H2O2氧化-熒光分析法測定烏骨雞黑色素細胞中黑色素含量

陳露露，田穎剛,2*

1. 南昌大學食品科學與技術國家重點實驗室，江西 南昌 330047 2. 南昌大學生物質轉化教育部工程研究中心，江西 南昌 330047

引 言

烏骨雞(black-bone silky fowl, BSF) 作為我國特有的藥食兩用的資源，具有補肝腎、益氣血, 尤其在增強體力、補血、治療糖尿病和婦科疾病等方面效果顯著[1]。與其他品種雞相比，較顯著差別在于烏骨雞體內含有較多的黑色素。現代科學研究已證實黑色素具有抗氧化、抗衰老、抗誘變等眾多生理功能[2]。

烏骨雞黑色素是由黑色素細胞生成，且廣泛分布于烏骨雞許多組織和器官表面，如皮膚、肌肉、心臟、腎臟、消化器官和骨骼等。本實驗室已建立了烏骨雞黑色素細胞的培養體系[3]，這對于烏骨雞黑色素的進一步研究具有重要意義。目前黑色素含量的測定方法有稱重法[4]、色差儀比色法[5]、紫外-可見分光光度法[6]和高效液相色譜法(HPLC)等[7]。前兩種方法可粗略地測定出黑色素含量，但在測定過程中可能會受到一些不溶于水的雜質的干擾[8]。研究證實，紫外分光光度法有一定的不足之處： (1)假陽性： 黑色素在測量過程中會出現散射和假吸收。(2)高背景： 黑色素樣品中會有殘留的蛋白，這些蛋白會使背景偏高，導致測量值較大。高效液相色譜法(HPLC)也用于黑色素定量測量，該方法靈敏度高、準確，主要通過測定黑色素的氧化產物PDCA和PTCA的含量來間接換算成樣品中真黑色素的含量，但其操作復雜，成本較高[9-11]。

目前對于黑色素細胞中的黑色素含量的測定，主要采用NaOH裂解法[12-14]，該方法是將黑色素細胞在加熱的NaOH中裂解，再采用酶標儀在400 nm左右測定其吸光值來定量細胞中黑色素的含量。……