檢測與診斷技術要點（第二版）（上）

1 概述

1.1 病原特性 非洲豬瘟病毒（ASFV）是一種有囊膜的DNA 病毒，是非洲豬瘟病毒科、非洲豬瘟病毒屬的唯一成員。ASFV 粒子直徑約為200 納米，呈正20面體結構，由多層同心圓結構組成，由內到外依次是基因組DNA、基質層、內膜、核衣殼和外囊膜。首次發現的傳入我國的ASFV毒株屬于基因II型。ASFV的衣殼蛋白p72，膜蛋白p54、p30 和p12 具有良好的抗原性。ASFV 耐受酸堿的范圍較廣，pH 值4～10 條件下在無血清的培養基中保持穩定，但在pH值低于4或高于11.5時數分鐘內可被滅活。ASFV 對環境的抵抗力很強，在低溫條件下可存活數年。ASFV對熱的抵抗力較弱，60 ℃20 min 或56 ℃70 min 可被滅活。一般的消毒措施均可有效殺滅ASFV。最有效的消毒劑是去污劑、次氯酸鹽、堿類及戊二醛。

1.2 傳染源 帶非洲豬瘟病毒的野豬和發病家豬的分泌物及排泄物，含有病死豬組織或非洲豬瘟病毒污染的泔水，含非洲豬瘟病毒的豬肉及其制品，以及鈍緣軟蜱。

1.3 傳播途徑 感染豬與健康易感豬的直接接觸可傳播非洲豬瘟病毒。非洲豬瘟病毒可通過飼喂污染的泔水、污染的飼料、墊草、車輛、設備、衣物等間接傳播。鈍緣蜱屬的軟蜱，特別是O.moubata（非洲）和O.erraticus（歐洲）是ASFV 的宿主和傳播媒介。消化道和呼吸道是最主要的感染途徑。

1.4 易感動物 家豬和野豬。其他哺乳動物包括人類均不感染非洲豬瘟病毒。目前報道的發病豬群主要是飼喂了被非洲豬瘟病毒污染的泔水。不同品種、日齡和性別的豬均對非洲豬瘟病毒易感。

1.5 潛伏期 家豬為3～19 d不等。

1.6 臨床癥狀 非洲豬瘟是能引起不同品系、不同年齡家豬和野豬一系列綜合征的疾病。急性豬瘟表現為高燒、網狀內皮系統出血，死亡率高。ASFV 有強毒力、中等毒力和低毒力三種類型毒株。臨床上可分為最急性型、急性型、亞急性型和慢性型。

1.6.1 最急性型 發病豬體溫達41～42 ℃，呈現厭食、食欲廢絕、精神沉郁、皮膚充血等癥狀，1～4 d 內死亡。也有無癥狀死亡的豬。發病率和病死率均可達100%。

1.6.2 急性型 發病豬體溫達40～42 ℃，呈現厭食、不愿活動、皮膚發紅、嘔吐、鼻腔出血、血便、便秘等。妊娠母豬流產。病死率可達90%～100%。

1.6.3 亞急性型 與急性型類似。病豬出現中度發熱，食欲下降。皮膚出血和水腫，感染后7～20 d死亡，病死率為30%～70%。

1.6.4 慢性型 病豬體重下降、生長不良，呈現間歇熱，耳部、腹部和大腿內側皮膚發生壞死或潰瘍，關節腫大，感染豬可出現呼吸道癥狀。

1.7 實驗室診斷 ASF 的實驗室診斷分為病原學診斷（包含病毒分離、病毒抗原和基因組DNA的檢測）和抗體檢測。依據地區或國家的疾病情況及診斷實驗室的能力選擇合適的診斷方法。

1.7.1 鑒定病原 國家法定實驗室診斷必須進行豬原代巨噬細胞或骨髓培養接種分離病毒，用熒光抗體試驗（FAT）檢測組織涂片或冷凍切片中的抗原，用PCR方法檢測基因組DNA。PCR是一種優良的、靈敏的、快速的ASFV 檢測技術，在很多情況下都是非常有用的。特別是組織不適合病毒分離和抗原檢測的情況。

