益母縮宮顆粒對藥物不全流產大鼠子宮勻漿NO、NOS的影響

吳敏　何青蘭　李虹秀　李品英　黃正迎　楊婷　毛惠

【摘要】目的 通過研究益母縮宮顆粒對藥物不全流產大鼠子宮勻漿中NO含量、NOS活力的影響以探究本藥對模型大鼠的作用機制。方法 通過灌服米非司酮+米索前列醇造成藥物不全流產大鼠模型，造模成功后分別灌服不同劑量實驗藥物及對照藥物，然后檢測各組大鼠子宮勻漿中NO含量及NOS活力。結果 與模型組相比，益母縮宮顆粒高劑量組、新生化顆粒組大鼠子宮組織勻漿中NO含量降低，差異有統計學意義（P<0.05）;新生化顆粒組及益母縮宮顆粒各組NOS活力與模型組相比均無統計學差異（P>0.05）。結論 ①高劑量益母縮宮顆粒能降低模型大鼠子宮勻漿中NO含量，效果與新生化顆粒相當。

【關鍵詞】益母縮宮顆粒;藥物不全流產;子宮勻漿;NO含量

【中圖分類號】R714.21 【文獻標識碼】A 【文章編號】ISSN.2095.6681.2020.7..02

全世界每年大約有8500萬例非意愿妊娠，其中50%以流產告終[1]。近年來，由于米非司酮聯聯合索前列醇終止早孕具有成功率高、使用方便、經濟的特點而成為藥物流產的常用方法。但藥流后常有藥流不完全而導致陰道流血時間長和陰道流血量多的并發癥。我院院內制劑益母縮宮顆粒由《傅青主女科》生化湯化裁而來，由益母草、川芎、枳殼、當歸、炮姜、桃仁、生蒲黃組成，具有活血化瘀、促進宮縮的作用，前期研究證實其能有效減少藥物流產后陰道流血時間，有促進惡露排出及輔助子宮復舊的作用[2][3]，但其對藥物流產后子宮的作用機制尚未完全明確，本實驗按照王曉東[4]所述實驗方法造成藥物不全流產大鼠模型，檢測大鼠子宮勻漿中NO含量及NOS活力尋找本藥對于模型大鼠子宮可能的作用機制，為該藥的臨床應用提供依據，也為本藥的進一步研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

SPF級別SD大鼠，雌性60只，雄性30只，由成都達碩實驗動物有限公司提供，許可證號 SCXK（川）2015-030。雌性大鼠體重210～240 g，雄性大鼠體重250～280 g，飼養于西南醫科大學實驗動物中心，許可證號SYXK（川）2018-065。

1.2 實驗藥物

益母縮宮顆粒，10 g/袋，西南醫科大學附屬中醫醫院，批號20181005，大鼠給藥量為低劑量組3.125 g/（kg.d），中劑量組6.25 g/（kg.d），高劑量組12.5 g/（kg.d）。

新生化顆粒，9 g/袋，江蘇仁壽藥業有限公司，批號181211，大鼠服藥劑量為2.813 g/（kg.d）。

米非司酮，內含米非司酮25 mg/片，華潤紫竹藥業有限公司，批號431904011，大鼠給藥量為8.3 mg/kg。

米索前列醇，內含米索前列醇0.2 mg/片，華潤紫竹藥業有限公司，批號43190302，大鼠灌胃量為0.1 mg/kg。

水合氯醛，100 g/瓶，天津大茂化學試劑廠，批號20181201，使用時用生理鹽水配制成10% 溶液。

所有灌胃藥物均根據人鼠劑量比換算成大鼠灌胃劑量，成人體重按60 kg計算。

1.3 實驗所需試劑及儀器

實驗試劑：總蛋白（TP）測試盒，A045-2-1;一氧化氮（NO）測試盒，A012-1-2;總一氧化氮合成酶（NOS）測試盒，A014-2-2，均由南京建成生物工程研究所提供。

實驗儀器：恒溫電子水浴鍋，型號DZKW-4，北京中興偉業儀器有限公司;酶標儀，型號SpectraMAX Plus384，美谷分子儀器有限公司;722可見分光光度計，UV752N紫外可見分光光度計，上海佑科儀器儀表有限公司;優普超純水制造系統，型號UPH-Ⅱ-10T，成都超純科技有限公司;手提式不銹鋼壓力蒸汽滅菌器，型號SYQ-DSX-280B，上海申安醫療器械廠。

2 實驗方法

2.1 造模

按照王曉東[4]所述實驗方法造模，將雌雄大鼠于每日下午18：00按2：1合籠，次晨08：00檢查雌鼠陰道，查見陰栓或者陰道分泌物涂片于鏡下查見精子則視為該雌鼠受孕d1，未受孕雌鼠于下午18：00繼續合籠，連續合籠一周。

將受孕雌鼠取8只作為空白組分籠喂養，其余受孕雌鼠受孕d7統一造模，受孕d7日晨08：00灌胃米非司酮混懸液0.83 mg/ml，下午18：00灌胃米索前列醇混懸液0.01 mg/ml，空白組大鼠灌胃動物實驗中心飲用水，灌胃濃度均為1 ml/100g。灌胃米索前列醇后于雌鼠陰道內置入定量棉球1枚，次晨檢查大鼠陰道內棉球，查見血跡認定為造模成功。將造模成功大鼠分為益母縮宮顆粒高劑量組、中劑量組、低劑量組、模型組及新生化顆粒組。

各組大鼠均于受孕d8灌胃藥物，實驗組分別灌胃高、中、低濃度益母縮宮顆粒，對照組灌胃新生化顆粒，模型組及空白組大鼠灌服動物實驗中心飲用水。連續灌胃7天，每天1次。

2.2 動物標本的采集

各組大鼠于開始灌胃第8天用水合氯醛按0.35 ml/100 g劑量腹腔注射麻醉大鼠，麻妥后將大鼠固定于臺上，腹部正中行縱切口，逐層開腹，鈍性分離周圍組織，找到子宮，用眼科剪分離子宮，下自宮頸口，上自子宮末端，離斷子宮，置于天平上進行稱重，稱重后將子宮組織置于-80℃冰箱里保存以備制備組織勻漿。

2.3 子宮勻漿中NO含量及NOS活力的檢測方法

取出子宮組織，梯度溫度解凍，稱取組織塊0.1 g～0.2 g在冰生理鹽水中漂洗除去多余血液及雜質，用濾紙拭干組織，稱重，然后放入5 mL的EP管內。量取0.9%生理鹽水，按組織質量與生理鹽水體積m：v比為1：9的比例加入生理鹽水，然后剪碎組織，用勻漿機研磨，制成10%組織勻漿。將制備好的組織勻漿用離心機以3500 r/min轉速離心10分鐘，然后留取上清液以備檢測。按硝酸酶還原法檢測上清液中NO含量及NOS活力，按照指示盒說明進行操作。