不同產地槐米中蘆丁的提取及含量測定比較

陳 璐，耿柏林，郭祿晶，蘇星超，強力源,鄭立穎，李 欠*

（1.甘肅農業大學農學院/甘肅省中藥材規范化生產技術創新重點實驗室，甘肅蘭州730070；2.甘肅農業大學水利水電工程學院，甘肅蘭州730070；3.甘肅農業大學植物保護學院，甘肅蘭州730070；4.甘肅農業大學管理學院，甘肅蘭州730070）

槐米為豆科植物槐（Sophora japonicaL.）的干燥花蕾。其性苦，微寒，具有涼血止血、清肝瀉火的功效，同時血痢、崩漏、痔瘡出血、吐血及頭暈等癥狀均可用槐米入藥進行醫治[1]。現代藥理研究表明：槐米具有保護心腦血管、改善糖尿病、抗菌、抗氧化和抑制黑色素生成等作用[2，3]。2015 年版中國藥典以高效液相色譜法測定蘆丁的含量及其他常規鑒別項目作為其質量控制的指標[1]，蘆丁具有抗炎、抗過敏、抗心肌缺氧及缺血、抗心律失常、降低血清膽固醇、抑制血小板集聚、抗潰瘍、抗腫瘤、解痙、鎮咳、抗病毒和增強免疫力等功能，是預防和治療糖尿病、心絞痛、慢性心功能不全、高血脂和預防動脈硬化心肌梗死、腦血栓等疾病的天然綠色藥物[4]。醫藥工業中也常以槐米為主要原料提取蘆丁[5-9]。除藥用價值以外，槐米也是一種常用的工業染料，其有效成分有很強的吸收紫外光能力，現在經常被添加到化妝品中用作防曬護膚品；如果與一些特殊中藥或者酶制劑添加在一起使用，還可以用作保健品和食品，同時開發出了槐米花茶，預計在國際上會有廣闊的市場前景[10-14]，具有很高的開發價值[15，16]。近代研究表明：槐米中蘆丁含量可高達23.5%，槐米價格相對便宜，產量可觀，因此對槐米中有效成分的提取及含量的測定具有很高應用價值。

本實驗通過采用堿溶酸沉法和超聲波輔助堿溶酸沉法，提取不同產地槐米中的蘆丁，采用紫外分光光度法測定其含量，為槐米藥材質量控制與評價提供理論科學依據。

1 材料

1.1 儀器及用具

HH-S 數顯恒溫水浴鍋、紫外可見分光光度計（T6 新世紀）、循環水式多用真空泵（SHB-Ⅲ）、電子萬用爐、電磁爐、超聲波清洗儀（PS-30A）、電熱恒溫鼓風干燥箱（GZX-GF101-4BS-Ⅱ）、電子天平、抽濾瓶、布氏漏斗、濾紙、玻璃棒、燒杯、量筒、容量瓶、錐形瓶、鐵架臺、漏斗、脫脂棉、溫度計、洗耳球、研缽。

1.2 試劑及材料

10%氫氧化鈉溶液、飽和石灰水、0.4%硼砂水溶液、5%硝酸鈉溶液、10%硝酸鋁溶液、蒸餾水、濃鹽酸、95%蘆丁水合物（薩恩化學技術（上海）有限公司）。

1.3 藥材

山西槐米、河北槐米、河南槐米、甘肅槐米分別購自全炬藥材行、亳州市京皖藥材廠、文擇軒中藥材、黃河藥材市場。

2 實驗方案

2.1 堿溶酸沉法

準確稱取槐米20 g，置于研缽中研碎，加入0.4%硼砂溶液120 ml，飽和石灰水80 ml，調節pH 8～9,置于電熱爐上保持微沸狀態30 min，過濾，重復2 次，合并濾液，并濃縮至一定體積。將濃縮液置于70℃水浴中，加入濃鹽酸調pH 為2～3，放置3～5 d，待提取液底部產生黃色或棕黃色沉淀，抽濾，得蘆丁粗品。

2.2 超聲波輔助堿溶酸沉法

準確稱取槐米20 g，置于研缽中研碎，加入0.4%硼砂溶液120 ml，飽和石灰80 ml，調節pH 8～9，超聲30 min，過濾，重復2 次，合并濾液，并濃縮至一定體積。將濃縮液置于70℃水浴中，加入濃鹽酸調pH 為2～3，放置3～5 d，待提取液底部產生黃色或棕黃色沉淀，抽濾，得蘆丁粗品。

3 結果與分析

3.1 提取工藝結果

傳統堿溶酸沉法和超聲波輔助堿溶酸沉法提取工藝結果如表1 所示。

3.2 繪制標準曲線

根據2015 版《中國藥典》，繪制蘆丁濃度-吸光度標準曲線。由于甲醇毒性大，本實驗用乙醇替代甲醇。

精密稱取蘆丁標準品200 mg，置于100 ml 容量瓶中，加乙醇定容至刻度，搖勻。精密吸取10 ml 至100 ml 容量瓶中加水至刻度，搖勻備用。

精密量取對照品溶液1 ml、2 ml、3 ml、4 ml、5 ml、6 ml，分別置25 ml 容量瓶中，各加水至6 ml、5%亞硝酸鈉溶液1 ml，混勻放置6 min，加10%硝酸鋁溶液1 ml，搖勻，放置6 min，加氫氧化鈉溶液10 ml，再加水至刻度，搖勻，放置15 min，以相應的試劑為空白，按照紫外分光光度法（通則0401），在500 nm 波長處測吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線（見圖1）。

表1 傳統堿溶酸沉法和超聲波輔助堿溶酸沉法提取工藝結果

3.3 測定提取率

取干燥蘆丁粗品約0.25 g，精密稱定，加無水乙醇定容至25 ml 容量瓶，搖勻備用。精密量取3 ml 置25 ml 容量瓶中，按照標準曲線制備項下的方法，制備供試品，在500 nm 的波長處比色測定吸光度，標準曲線法測定供試品溶液中蘆丁的濃度，通過計算得槐米中蘆丁的提取率，結果見表2。

表2 傳統堿溶酸沉法和超聲波輔助堿溶酸沉法提取率

4 結果與討論

堿溶酸沉法提取槐米中蘆丁的含量由高到低依次是甘肅、山西、河南、河北，超聲波輔助堿溶酸沉法提取槐米中蘆丁的含量由高到低依次是山西、甘肅、河北、河南。同時，甘肅槐米的提取率最高，山西槐米次之，河南、河北槐米相差不大。總體而言，超聲波輔助提取槐米中的蘆丁更加高效。

在提取槐米中蘆丁的過程中，使用傳統的堿溶酸沉法第一遍提取的時候試液蒸發過多，濾液較少或幾乎沒有，第二遍提取液較第一遍多，而超聲波輔助提取的過程中，試液幾乎不蒸發，提取液比傳統堿溶酸沉法幾乎多1 倍，除了甘肅產地外，其他3 個產地的超聲波輔助提取法的蘆丁粗品重和蘆丁提取率都高于傳統的堿溶酸沉法，可以間接說明使用超聲波輔助提取槐米中的蘆丁更加高效，而甘肅產地的提取率傳統法高于超聲波輔助提取法，可能是由于外界的因素或者其他因素導致。

本次實驗項目不同產地的槐米中蘆丁的含量差別較大，可能是由于不同產地的槐米品質差異或采收時間不同導致，采收時間對槐米中蘆丁的含量有很大影響。