在可疑病例中，病料在豬原代巨噬細胞培養物中傳代，并重復上述過程。

1.7.2 血清學試驗 耐受過ASF 自然感染的豬通常在感染后7～10 d產生抗ASFV抗體，這些抗體能持續很長一段時間。若疾病呈地方性流行，或者是由低毒力毒株引起的最初的暴發，對于新暴發的研究需要對送檢的血清中的特殊抗體和組織滲出液進行檢測。很多方法如間接熒光抗體（IFA）、酶聯免疫吸附試驗（ELISA）和免疫印跡試驗均可用于抗體檢測。

2 早期發現

為盡早發現ASF 疫情，首先要讓豬場全體員工熟悉ASF 的臨床癥狀。了解周邊3 km 范圍內的養豬場戶、屠宰場點、生豬交易場所、無害化處理場等情況，密切關注周邊生豬異常死亡情況，及時發現疫情隱患。

時刻關注本豬場各個環節的豬只異常情況，包括豬只的精神狀態、采食情況、體溫變化、體表變化和經產母豬表現等。目前我國大多數的ASFV 感染病例屬于急性-亞急性。通常，ASF 急性-亞急性的癥狀主要包括：發燒、昏睡、厭食、皮膚出血以及循環系統、呼吸系統、消化系統出現問題并伴有神經失調。

2.1 看精神狀態 及時發現欄舍內眼神異常的豬只（這時豬只可能還未排毒）、精神沉郁的豬只，并及時采樣和送檢。豬場要積極發動一線員工關注異常豬只，對于提前發現豬只異常并及時采樣經實驗室檢測陽性的，給予相應獎勵。

2.2 觀察采食情況 關注群體和個體豬只的采食情況，對于采食量稍微減少的（排除飼料因素），要盡快采樣送檢。采食量明顯下降的豬只一般會伴隨著體溫升高。

2.3 監測體溫變化 正常保育豬、育肥豬的體溫一般在39～40 ℃之間；正常成年基礎豬群的體溫在38～39 ℃之間（其中母豬發情、分娩前后幾天，體溫會升到39～40 ℃之間）。如果發現體溫超過正常范圍的豬只，應及時采樣送檢。為了防止測量體溫時交叉污染，體溫計必須一豬一換，須戴手套和穿防護服；可采用遠紅外體溫計測溫，盡量不入欄。

2.4 觀體表變化 看到皮膚發紅豬只，表明豬只處于發燒狀態。另外，有些豬只打針時出現凝血不良。對于這些異常豬只，要及時采樣檢測。

2.5 看經產母豬的表現 經產母豬除上述臨床表現外，還會出現流產。ASF 造成流產有別于其他疫病常見的黑胎或白胎，會出現胎兒均質發紅。

一旦發現可疑癥狀，應第一時間采樣送檢。采樣優先順序如下：鼻腔拭子＞唾液＞陰門拭子＞肛門拭子。

3 現場排查

3.1 準備工作

3.1.1 人員準備 了解非洲豬瘟基本知識（基本的生物學特征、流行病學特點、臨床表現、剖檢病理變化等）。了解非洲豬瘟感染與傳播的高風險因素（飼喂泔水、生物安全水平低、動物販運、豬肉及其制品流通）。了解排查工作中需遵守的生物安全操作要求，避免人為造成傳播。養殖戶等相關人員可能面臨較大壓力，應注意工作方式方法。

3.1.2 車輛準備 車輛必須徹底清洗消毒。車輛不攜帶無關物品。在車內、車的后備箱里鋪塑料布防止污染。

3.1.3 物品準備（生物安全防護及采樣所需物品）

3.1.3.1 進場所需材料清單 膠靴；垃圾袋（包括生物危險品垃圾袋）；一次性生物安全防護服；自封袋（用來裝手機或其他設備）；口罩；面部用消毒濕巾；鞋套或靴套；密封用膠帶；一次性乳膠手套；護目鏡；洗滌劑及刷子；消毒劑及噴壺（適用于非洲豬瘟病毒的消毒劑）。

