景天科多肉植物大和錦組織培養體系的建立

閆金國 王大鵬 趙著梅 孔麗娜

（濰坊護理職業學院，山東濰坊 262500）

大和錦（Echeveria purpusorum Berger）為景天科擬石蓮花屬植物，呈廣卵形至散三角卵形，背面突起呈龍骨狀，緊密排列呈蓮座狀，具有較高的觀賞價值。多肉植物以其呆萌的姿態深受國人喜愛，占據的市場份額也在逐年增大。市場上流行的多肉植物原始種較少，絕大多數品種為雜交種、變異種，而且品種更新很快，傳統的繁殖方式，例如扦插、分株、播種等，存在繁殖周期長、易發生性狀改變等缺點，難以滿足市場需求。植物組織培養技術具有繁殖率高、生長周期短的特點，能有效解決這一問題。

目前，對仙人掌科[1]、景天科十二卷屬[2-3]、珈藍菜屬[4]組培的研究較多，對觀賞性較好的景天科擬石蓮屬組培的研究較少。本研究以景天科擬石蓮花屬大和錦的成熟葉片為外植體，探究不同激素濃度對其愈傷組織誘導、分化、增殖和生根的影響，建立大和錦的組織培養體系，能夠為大和錦的組培快繁、種質資源離體保存和新品種培育提供技術支持。

1 材料與方法

1.1 試驗材料試驗用大和錦于2018年購自山東省青州市南環路新花卉市場。

1.2 試驗方法

1.2.1 外植體的選取與消毒 本試驗選取成熟、完整、無病害的大和錦葉片作為外植體。采回的葉片在通風干燥處晾曬1 d后，先在自來水下沖洗30 min，然后移至超凈工作臺上，在2%次氯酸鈉溶液中浸泡10 min，期間不斷攪拌以保證充分消毒，取出葉片用無菌蒸餾水沖洗5次，最后放置在無菌濾紙上吸干多余的水分。將消毒好的葉片用解剖刀沿中脈方向橫切兩刀、縱切一刀，平均分成6部分。

1.2.2 愈傷組織誘導與分化 以MS培養基為基礎，分別添加不同濃度的生長激素6-BA、NAA，6-BA選擇1、3、5 mg/L 3個濃度梯度，NAA選擇0.1、0.5、1.0 mg/L 3個濃度梯度，共設置9個處理。將分割好的無菌葉片接種到相應培養基中，每個處理接種10瓶，每瓶3個外植體，接種后定期觀察愈傷組織的生長情況并統計相關指標。

誘導率=成愈數/接種數×100% （1）

芽數=誘導出芽總數/成愈數 （2）1.2.3 增殖培養 經過培養，愈傷組織上分化出不定芽，待芽體生長至0.5 cm左右時，選取長勢一致的不定芽用鑷子掰下，轉接到增殖培養基中繼續培養，30 d后記錄幼芽的生長情況。增殖培養基以MS培養基為基礎，添加不同濃度的激素，設置4個處理：①6-BA 1 mg/L+NAA 0.1 mg/L；②6-BA 1 mg/L+NAA 0.5 mg/L；③6-BA 3 mg/L+NAA 0.1 mg/L；④6-BA 3 mg/L+NAA 0.5 mg/L。每個處理接種10瓶。

1.2.4 生根培養 將增殖后長至1.5 cm左右的生長較為健壯的大和錦苗接種到生根培養基中，30 d后觀察根系的生長情況并統計相關指標。生根培養基以MS培養基為基礎，NAA選擇0、0.1、0.5 mg/L 3個濃度梯度，每個處理接種10瓶。

2 結果與分析

2.1 不同激素濃度對愈傷組織誘導與分化的影響接種7 d后，切割傷口明顯愈合，14 d后，基部開始膨大，逐漸形成淡黃綠色的愈傷組織，40 d后愈傷組織表面分化出小突起，50 d后少數突起生長成白色新芽，增強光照后，新芽逐漸轉為綠色。激素配比對愈傷組織的形成和分化具有較大影響，當激素濃度較低時，愈傷組織形成較晚，生長比較緩慢；當激素濃度較高時，易形成體積較大愈傷組織，質地疏松，并出現一定程度的玻璃化。由表1可知，處理1的誘導率最低，愈傷組織較小，質地致密，能夠正常出芽；處理5和6的誘導率較高，芽數也較多，但是后者形成的愈傷組織中部分出現了一定程度的玻璃化；處理8和9愈傷組織體積較大，質地疏松，玻璃化程度較高，出芽大多形狀不規則，呈透明狀，后期無法轉變成為綠色。綜上所述，處理5最適合大和錦愈傷組織的誘導與分化。

2.2 不同激素濃度對增殖培養的影響合適的激素濃度對芽的增殖培養有促進作用，在處理1中，激素濃度較低，芽細弱，葉色黃綠，生長狀態較差；在處理3中，芽的長勢最好，冠幅最大，植株也最高，幼芽表現出了良好的生長狀態。但是，激素濃度過高可能會造成幼芽玻璃化，在處理4中，隨著NAA濃度的進一步升高，幼芽開始出現玻璃化。綜上可得，處理3的培養基是最佳的增殖培養基。

2.3 不同激素濃度對生根培養的影響30 d后，大多數幼苗都生出了數量、長度、粗細不等的根系。隨著培養基中NAA濃度的升高，幼苗分化出的根數明顯增加，根長變短且纖細。NAA在0.5 mg/L時的幼苗根數最多，平均22.5條，但是根長太短，僅有0.5 cm，不利于吸收營養元素，植株生長緩慢，不能起到壯苗的作用。相比于無激素組，NAA在0.1 mg/L時的幼苗根數明顯較多，雖然根長稍短，但差別不大，而且幼苗的上部長勢也明顯占優。綜合根系和植株的生長情況，MS培養基+NAA在0.1 mg/L時更適合大和錦的生根培養。

表1 不同激素濃度對愈傷組織誘導與分化的影響

3 討論與結論

本研究以多肉植物大和錦的成熟葉片為外植體進行組培研究，篩選出適合大和錦組培的誘導培養基為MS培養基+6-MA 3 mg/L+NAA 0.5 mg/L，增殖培養基為MS培養基+6-MA 3 mg/L+NAA 0.1 mg/L，生根培養基為MS培養基+NAA 0.1 mg/L。

本研究建立的大和錦組培體系穩定性好，繁殖速度快，可以為后續大和錦的組培快繁、種質資源離體保存和新品種的培育提供一定的技術支持。