復(fù)方甘草酸苷對(duì)自身免疫性肝炎患者肝臟單核巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響及機(jī)制

文曉麗 李阿云 歐陽(yáng)山丹 李 揚(yáng) 張智敏 黃燕鵬 黃小慧（中國(guó)人民解放軍陸軍第七十三集團(tuán)軍醫(yī)院 廈門(mén) 361000）

1 資料與方法

1.1 一般資料：抽選2017年8月—2019年8月在我院接受治療的40例自身免疫性肝炎（AIH）患者，將培養(yǎng)時(shí)日達(dá)2 d的肝臟單核巨噬細(xì)胞隨機(jī)分成對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組，各20例。對(duì)照組男性13例，女性7例；年齡36～76歲。實(shí)驗(yàn)組男性15例，女性5例；年齡35～78歲。兩組一般數(shù)據(jù)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），有可比性。入選標(biāo)準(zhǔn)：①診斷確定為自身免疫性肝炎（AIH）患者且判定標(biāo)準(zhǔn)的評(píng)分≥7分；②有應(yīng)用糖皮質(zhì)激素的絕對(duì)或者相對(duì)特征，且沒(méi)有使用糖皮質(zhì)激素禁忌癥；③處于自身免疫性肝炎（AIH）的活動(dòng)期。排除標(biāo)準(zhǔn)：①甘草類藥物及食品過(guò)敏；②確診之后給予過(guò)其他藥物治療。

1.2 細(xì)胞的分離培養(yǎng)以及分組處理：對(duì)40例患者的1 mL晨起空腹的外周靜脈血用梯度離心的辦法獲取外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC），再把PBMC用CD14克隆抗體磁珠，用流式細(xì)胞儀處理后獲得單核巨噬細(xì)胞。單核巨噬細(xì)胞要放置在培養(yǎng)基中（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司）注入10 μg/mL慶大霉素及10%熱失活小牛血清，放入培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)，細(xì)胞培養(yǎng)液2 d進(jìn)行1次更換。實(shí)驗(yàn)組給予濃度為1 mg/mL的復(fù)方甘草酸苷，對(duì)照組使用等量緩沖液，處理30 min。

1.3 細(xì)胞的吞噬能力檢測(cè)：用顯微鏡觀察并且計(jì)算每個(gè)吞噬細(xì)胞之內(nèi)含有的吞噬大腸桿菌或者凋亡小體的數(shù)量，每塊玻璃鏡片上最少300個(gè)細(xì)胞，計(jì)算吞噬率、吞噬指數(shù)。吞噬率為每100個(gè)復(fù)方甘草酸苷是肝細(xì)胞膜保護(hù)劑，主要成分為β-甘草酸苷，輔助成分為甘氨酸半胱氨酸復(fù)合。復(fù)方甘草酸苷有抗炎的作用，已經(jīng)知道的抗炎作用機(jī)制分為兩種，一種是通過(guò)壓制花生四烯酸代謝水平來(lái)控制細(xì)胞色素C釋放，以此約束磷脂酶A2活性，抑制補(bǔ)體激活；另一種是以非特異性抗炎以及保護(hù)細(xì)胞膜作用來(lái)控制熱休克蛋白90表達(dá)，以此減少糖皮質(zhì)激素的受體與配體親和力[1]。自身免疫性肝炎（AIH）是肝臟炎癥的疾病，其原因還尚不明確，特征主要為不同程度轉(zhuǎn)氨酶的變高、高y-球蛋白血癥、自身免疫抗體呈陽(yáng)性、淋巴漿細(xì)胞浸潤(rùn)的界面性肝炎以及形成肝細(xì)胞玫瑰花結(jié)。肝臟是固有的免疫及調(diào)控全身的適應(yīng)性免疫的場(chǎng)所，其中固有的免疫在肝臟炎癥、纖維化的形成中有極其重要的用處[2]。單核巨噬細(xì)胞對(duì)機(jī)體先天的免疫系統(tǒng)有重要的作用，也是其重要的組成部分[3]。本文主要探究復(fù)方甘草酸苷對(duì)于自身免疫性肝炎AIH患者肝臟單核巨噬細(xì)胞的吞噬功能影響以及機(jī)制，現(xiàn)報(bào)道如下。吞噬細(xì)胞之內(nèi)的吞噬大腸的桿菌細(xì)胞數(shù)量/吞噬細(xì)胞總量×100%；吞噬指數(shù)為每100個(gè)吞噬細(xì)胞吞噬后大腸桿菌數(shù)量/吞噬細(xì)胞總量×100%。

