降氮煎劑對慢性腎衰大鼠腎功能的作用及其對尿酸的影響

金宇杰　梁亮　王圣治

摘要：目的?研究降氮煎劑對腺嘌呤所致慢性腎衰竭大鼠模型的腎功能的作用及其對尿酸的影響。方法?除空白組外，其他大鼠皆用腺嘌呤灌胃法來復制慢性腎衰竭的模型。將尿毒清作為對照組，按照體重層次將造模大鼠隨機分為模型組，尿毒清組（給予尿毒清顆粒）及實驗組（給予降氮煎劑），治療14?d后，測試每組大鼠血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、尿酸（UA）及腎組織URAT1表達的水平。結果?①實驗組SCR、BUN、UA明顯低于尿毒清組及模型組（P<0.05）;②實驗組腎組織URAT1蛋白表達明顯低于尿毒清組及模型組（P<0.05），而尿毒清組與模型組之間無顯著差異（P>0.05）。結論?降氮煎劑可以顯著降低Scr、BUN、UA及腎組織URAT1水平，具有改善腎功能及獨立降低尿酸的作用。

關鍵詞：降氮煎劑;慢性腎衰竭;尿酸;URAT1

中圖分類號：R285.5?文獻標志碼：A?文章編號：1007-2349（2020）03-0069-04

Effects?of?Nitrogen-reducing?Decoction?on?Renal?Function?and?Levels?of?UA?andRenal?Tissue?UTA1?in?Rats?with?Chronic?Renal?Failure

JIN?Yu-jie1，?LIANG?Liang2，?WANG?Sheng-zhi2

（1.?Liaoning?University?of?Traditional?Chinese?Medicine，?Shenyang?110032，?China;2.?The?Affiliated?Hospital?of?Liaoning?University?of?Traditional?Chinese?Medicine，?Shenyang?110032，?China）

【Abstract】Objective：?To?study?the?effects?of?Nitrogen-reducing?Decoction?on?the?renal?function?and?the?levels?of?UA?and?renal?tissue?URAT1?in?rats?with?adenine-induced?chronic?renal?failure.?Methods：?Except?the?rats?in?the?blank?group，?other?rats?were?given?adenine?gavage?to?replicate?the?chronic?renal?failure?model.?By?using?Niaoduqing?as?a?control?group，?the?model?rats?were?randomly?sub-divided?into?model?groups?according?to?their?weight.?The?Niaoduqing?group?（administered?with?Niaoduqing?granules）?and?the?experimental?group?（administered?with?nitrogen-reducing?decoction）?was?both?treated?for?14?days.?The?levels?of?rat?serum?creatinine?（SCR），?blood?urea?nitrogen?（BUN），?uric?acid?（UA）?and?renal?tissue?URAT1?expression?in?each?group?were?detected.?Results：?1）?The?SCR，?BUN，?and?UA?of?the?experimental?group?were?significantly?lower?than?those?of?the?Niaoduqing?group?and?the?model?group?（P<0.05）.?2）?The?expression?of?URAT1?protein?in?the?kidney?tissue?of?the?experimental?group?was?significantly?lower?than?that?of?the?Niaoduqing?group?and?the?model?group?（P<0.05），?but?there?was?no?significant?difference?between?the?Niaoduqing?group?and?the?model?group?（P>0.05）.?Conclusion：?Nitrogen-reducing?decoction?can?significantly?reduce?the?levels?of?SCR，?BUN?and?UA?and?has?the?effect?of?improving?renal?function，?and?has?independent?effects?of?reducing?uric?acid.

【Key?words】nitrogen-reducing?decoction，?chronic?renal?failure，?UA，?URAT1

慢性腎衰竭（CRF）簡稱慢性腎衰，是各類慢性腎臟疾病漸進地損害腎功能以致腎臟衰敗的綜合征[1]。其終末期需用腎臟替代療法，但該療法由于費用高、腎源不足等原因難以普及，而中醫中藥療效顯著，又以其相對低廉的價格、安全方便等特點而廣泛用于臨床。

降氮煎劑是本院院內復方制劑，臨床應用治療慢性腎衰竭氮質血癥具有顯著效果。同時發現，慢性腎衰患者在使用了降氮煎劑后，其繼發性高尿酸血癥也有所改善。因此，本實驗主要在研究降氮煎劑對慢性腎衰竭所致繼發性高尿酸血癥大鼠模型的氮質血癥及高尿酸血癥的作用，并觀察其是否具有獨立降尿酸的作用。

1?材料與方法

1.1?材料

1.1.1?實驗動物?50只SD雄性大鼠購自遼寧中醫藥大學實驗動物中心，SPF級，體重（180±10）g。于遼寧中醫藥大學實驗動物中心清潔級動物房內分籠飼養并觀察。

