一例黑斑側褶蛙“歪脖子”病的診治

黑斑側褶蛙主要以稻田、池塘、水渠等作為棲息、繁殖和捕食場所，因其營養價值豐富、生長迅速、抗病力強等優點，深受廣大養殖者的喜愛。目前野生黑斑側褶蛙的數量稀少，已列為國家二級保護動物名錄。隨著水域環境污染及人為捕撈的影響，野生黑斑側褶蛙的數量再次大幅減少，其種質資源面臨滅絕的危險。

為了保護和利用黑斑側褶蛙，在辦理馴養繁殖許可證的條件下，黑斑側褶蛙集約化、高密度的養殖模式被逐漸推廣開來，在提高黑斑側褶蛙產量的同時也帶來一些養殖疾病，其中以眼膜發白、運動和平衡機能失調為特征的“歪脖子”病最為嚴重，死亡率高達90%，給養殖戶造成嚴重的經濟損失。本文介紹一例黑斑側褶蛙“歪脖子”病的診治過程，供大家借鑒。

一、發病癥狀

2019年8月中旬，在彭水縣某黑斑側褶蛙養殖場出現黑斑側褶蛙生病死亡事件。該養殖場面積為20畝，采用串聯式排水養殖模式，養殖密度約為55只/米2。病蛙體重集中在15～30克/只，主要發病癥狀表現為患病蛙身體在水中失去平衡，腹部朝上浮于水面，在水面間歇性打轉，體表失去光澤，頭斜朝向一邊，呈“歪脖子”狀(圖1)；眼球腫大突出，眼膜泛白外翻，局部充血(圖2)；在其體表經鏡檢未發現寄生蟲，解剖時發現內臟團腫脹充血，腸胃無食且有氣泡，并伴隨有少量腹水(圖3)。根據發病癥狀初步診斷為細菌性疾病。

圖1“歪脖子”癥狀

圖2 眼球表面覆蓋一層白膜

圖3 腹腔內有少許腹水

二、病原菌分離及鑒定

將病蛙置于超凈工作臺，用75%酒精進行體表消毒，用無菌剪刀解剖病蛙，取其肝臟、腎臟等組織在普通營養瓊脂平板劃線后置于28℃恒溫培養箱中培養24小時，觀察到從肝臟分離出的圓形、邊緣整齊的橙色優勢單菌落(圖4)；分離單菌落通過革蘭氏染色鏡檢觀察為單個分散排列的陰性、桿狀的細菌(圖5)；將分離純化細菌進行回歸感染試驗，發現健康蛙出現與自然患病蛙相類似的癥狀；以16S rRNA序列構建N-J系統發育樹，結果表明分離株RC02與腦膜炎敗血伊麗莎白菌(Elizabethkingia meningoseptica)聚為一簇(圖6)，最終鑒定為腦膜炎敗血伊麗莎白菌。

圖4 病原菌形態特征

圖5 革蘭氏染色

圖6 16S rRNA構建的系統發育樹

三、藥敏試驗及結果分析

將經過純化的菌株在恒溫搖床培養7～8小時，離心后用無菌水調整為1.0×108CFU/毫升濃度的菌懸液均勻涂布。通過K-B紙片法對分離菌株進行藥敏試驗，選取了林可霉素、氟苯尼考、恩諾沙星、復方新諾明、頭孢他啶、左氧氟沙星、阿莫西林、麥迪霉素、氨芐西林、頭孢唑林、氧氟沙星、慶大霉素、紅霉素、阿奇霉素、環丙沙星、四環素等16種抗生素檢測分離株細菌的耐藥性，結果顯示分離菌株對氟苯尼考、氨芐西林表現高度敏感，對其他14種抗生素均表現出耐藥性。

四、治療方法

根據養殖場實際情況及藥敏試驗結果，首先將池塘病蛙進行隔離清除，同時將病死蛙拌生石灰挖坑深埋，且附近用生石灰再次消毒。針對發病池塘和病蛙，建議采用以下措施。

1.針對發病蛙池，加入新水并用生石灰消毒，用生石灰50～100克/米3化水后全池潑灑，每天1次，連續3天，在第4天可使用微生態試劑改善水體環境。

2.針對病蛙，采用氟苯尼考拌餌投喂，用量為每千克蛙拌餌投喂10～15毫克(以氟苯尼考計)，連續投喂7天。第4天后死亡量開始下降，第7天后病情得到控制，死亡率大大降低。

五、總結與建議

本病例中的“歪脖子”病是近年來出現在多種蛙類中的一種傳染性強、死亡率高、難治愈的疾病，嚴重影響黑斑側褶蛙的經濟效益，現已成為阻礙蛙類人工養殖業的興旺和發展的關鍵因素之一。

根據相關研究報道，各種規格的養殖蛙類均可發病，發病季節一般為4-11月，流行水溫為20℃以上。該病發病急，病程與水溫高低呈明顯的相關性，發病蛙一般3～5天死亡，死亡率達90%以上。為此提出以下建議。

1.養殖池采用獨立進排水。

2.嚴格控制苗種來源。引進無病、優質、健康、非近親的種苗，提高安全系數，可通過所在地區水產相關部門向值得信賴的種苗場引種。蛙苗入池前進行消毒處理，防止帶病蝌蚪入池引起發病。

3.合理密度放養。一方面保證養殖蛙類能有足夠的活動空間，另一方面可以預防疾病的快速傳播，減少經濟損失。

4.環境管理。種苗入池前，要嚴格對養殖水體、養殖池及餌料臺進行消毒處理，可采用生石灰潑灑，并定期用“蛙消安”進行全面消毒鞏固。確定水源無污染，保證藻類含量適宜。每次投餌以半小時內吃完為宜，不可有過多的食料殘余污染水質，定期更換養殖池內水，保持水體清潔。根據養殖環境合理使用微生態試劑，可每10天1次，保證水質穩定。

5.定期用中草藥拌餌投喂，增強黑斑側褶蛙的抵抗力和抗應激性。如用烏梅、柯子、五倍子、半枝蓮等中藥的提取物混合拌餌，或將穿心蓮、連翹、白芷、茵陳、丹參、甘草經特殊工藝制成殺菌制劑，也可定期投喂板藍根、黨參等。

6.加強管理。巡塘人員要做好早、中、晚按時巡塘工作，發現病蛙及時隔離進行無害化處理，做到早發現，早治療。通過藥敏試驗結果，在符合國家規定用藥標準的前提下科學規范用藥，進行精準治療。