腺苷激酶-1在非小細胞肺癌患者血清中的表達與肺癌臨床病理學特點及預后的關系

付 剛

焦作市第二人民醫院病理科,河南 焦作 454000

非小細胞肺癌（non small cell lung cancer，NSCLC）是臨床上較為常見的呼吸系統惡性腫瘤，相關研究顯示NSCLC的發病率可達145/10萬人以上，且近年來呈現出了一定的上升趨勢［1］。NLCLC的遠期生存預后較差，臨床上缺乏相應的預后評估指標［2］。血清學指標在惡性腫瘤的診斷及臨床預后評估過程中具有重要的參考意義，其檢測較為方便、經濟、微創，且短期內可以反復測量。近年來在對于NSCLC的發病機制的研究過程中，發現腺苷激酶-1（thymidine kinase 1，TK-1）在促進肺泡上皮細胞來源惡性腫瘤的增殖過程中發揮了重要的作用，TK-1可以通過磷酸化脫氧核苷酸，增強NSCLC病情的進展［3-5］。本研究通過選取2010年1月—2013年4月在焦作市第二人民醫院進行診治的78例NSCLC患者作為研究對象，探討了血清中TK-1的表達，揭示了其與患者臨床預后的關系，從而為臨床上肺癌患者的預后評估提供可靠的實驗室指標。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2010年1月—2013年4月在焦作市第二人民醫院進行診治的78例NSCLC患者作為NSCLC組，同時測定30例健康對象作為健康組。 NSCLC組中，男49例，女29例，年齡47～83歲，平均年齡（63.8±12.9）歲，病理學類型：腺癌53例、鱗癌25例；分化程度：高分化22例、中分化26例、低分化30例；TNM分期：Ⅰ期29例、Ⅱ期20例、Ⅲ期18例、Ⅳ期11例；淋巴結轉移38例。健康組30例中，男19例，女11例，年齡41～79歲，平均年齡（61.0±11.8）歲。NSCLC組和健康組的年齡、性別比較，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 納入及排除標準

納入標準：（1）NSCLC患者經CT、MRI、病理學檢查證實，診斷標準參考中華醫學會制定的標準［4］；（2）接受血清TK-1檢查前，患者無放化療、生物及免疫治療病史；（3）本研究在我院醫學倫理會審批通過后實施。排除標準：（1）合并其他部位腫瘤疾病的患者；（2）伴有精神、認知功能障礙的患者。

1.3 血清TK-1檢測方法

用ELISA法檢測TK-1水平，采用患者的肘部靜脈血5 ml，1 000 r/min離心10 min，取上清液待測。密封袋中取出實驗板條，空白孔中加入樣品或者稀釋液100 ul/孔，檢測孔中加入標本100 ul/孔，膠紙封閉實驗表條孔，36℃條件下孵育60～90 min，磷酸鹽緩沖液清洗5次，空白對照孔中加入生物素抗體稀釋液100 ul，檢測孔中加入生物素抗體檢測液100 ul，膠紙封閉實驗表條孔，36℃條件下孵育30～60 min，空白對照孔中加入酶結合稀釋液100 ul，檢測孔中加入酶結合檢測液100 ul，膠紙封閉實驗表條孔，磷酸鹽緩沖液清洗5次，加入TMB顯色底液（品牌：YSRIBIO，湖州英創生物科技公司），避光36℃孵育15 min，加入終止液100 ul，3 min內檢測OD450值，BioTek酶標儀購自美國伯騰儀器有限公司。

1.4 血清TK-1參考值

本研究在查閱大量文獻的及臨床數據分析的基礎上［5］，健康人群的血清TK-1水平范圍0～2.0 pmol/L，＞2.0 pmol/L判定為異常（TK-1陽性）。

1.5 統計學方法

本次研究收集的所有數據均采用SPSS 16.0軟件進行處理，血清TK-1、年齡等計量資料以均數±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗；TK-1陽性率、性別等計數資料以例數和百分比（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；以P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 NSCLC組和健康組的血清TK-1水平及陽性率比較

血清TK-1水平及陽性率進行對比，NSCLC組高于健康組，差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 NSCLC組和健康組的血清TK-1水平及陽性率比較