3.1.3.2 采樣所需材料清單 一般材料：標簽和記號筆；數據記錄表、筆、寫字板；盛放針頭和刀片的銳器盒；高壓滅菌袋；用于環境采樣的拭子和盛放拭子用的離心管。

樣品包裝運輸所需材料：容器/離心管/小瓶（防漏并標示清楚）；吸水紙；密封性好的容器或袋子，作為二次包裝（即防漏），用于儲存動物樣品的容器和采血管；冷藏箱（+4 ℃）；便攜式-80 ℃冷凍箱/干冰/液氮罐（僅在遠離設備齊全的實驗室進行取樣時才需要）；保定動物的材料（如套索、木板）。

采血所需材料：消毒劑和脫脂棉（酒精棉）；不含抗凝劑的無菌采血管（10 mL）（紅色蓋子）；含有EDTA的無菌采血管（10 mL）（紫色蓋子）；根據豬的大小和采樣部位（頸靜脈、耳緣靜脈）選取真空采血管或10～20 mL注射器。

3.2 進出養殖場要求

3.2.1 抵達養殖場 車輛停在養殖場入口附近，不要駛進場內。

在養殖場指定的地點（清潔區），穿戴個人防護設備（如需要，應遵循養殖場的要求進行個人防護），并進行物資準備、消毒劑制備等。

進入養殖場生產區域前，脫下和摘掉不必要的衣服和物品（夾克、領帶、手表等），清空衣服口袋，按照養殖場進場程序（淋浴洗澡或其他方式）進入生產區域。電子設備（移動電話等）應放置在密封的塑料袋中，以便隨后進行清潔和消毒。在養殖場內，只能通過塑料袋使用手機，不要從袋子里拿出。其他非一次性物品，應在消毒后進場。如需要，應按照養殖場物資進場程序進行消毒后進場。消毒工作要在清潔干燥的地面進行（最好是混凝土地面），應劃分清潔區和非清潔區并保證界線清晰。

3.2.2 穿戴個人防護設備（在清潔區）

（1）脫下鞋子，并放在塑料布上。

（2）在遵守養殖場進場要求的前提下，部分場需要脫去全部個人衣服，洗澡后穿戴養殖場內部衣服方可進場。

（3）部分場可以首先穿戴一次性防護服，穿上靴子。戴手套，手套要用膠帶封上。

（4）如果需要穿防水服，防水服應套在靴子外層。再戴一層手套，方便中間更換。

（5）靴套至少覆蓋膠鞋底部和下部。

（6）進場前，戴口罩并仔細檢查物品清單。

3.2.3 離場前準備

（1）在非清潔區域對接觸過養殖場的所有物品進行清洗和消毒處理。

（2）對盛放樣品容器的表面進行消毒，然后放在清潔區。

（3）脫下鞋套放入非清潔區的垃圾袋中，然后徹底擦洗靴子（特別是鞋底）。脫下手套并放入非清潔區的垃圾袋中。脫下一次性防護服并放入非清潔區的垃圾袋中。脫下靴子，對靴子進行消毒后放入清潔的袋子里。

（4）手和眼鏡也必須進行消毒，并用消毒濕巾清潔臉部。

（5）進入生產區域的人員在指定區域沐浴更衣后方可離開。

（6）非一次性物品（膠靴等）和盛放樣品的容器用雙層袋盛放并用膠帶封裝?？纱┗厝粘５男印y帶出養殖場的袋子需放在車輛內預先鋪好的塑料布上。

（7）接觸過樣品或潛在污染的車輛，應進行重點清洗消毒。

（8）在離開可能受到污染的區域之前，清潔和消毒汽車的輪胎和表面。清除所有可見的污垢。不要忘記清理隱藏的區域，如車輪拱、輪胎板和汽車底部。清除所有污垢后，用消毒劑噴灑表面。

