腺重項為：S4、S3、S2、S1，脾指數項為：S1、S2、S3、S4，胸腺指數項為：S4、S2、S3、S1。從各項目增長率的比較來看，樣品 S1和S3的脾重增長率均最大，樣品S4的胸腺重最大，樣品S2的胸腺指數最大。樣品S2的體重項試驗組小于對照組。根據判定標準可判定樣品S1、S2、S3為合格品，樣品S4不合格。

2.3 合格樣品試驗組與對照組的比較

將合格樣品S1、S2、S3進行綜合分析，考查各項目試驗組相對于對照組的變化情況，結果見表3。

從表3可以看出，試驗組體重高于對照組體重5.67個百分點，但差異不顯著（P＞0.05），試驗組變異程度大于對照組；脾重試驗組比對照組高71.98個百分點，差異極顯著（P＜0.01），試驗組變異程度小于對照組；胸腺重試驗組比對照組高25.93個百分點，差異顯著（P＜0.05），試驗組變異程度小于對照組；脾指數試驗組比對照組高66.33個百分點，差異極顯著（P＜0.01），試驗組變異程度小于對照組；胸腺指數試驗組比對照組高17.29個百分點，但差異不顯著（P＞0.05），試驗組變異程度小于對照組。

3 討論與結論

1）從試驗組與對照組的比較來看，APS對小鼠脾臟和胸腺生長均有促進作用，但對脾臟生長的促進作用更顯著，此結果與陳明志等[10]和高旭等[11]的研究結果一致。注射APS注射液可使小鼠脾重和脾指數極顯著提高（P＜0.01），可使胸腺重顯著提高（P＜0.05），而胸腺指數提高未達到顯著水平（P＞0.05），這與黃志遠等[12]的研究結果不完全相同。APS對體重生長的影響不顯著（P＞0.05），此結果與楊慶芳等[2]、柳志余等[3]和孫波等[4]的結論不一致，這可能與動物的種類及試驗設計有關。樣品S2體重項的特殊差異可能是由于試驗應激和誤差所造成。

表3 合格樣品試驗組與對照組間的比較

2）APS對小鼠體重、脾重和胸腺重促生長作用程度不同。比較而言對脾重影響最大（增長率71.98%），其次是胸腺重（增重率25.93%），對體重影響最小（增長率5.67%）。由于APS樣品不同其生物學效價不同，對小鼠脾重、胸腺重和體重的影響有較大差異；小鼠個體對APS樣品的反應不同，導致試驗組體重變異程度有增大的傾向，而由于APS對免疫器官的促生長作用，使脾重和胸腺重的變異程度有減小的傾向。

3）按照我國獸藥典提供的方法進行APS生物活性檢測，方法中僅規定了小鼠的體重要求，而沒有日齡、性別、注射操作、體重稱量、脾臟分離與稱量等方面的說明。在實際檢測時這些因素均可能成為誤差來源，影響試驗數據的精確性和準確性。所以相關部門應加強試驗規范性研究，出臺操作細則以降低試驗誤差，提高試驗結果的可靠性。