多重?zé)晒舛縋CR在動(dòng)物檢測(cè)中的應(yīng)用

張若楠 于 雷 王 釗 韓榮偉 于忠娜*

（①青島農(nóng)業(yè)大學(xué)海都學(xué)院 山東 萊陽(yáng) 265200 ②青島農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院 山東 青島）

多重?zé)晒舛縋CR技術(shù)可以利用一次反應(yīng)，同時(shí)檢測(cè)、鑒別出多種病原體，在臨床混合感染的診斷上具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)和很高的實(shí)用價(jià)值。與實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)結(jié)合，可以定量拷貝數(shù)、省去PCR后處理，減少交叉污染，整個(gè)檢測(cè)過(guò)程耗時(shí)短、準(zhǔn)確、高效、特異。因此本文對(duì)多重?zé)晒舛縋CR技術(shù)的分類及各種方法的優(yōu)缺點(diǎn)做了簡(jiǎn)要概述，并對(duì)近年來(lái)多重?zé)晒舛縋CR在動(dòng)物中的應(yīng)用概況及其研究進(jìn)展，如在動(dòng)物性食品衛(wèi)生中的應(yīng)用、細(xì)菌病診斷、病毒病診斷、飼料中動(dòng)物源性成分的檢測(cè)、抗性基因檢測(cè)及腫瘤早期診斷等有關(guān)方面進(jìn)行概述，旨在為該技術(shù)的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)應(yīng)用提供理論參考。多重PCR技術(shù)與實(shí)時(shí)熒光定量PCR的結(jié)合，拓寬了其應(yīng)用范圍，但也存在一定的局限性，如熒光基因種類有限、需要專門的儀器設(shè)備、外源DNA的干擾、引物探針含量及其特異性都可能影響檢測(cè)結(jié)果。因此，處理好這些問(wèn)題是多重實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)更好應(yīng)用于動(dòng)物研究中的關(guān)鍵。

自從20世紀(jì)80年代聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase chain reaction，PCR)[1]問(wèn)世以來(lái)，該技術(shù)就成為體外快速擴(kuò)增特定基因或DNA序列最常用的方法。但由于該方法是應(yīng)用PCR來(lái)對(duì)樣品中的模板量進(jìn)行定量，也就是說(shuō)需要通過(guò)凝膠電泳分離來(lái)檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行分析，由于平臺(tái)效應(yīng)的存在，定量的準(zhǔn)確性受到影響，且操作過(guò)程中還容易交叉污染，產(chǎn)生假陽(yáng)性。……