（9）處理車內所有垃圾并清理所有污垢（應妥善處理垃圾）。用浸有消毒劑的布擦拭方向盤、變速桿、踏板、手閘等。

3.2.4 離場后

（1）如家中沒有飼養生豬，可以回家淋浴并徹底清洗頭發，并將當天所穿衣服浸泡在消毒劑中30 min；如果家中飼養生豬，則應在其他地方沐浴、清洗。

（2）如果進入了疑似感染場，確診前不應前往任何飼養生豬的場所。如果確認該場感染了非洲豬瘟，3 d內不應前往任何有豬的場所。

（3）再次對汽車內部和外部進行消毒。清除汽車上的所有塑料布，并妥善處理。

3.2.5 消毒劑選擇

（1）非洲豬瘟病毒對熱的抵抗力較弱，一般的消毒措施都可以將病毒殺滅，但是在感染病豬組織以及低溫條件下病毒的存活時間可達6個月以上乃至數年。

（2）最有效的消毒劑是去污劑、次氯酸鹽、堿類及戊二醛。

（3）8/1 000 的氫氧化鈉（30 min）、2%～3%次氯酸鹽氯（30 min）、3/1 000福爾馬林（30 min）、3%鄰苯基苯酚（30 min），均可滅活病毒。堿類（氫氧化鈉、氫氧化鉀等）、氯化物和酚化合物適用于建筑物、木質結構、水泥表面、車輛和相關設施設備的消毒，酒精和碘化物適用于人員消毒。

（4）不易消毒的設備放置在陽光下暴曬消毒。

3.3 臨床診斷 非洲豬瘟病豬主要臨床表現的差異較大，不易識別，但通常有以下幾種或全部典型癥狀，包括高熱、嘔吐、腹瀉或便秘，有的便血，虛弱、難以站立，體表不同部位（尤其是耳、鼻、腹部、臀部）皮膚呈紅色、紫色或藍色，有的咳嗽、呼吸困難，母豬流產，產死胎或弱胎。出現上述臨床癥狀后，一般2～10 d 內死亡。剖檢可見內臟多個器官組織出血，脾臟顯著腫大，顏色變暗，質地變脆。部分首次發生非洲豬瘟的養殖場，豬群發病非常急，最急性型不表現任何癥狀而突然死亡，無特殊臨床表現和剖檢病變。

3.3.1 臨床癥狀 根據其毒力，ASFV 分為三個主要類別：高毒力毒株、中等毒力毒株和低毒力毒株。ASF的臨床表現形式從特急性（非常急）到無癥狀（不明顯）不等。目前我國大多數的ASFV感染病例屬于急性-亞急性。非洲豬瘟的特征通常是豬突然死亡、死前呈現體溫升高。臨床表現從感染7 d 之內急性死亡，到持續幾周或幾個月的慢性感染不等。

主要臨床癥狀有：無癥狀突然死亡；發病率、病死率高；高熱，體溫升高至40.5～42 ℃；耳、四肢、腹背部皮膚有出血點、發紺；嘔吐，腹瀉或便秘，糞便帶血；虛弱、步態僵直，不愿站立等；偶見眼、鼻有黏液膿性分泌物。

其他臨床癥狀有：精神沉郁、食欲下降；呼吸困難，濕咳；關節疼痛、腫脹；妊娠母豬流產、產死胎或弱仔。

3.3.2 剖檢病變 非洲豬瘟特征性剖檢病變通常是可見多臟器出血。

最明顯的剖檢病變是：淋巴結（特別是胃腸和腎）增大、水腫以及整個淋巴結出血，形態類似于血塊；脾臟顯著腫大，一般情況下是正常脾的3～6倍，顏色變暗，質地變脆；腎臟表面有瘀點（斑點狀出血）。

剖檢變化還可能包括：皮下出血；心包積液和體腔積水、腹水；心臟表面（心外膜）、膀胱和腎臟（皮質和腎盂）有出血點；肺可能出現充血和瘀點，氣管和支氣管有泡沫，嚴重的有肺泡和間質性肺水腫；身體有瘀點、瘀斑（較大的出血），胃、小腸和大腸中過量的凝血；肝充血和膽囊出血。

（未完待續）