2.2 NSCLC組血清TK-1陽性率與患者臨床病理學特征的關系

NSCLC組患者的血清TK-1陽性率均與患者的分化程度、TNM分期、病灶最大徑、淋巴結轉移具有顯著的相關性，差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 NSCLC組血清TK-1陽性率與患者臨床病理學特征的關系

2.3 NSCLC組血清TK-1陽性率與患者預后的關系

血清TK-1陽性NSCLC患者的3年存活率為28.57%，顯著的低于TK-1陰性患者的51.16%（P＜0.05）；血清TK-1陽性NSCLC患者的中位生存時間21個月顯著的短于血清TK-1陰性患者的27個月（P＜0.05），見表3，圖1。

表3 NSCLC組血清TK-1陽性率與患者預后的關系

圖1 TK-1陽性率與NSCLC患者生存時間的關系

3 討論

NSCLC癌細胞生物學浸潤及侵襲的能力較強，對于腹腔內臟器浸潤轉移的風險較高。在多種病理生理機制的激活過程中，NSCLC細胞生物學行為的改變，能夠加劇NSCLC患者整體臨床預后的惡化［6］。臨床觀察發現，NSCLC患者多臟器功能衰竭的比例可超過35%以上，其遠期總體生存時間不足38個月［7-8］。迄今為止臨床上仍然缺乏對于NSCLC預后評估的重要指標，雖然血清CA125及CA199等腫瘤生物學指標可以在一定程度上反應患者遠期預后，但其預測靈敏度不足40%，特異度也較低［9］。尋找合適和敏感的預后評估指標，是臨床醫師共同關注的課題，同時可以為臨床上早期臨床決策及肺癌患者出院后的重點隨訪提供依據。

在NSCLC肺癌細胞DNA增殖的過程中，需要經過脫氧核苷酸的磷酸化修飾，TK-1能夠影響到癌細胞核分裂過程中底物限速酶的活性，導致限速酶的過度激活，增加了DNA異常分裂合成的速度［10-11］。TK-1對于癌細胞內MAPK或者P16下游信號通路的激活，能夠增加癌細胞基因錯配的風險，導致基因錯配修復能力的下降［12-13］。回顧國內外相關文獻可以發現，TK-1在NSCLC、甲狀腺癌及肝癌等惡性腫瘤中異常表達，并能夠為疾病的診斷及臨床預后提供一定的參考。

本研究發現，在NSCLC患者血清中TK-1的表達明顯高于正常對照人群，NSCLC患者體內TK-1的異常高表達可以通過促進癌細胞DNA的擴增，增加了癌基因異常整合和轉錄翻譯的風險，最終促進了NSCLC的病情進展。唐興等［14-15］研究者通過回顧性分析了73例樣本量的NSCLC患者的門診血清學診斷資料，結果發現病例組患者血清中的TK-1可上升25%以上，明顯高于正常人群，這與本研究的結論較為一致。對于TK-1與患者臨床特征的分析可以發現，分化程度較差、TNM分期較晚、病灶直徑較大、發生淋巴結轉移患者血清中的TK-1明顯上升，其中低分化肺癌患者的血清TK-1陽性率可達50%以上，而發生淋巴結轉移患者的血清TK-1的陽性率甚至可達60%以上，這些均證實TK-1的表達與肺癌患者的臨床特征密切相關。但需要注意的是，本研究中并未發現腺癌、鱗癌等患者血清TK-1的表達差別，提示不同的上皮細胞來源并不會影響到TK-1的表達，TK-1的表達缺乏細胞細胞性。對于TK-1與NSCLC患者遠期預后的關系分析可見，TK-1高表達的患者，其遠期預后較差，3年生存率較低，且中位生存時間僅僅為21個月，表明TK-1與患者的臨床預后密切相關，臨床上可以通過隨訪NSCLC患者血清中TK-1的表達，進而評估出院患者的生存預后。但需要注意的是，唐興等研究者并未發現TK-1與NSCLC患者3年生存率的關系，考慮樣本量的不足、臨床資料的收集偏移等，均可能影響到了研究結論的差別。

綜上所述，在NSCLC患者血清中TK-1的表達明顯上升，TK-1與肺癌患者淋巴結轉移、細胞分化程度及臨床分期等具有密切的聯系，臨床上通過隨訪血清中TK-1的表達，可以為評估肺癌患者的遠期預后提供一定的參考。