1.4 細(xì)胞表面抗原提呈分子（CD80、CD40）、白細(xì)胞抗原DR的表達(dá)檢測(cè)：利用流式細(xì)胞儀來(lái)檢測(cè)肝臟單核巨噬細(xì)胞表面的抗原提呈分子（CD80、CD40）、白細(xì)胞抗原DR的表達(dá)，結(jié)果用相對(duì)表達(dá)量來(lái)表示（CD40、CD80、白細(xì)胞抗原DR抗體購(gòu)買(mǎi)于Sigma公司）。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：本研究用SPSS19.0軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)量資料采用（±s）表示，行 t檢驗(yàn)，P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組細(xì)胞吞噬能力（吞噬率、吞噬指數(shù)）對(duì)比：實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞吞噬率、吞噬指數(shù)顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 兩組細(xì)胞吞噬能力（吞噬率以及吞噬指數(shù)）對(duì)比（±s）

表1 兩組細(xì)胞吞噬能力（吞噬率以及吞噬指數(shù)）對(duì)比（±s）

組別 吞噬率（%） 吞噬指數(shù)實(shí)驗(yàn)組（n=20）對(duì)照組（n=20）tP 48.76±1.23 25.39±3.59 27.540 0.000 80.59±4.65 33.48±1.98 41.686 0.000

2.2 兩組細(xì)胞表面的CD80、CD40、白細(xì)胞抗原DR對(duì)比：實(shí)驗(yàn)組肝臟單核巨噬細(xì)胞表面的抗原提呈分子（CD80、CD40）、白細(xì)胞抗原DR的相對(duì)表達(dá)量明顯高于對(duì)照組（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 兩組細(xì)胞表面CD80、CD40、白細(xì)胞抗原DR對(duì)比（±s）

表2 兩組細(xì)胞表面CD80、CD40、白細(xì)胞抗原DR對(duì)比（±s）

組別 CD40 CD80 白細(xì)胞抗原DR實(shí)驗(yàn)組（n=20）對(duì)照組（n=20）tP 0.816±0.029 0.436±0.018 49.789 0.000 0.816±0.029 0.436±0.018 49.789 0.000 0.925±0.058 0.563±0.028 25.136 0.000

3 討論

甘草酸苷屬于甘草甜素類的制劑，有減輕肝臟炎性的反應(yīng)、減少谷丙轉(zhuǎn)氨酶、控制肝細(xì)胞膜、阻止肝細(xì)胞脂肪的性變、控制病毒的增殖、免疫調(diào)控、阻止肝硬化、降低膠原纖維的增生等功能[4]。自身免疫性肝炎（AIH）為器官特異性的自身免疫性的疾病，具有血清自身抗體呈現(xiàn)陽(yáng)性、HLA遺傳的背景、肝組織之內(nèi)T細(xì)胞的浸潤(rùn)、伴發(fā)其他的自身免疫性的疾病、對(duì)免疫的控制治療有效等特征。AIH臨床表現(xiàn)缺乏特異性、復(fù)雜多變、起病的方式也具有多樣性。大多數(shù)的AIH患者急性肝炎表現(xiàn)的過(guò)程中，也有可能隱匿起病，病程發(fā)展到失代償期肝硬化之后才會(huì)有臨床表現(xiàn)[5]。單核巨噬系統(tǒng)固有成員就包括單核巨噬細(xì)胞，在抗感染、先天的免疫應(yīng)答當(dāng)中具有中心作用。巨噬細(xì)胞是體內(nèi)免疫細(xì)胞，有極大的吞噬能力。巨噬細(xì)胞吞噬殺傷的能力極強(qiáng)，是機(jī)體非特異性的免疫防御當(dāng)中的主要免疫細(xì)胞。病原微生物或者其他的外來(lái)抗原到機(jī)體之后，單核巨噬細(xì)胞首先就會(huì)將其吞噬并且清除[6-7]。有研究顯示，單核巨噬細(xì)胞的功能異常跟自身免疫性肝炎（AIH）的發(fā)病緊密相關(guān)。對(duì)慢性肝病的患者使用復(fù)方甘草酸苷治療之后，能夠增加患者單核巨噬細(xì)胞吞噬率及吞噬指數(shù)[8]。

綜上所述，本研究結(jié)果顯示復(fù)方甘草酸苷可以有效提高自身免疫性肝炎（AIH）患者的肝臟單核巨噬細(xì)胞的吞噬率及吞噬指數(shù)，且作用機(jī)制為提高AIH患者肝臟單核巨噬細(xì)胞的抗原呈遞能力可能。但本文僅僅對(duì)體外細(xì)胞進(jìn)行了試驗(yàn)，所以復(fù)方甘草酸苷對(duì)于自身免疫性肝炎（AIH）患者的治療作用、治療效果還需要進(jìn)一步進(jìn)行驗(yàn)證。