芪苓散粗多糖對四氯化碳引起急性肝損傷雛雞血清中ALT和AST的影響

林文海 福建省永春縣鄉鎮畜牧獸醫站 福建永春 362600

肝病是一個全球高發又會引起死亡的疾病，嚴重威脅著社會發展，一直是廣大醫學界一個重要研究課題[1]。肝臟是動物體代謝和解毒的主要器官，它可以把多種毒物、藥物分解成小分子物質以便進一步吸收、排泄，從而減少毒物、藥物對動物體的破壞。許多原因都會引起肝損傷，現在醫學界主要研究化學性、酒精性、病毒性和免疫性等因素引起的肝損傷[2]。在肝臟發生病理改變后，動物體內多個系統也會因此受到影響，并且內源性小分子代謝物轉歸也會發生變化[3]。我國畜禽急性肝損傷性情況持續增多，但目前又沒有切實有效的治療方法，嚴重制約畜禽業的可持續發展[4]。重點研究急性肝損傷發病機理和探討一些比較有實效的治療方法，對慢性肝病防治有十分顯著的作用[5]。由于復雜性的肝臟功能和多樣性的肝損害因素，造成沒有一個試驗模型可以系統、準確地反映特定肝損傷的本質。另外，已有的急性肝損傷試驗模型操作繁瑣、穩定性不高、計量方法不同，因此有待進一步完善，以便進一步研究肝損傷機理[6]。本試驗選擇雛雞為試驗動物，旨在建立藥物性和化學性急性肝損傷試驗模型，為研究肝損傷機理和保肝藥物選擇提供參考基礎數據。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 試驗材料與試劑 芪苓散粗多糖粉末；甲醛、四氯化碳和市售普通食用花生油；丙氨酸氨基轉移酶（ALT）試劑盒和天門冬氨酸氨基轉移酶（AST）試劑盒。

1.1.2 主要儀器 DHG-9140A電熱恒溫鼓風干燥箱；TGL-16B高速臺式離心機；VIS-7220可見光分光光度計；XD-811L半自動生化分析儀。

1.1.3 試驗動物 1日齡三黃雞雛雞若干，購自永春某雞場。

1.2 方法

1.2.1 低劑量組和高劑量組芪苓散粗多糖制備（1）低劑量組(濃度125mg/L)：精密稱取芪苓散粗多糖12.5mg，溶于100mL超純水中，充分混勻，貼上“低劑量組”標簽，置低溫下保存、待用。（2）高劑量組(濃度500mg/L)：精密稱取芪苓散粗多糖50mg，溶于100mL超純水中，充分混勻，貼上“高劑量組”標簽，置低溫下保存、待用。

1.2.2 四氯化碳-花生油混合溶劑配制 把四氯化碳（濃度≥99.5%）和市售普通花生油根據體積比1:1均勻混合。

1.2.3 試驗動物分組與處理 將32羽1日齡健康三黃雛雞平均分為空白對照組、四氯化碳模型組、芪苓散粗多糖低劑量組和芪苓散粗多糖高劑量組(以下分別簡稱空白組、模型組、低劑量組、高劑量組)?？瞻捉M和模型組不飼喂多糖，低劑量組、高劑量組分別灌喂125mg/L、500 mg/L芪苓散粗多糖。除空白組外，其他三組在喂芪苓散粗多糖2周后的第1 d、第4 d和第7 d灌喂四氯化碳-花生油混合溶劑(按12mL/kg)。各組進行隔離飼養，試驗期2周。最后一次灌喂四氯化碳-花生油溶液24 h后，各組試驗動物心臟采血致死。