1.1.2?主要藥品?腺嘌呤（美國?Amresco?公司：0183，規格：100?g×1?瓶）;降氮煎劑（遼寧中醫藥大學附屬醫院制劑室，遼藥制備Z20180191000，規格：500?mL×1?瓶）;尿毒清顆粒（內蒙古康臣藥業有限責任公司，國藥準字Z20073256，規格：5?g/袋）。

1.1.3?主要試劑?肌酐試劑盒（上海協和梅迪克斯醫療器械有限公司），尿素氮、尿酸試劑盒（上海德賽診斷系統有限公司）。大鼠URAT1免疫組化試劑盒（上海圻明生物科技有限公司）。

1.2?方法

1.2.1?分組與造模方法?適應性喂養7天后，隨機選取12只大鼠為空白組，每天予8?mL/（kg·d）純凈水一次灌胃;對剩余的38只進行造模，每天通過胃內給藥，予濃度為2.5%的腺嘌呤混懸液200?mg/（kg·d）。連續21天后，隨機選取3只造模組大鼠、2只空白組大鼠，測定血清肌酐和腎間質纖維化程度。結果顯示，模型組血清肌酐值超過最大正常值9.7?mmol/L[2]，腎臟體積增大，顏色變為灰白，表面被覆顆粒，光鏡下可見縮小的腎小球，毀壞的腎小管，腎間質纖維化，有炎癥細胞浸潤;空白組大鼠血肌酐及腎臟病理均未見異常，說明制備成功。將造模后存活的30只大鼠分為模型組，尿毒清組和實驗組，每組動物數為10只。每次分組皆根據體重層次隨機選取大鼠。

1.2.2?給藥與處理方法?每隔1?d，按照15?mL/kg的劑量，予所有大鼠腹腔注射10%的水合氯醛進行麻醉，等待5?min進行給藥。實驗組大鼠給予13?mL/（kg·d）降氮煎劑保留灌腸，給予純凈水15?mL/（kg·d）灌胃;尿毒清組大鼠給予15?mL/（kg·d）尿毒清顆粒溶液（每2?mL溶液內含尿毒清顆粒0.15?g）灌胃，純凈水13?mL/（kg·d）灌腸;空白組和模型組大鼠給予15?mL/（kg·d）純凈水灌胃，13?mL/（kg·d）純凈水灌腸。所有大鼠灌腸深度皆為8?cm，灌腸后倒懸大鼠約1?min，使液體充分接觸腸壁。連續14?d。最后一次給藥后，講大鼠禁食禁水12?h，稱重所有大鼠，用10%水合氯醛腹腔麻醉，剖開腹腔，采集腹主動脈血液5?mL，并摘取左腎去被膜。取材完成后處死大鼠。

1.2.3?檢測內容與方法

1.2.3.1?一般情況?觀察大鼠的體重，尿量，毛發顏色，精神，活動和食欲。

1.2.3.2?血清檢測?將采集的血液離心（1500?g，4℃）7min后取血清并采用生化法檢測，查看血肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）、血尿酸（UA）數值。

1.2.3.3?腎組織URAT1的檢測?運用免疫組化法制備腎組織切片。測定陽性顆粒積分光密度（IOD）。

1.3?統計學方法?使用統計軟件SPSS22.0分析數據，并且通過（x±s）來表示符合正態分布的測量數據。通過單因素方差分析對各組間的數據進行比較，采用LSD法進行兩兩比較，以P<0.05作為具有統計學差異。

2?結果

2.1?一般情況?造模前，所有大鼠毛色光滑潤澤，活潑;造模后，造模組大鼠食量逐漸減少，體重增長較空白組大鼠慢，毛色暗淡，活動減少，尿量增加;經尿毒清或降氮煎劑治療后的大鼠食量和活動量均有所增加。治療期間，實驗組大鼠死亡1只，尿毒清組死亡2只，模型組死亡3只，空白組無死亡。組間病死率無差異（P>0.05）。

2.2?血清指標?與空白組相比，其他3組的Scr、BUN及UA?3項指標的平均值顯著增加（P<0.05）;與模型組相比，尿毒清組和實驗組的Scr、BUN及UA平均值明顯降低（P<0.05）;與尿毒清組相比，實驗組的Scr及BUN均值有所減少（P<0.05），UA均值顯著降低（P<0.05）。具體見表1。

2.3?腎組織URAT1蛋白表達?與空白組相比，其他三組大鼠腎組織URAT1蛋白表達IOD均值顯著增多（P<0.01）;模型組和尿毒清組間的IOD均值無明顯差異（P>0.05）;與模型組和尿毒清組相比，實驗組腎組織URAT1?蛋白表達IOD均值明顯減少（P<0.05）。具體見表2。