大豆磷脂中α-生育酚的檢測方法學(xué)研究

徐璠峰，王 翠，時 晨

（南京威爾藥業(yè)股份有限公司，江蘇南京 210042）

大豆磷脂不僅具有較強(qiáng)的乳化、潤濕、分散作用，還在促進(jìn)體內(nèi)脂肪代謝、肌肉生長、神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育和體內(nèi)抗氧化損傷等方面發(fā)揮很重要的作用。大豆磷脂可以抑制腸內(nèi)膽固醇的吸收，故能降低血液膽固醇和抗脂肪肝的作用。此外本品還能促進(jìn)細(xì)胞增殖，使其活力旺盛。主要用于動脈粥樣硬化，急、慢性肝炎，脂肪肝，肝硬化，神經(jīng)衰弱等。制成軟膏可用于慢性潰瘍等。

大豆磷脂作為藥用輔料目前已收錄于中國藥典2015版，EP9.0和USP40中，對相關(guān)質(zhì)量指標(biāo)提出了更高的要求，但在這幾國藥典中，均未對大豆磷脂中的抗氧劑做出要求，抗氧劑的加入會對以大豆磷脂為輔料的制劑穩(wěn)定性和安全性產(chǎn)生未知的影響，所以增加抗氧劑的檢測是必不可少的。

本文主要介紹一種抗氧劑α-生育酚的檢測方法，通過HPLC 的分析手段，能準(zhǔn)確、迅速、簡便地分析出大豆磷脂中α-生育酚的含量。

1 試驗樣品

甲醇，ACS 公司，63Y1808AD，色譜級；乙醇，ACS 公司，43Y1803AT，色譜級；α-生育酚，阿拉丁，K1729039，分析純；大豆磷脂，上海太偉。

2 方法驗證

2.1 專屬性和系統(tǒng)適用性實驗

分別取空白溶劑、α-生育酚對照溶液各10μL，分別注入液相色譜儀，結(jié)果空白溶劑在生育酚出峰位置沒有干擾。

2.2 檢測限和定量限

取α-生育酚對照溶液逐級稀釋至S/N 約為10作為定量限，S/N 約為3作為檢測限。結(jié)果分析：α-生育酚達(dá)到0.1226μg/ml（24.52×10-6）時可以被檢出，濃度達(dá)到0.306 5μg/mL（61.3× 10-6）時可以被定量。如表1所示：

表1 α-生育酚檢測限和定量限

2.3 線性范圍

精密稱取α-生育酚對照品0.103 2g，置于100mL 容量瓶中，加乙醇溶解并稀釋至刻度作線性儲備液（α-生育酚1.032mg/ml），取此溶液適量，加乙醇分別稀釋至不同濃度的溶液，作為不同濃度的對照溶液，分別取不同濃度的混合對照溶液10μL 注入液相色譜儀，實驗結(jié)果顯示：y=1.021x-1.364，R2=0.999，表明線性良好。

2.4 進(jìn)樣精密度實驗

精密稱取α-生育酚對照品0.1032g，置于100ml 容量瓶中，加乙醇溶解并稀釋至刻度作儲備液（α-生育酚1.032mg/ml），取α-生育酚對照品儲備液0.25ml 至50ml 容量瓶，加乙醇溶解并稀釋至刻度即得對照溶液（α-生育酚5.16μg/ml）。取對照溶液連續(xù)進(jìn)樣6針，考察進(jìn)樣精密度，結(jié)果表明α-生育酚進(jìn)樣的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD 小于0.48%，說明測定數(shù)據(jù)間的波動性小，即本方法精密度試驗符合要求。如表2所示。

表2 α-生育酚進(jìn)樣精密度

2.5 重復(fù)性

取大豆磷脂（R161-150-1）樣品100mg，精密稱定，置20ml 量瓶中，加乙醇適量使溶解并稀釋至刻度，作為供試品溶液，按照測定方法進(jìn)行測定，平行操作6份，計算α-生育酚的含量，均未檢出。結(jié)果表明，該方法重復(fù)性良好。

2.6 回收率試驗

精密稱取α-生育酚對照品0.106 0g，置于100mL 容量瓶中，加乙醇溶解并稀釋至刻度作儲備液（α-生育酚1.060mg/mL），取α-生育酚對照品儲備液1mL 至20mL 容量瓶，加乙醇溶解并稀釋至刻度即得對照溶液（α-生育酚53μg/mL）。取大豆磷脂（R161-150-1）樣品100mg，精密稱定，置20mL量瓶中，加溶劑適量使溶解，分別加入α-生育酚對照品溶液1.2、1.0、0.8mL，加溶劑稀釋至刻度，作為供試品溶液，按外標(biāo)法以峰面積計算測得量，計算回收率，每個水平平行操作3份，計算回收量和回收率。如表3所示。

表3 α-生育酚加樣回收率

結(jié)果表明：相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD 為1.17%，該方法測定α-生育酚，回收率良好。

2.7 α-生育酚方法的建立

2.7.1 供試品溶液的制備取本品100mg，精密稱定，置20mL 量瓶中，加乙醇適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.7.2 對照溶液的制備精密稱取α-生育酚對照品適量，加乙醇定量稀釋至α-生育酚濃度為5μg/mL，作為對照品溶液。

2.7.3 限度

按外標(biāo)法以峰面積計算，α-生育酚不得過1 000×10-6。

2.8 樣品檢測

按已建立的方法檢測本品中的α-生育酚，檢測太偉和我司產(chǎn)品，結(jié)果顯示：太偉和我司產(chǎn)品Well（R161-150-1）中α生育酚均未檢出。

3 結(jié)束語

上述大豆磷脂中α-生育酚含量的檢測方法在專屬性、線性和范圍、檢測限、定量限、準(zhǔn)確度、精密度等方面均表現(xiàn)良好。