1.2.4 血清的制備 雛雞心臟采血，5 000 r/min離心5min，將血清分裝在eppendorf管中，置-20℃保存，待測。

1.2.5 樣品的測定 丙氨酸氨基轉移酶和天門冬氨酸氨基轉移酶使用連續監測的方法進行測定，測定方法根據試劑盒說明書要求進行。

1.3 數據統計處理 所有數據用統計軟件SPSS 13.0進行LSD方差分析和差異顯著性檢驗，數據均以X±SD表示。

2 結 果

芪苓散粗多糖對急性肝損傷的雛雞血清ALT和AST活性影響情況見表1。對比各組數據可以發現：模型組與空白組比較，模型組的酶指標水平極顯著升高（P＜0.01）。多糖組與模型組比較，可見多糖組明顯降低CCl4肝損傷血清ALT與AST水平。高劑量多糖組與低劑量多糖組比較，可見高劑量多糖組的效果更明顯。

表1 芪苓散粗多糖對急性肝損傷雛雞血清ALT、AST活性的影響（n=8）

3 討 論

3.1 CCl4引起雛雞肝損傷的機理 肝臟會把進入體內的藥物進行氧化、還原、聚合、羥化以及去甲基化等，因此，肝臟是機體內器官中最容易被藥物所攻擊的臟器[7]。

如今醫學界普遍認為CCl4對肝臟中毒的主要機制是自由基的形成及其引發的鏈式過氧化反應。經肝微粒體細胞色素P450依賴性混合功能氧化酶的代謝作用，四氯化碳在體內生成三氯甲基自由基和三氯甲基過氧自由基及一系列氧活性物。這些產物不僅可與細胞內多種大分子成分發生不可逆的共價結合而導致肝損傷，也會與胞內脂質、蛋白、核脂質、核蛋白和DNA等多種細胞內大分子進行不可逆共價結合而導致細胞死亡，特別是自由基還會破壞核酸分子的完整性和構型，損傷DNA[8-9]。并且CCl4還會抑制鈣泵的活性，使Ca2+內流增加，從而導致細胞功能障礙，胞漿Ca2+濃度升高，胞漿內轉氨酶滲入血液，肝微粒體和線粒體功能喪失，肝細胞代謝紊亂，最終死亡[8]。明確肝損傷作用機制可以為治療肝臟疾病提供理論基礎，為尋找和開發新的保肝護肝藥物提供有效途徑[10]。

3.2 芪苓散粗多糖對CCl4致動物肝損傷后ALT和AST的影響 據資料表明，在動物肝臟中，轉氨酶是催化氨基酸與酮酸之間氨基轉移的一類酶，其中以ALT和AST最為重要[11]。ALT主要分布于肝細胞漿的可溶性部分，AST主要分布于肝細胞漿的可溶性部分及線粒體中。CCl4的破壞性主要是在肝細胞代謝過程中所產生的自由基會破壞肝細胞膜結構，使得肝細胞膜通透性變高，導致細胞內一些酶類進入血液中，從而使血液中的一些酶類指數升高[12]。只要有1%肝細胞發生壞死，血清中轉氨酶活力就會增加1倍，因此ALT、AST等血清轉氨酶含量是肝細胞損傷情況的重要指標，通過測定血清或血漿中ALT、AST等的活性變化就能夠知道肝臟受到損害的情況[13]。有研究認為ALT是肝損傷的一個很靈敏指標，ALT只能反映肝細胞的完整性，ALT增高往往說明肝實質細胞受到損傷[14]。

正常情況下，AST主要存在于組織細胞中，血清中可檢測到的含量極少[15-16]。但當肝臟細胞受到損傷后，AST會進入血液中，從而血液中酶活力明顯增加，可以發現血清中AST指數偏高。因為AST在血清中的含量能夠反映肝臟和心臟等內臟器官受損害情況，所以，在臨床中測定血清中該酶含量有利于疾病的診斷和預后的觀察。

4 結 論

本試驗采用CCl4對雛雞的肝臟進行攻毒，引起雛雞肝臟急性損傷，效果明顯。CCl4模型組雛雞血清ALT、AST的活性均比空白組極顯著升高，充分說明試驗建模是成功的。

試驗結果顯示，灌喂芪苓散粗多糖組能夠降低雛雞血清中ALT、AST的活性，且隨著劑量的增高效果更明顯，表明芪苓散粗多糖對CCl4引起的雛雞急性肝損傷有一定的保護作用。