罹患口腔炎烏蘇里蝮的相關生理學指標分析

姚晨昊 路生鑫 陸宇燕* 李丕鵬* 薛百強

(1.沈陽師范大學兩棲爬行動物研究所，沈陽，110034；2.沈陽宏泰蛇類養殖有限公司，沈陽，110168)

口腔炎對于脊椎動物來說是一種常見的疾病[1-4]，在蛇類，尤其是人工養殖的蛇種更為普遍[5-9]。口腔炎是指口腔周圍由于感染而引起的炎癥，患病蛇主要表現為昂頭、口微張不能閉合、呼吸時有明顯的“嘶鳴”，嚴重時可引起肺炎，最終導致死亡。口腔炎有明顯的傳染性，不及時防治會引起蛇場的大面積傳染，死亡率極高。

由于蛇毒、蛇膽、蛇油的重要藥用價值，對其的需求量越來越大。為了緩解市場需求與野外種群之間的矛盾，蛇類的人工養殖規模在迅速擴大。由于人工養殖的密度較大，蛇患病的幾率也明顯提升[7-9]。尤其在出蟄后和毒蛇采毒后，口腔炎的發病幾率急速上升。雖然國內學者對多種蛇的口腔炎做了深入的研究，提出來較好的治療方案，并確定了常見的病原菌及其耐藥性[10-12]。但對如何進行提前預測報告疫情，均未見報道。這對于高密度飼養的蛇場來說是一項迫切需要解決的問題。

本研究對人工飼養條件下患有口腔炎的烏蘇里蝮(Gloydiusussuriensis)進行了較為全面的觀察，通過相關器官的系數、血液學指標和激素等檢測指標，揭示患病蛇各種生理生化特征與健康蛇之間的變化，旨在為人工養殖烏蘇里蝮疾病的預防和治療奠定了生物學基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

在口腔炎高發期(出眠后，5月)，對烏蘇里蝮養殖場內隨機選取了健康蛇和罹患口腔炎的烏蘇里蝮雄性成蛇各4條。

1.2 方法

1.2.1 解剖

將實驗用蛇放置于含有乙醚的干燥器中進行麻醉，待蛇體被觸及后沒有反應時取出。將其固定于解剖板上，檢查口腔及周圍，并從肛前鱗處縱向解剖至下頜處。心臟取血后，觀察各個臟器，測量并稱重。

1.2.2 血細胞分析

取心臟血適量(10 μL/條左右)，利用北京寶靈陽光科技有限公司生產的BM21半自動血細胞分析儀進行檢測，操作步驟嚴格按照產品說明書進行。每條蛇的血液樣品，檢測20項指標，取主要8項指標進行分析：紅細胞(RBC；1012/L)、紅細胞分布寬度(RDWSD；fL)、血小板(PLT；109/L)、白細胞(WBC；109/L)、中性粒細胞(GRA；109/L)、淋巴細胞(LYM；109/L)、中性粒細胞/淋巴細胞(NLR)、中間細胞(MON；109/L)。

1.2.3 激素檢測

心臟取血適量，立即利用TGL-16G-C高速臺式冷凍離心機進行離心，8 500 r/min。分離血清，血清量保證在25 μL左右，利用免疫酶聯反應檢測睪酮和雌二醇含量。試劑盒采購自鼎國昌盛生物技術有限公司，利用紫外可見分光光度儀進行檢測，操作嚴格按照說明書進行。

1.3 相關計算方法

軀體肥滿度(g/cm3)= 軀體重(除去內臟后的胴體重，g)/體長3(cm3)[13]

器官系數 =[(器官整體重量，g)/軀干重(g)]× 100%[14]

中性粒細胞/淋巴細胞(NLR)= 中性粒細胞(GRA；109/L)/淋巴細胞(LYM；109/L)

1.4 數據處理

實驗數據采用SPSS 20.0軟件對實驗數據進行統計分析，相關數據以平均值 ± 標準差表示，采用單因素方差分析(one - way ANOVA)對實驗結果進行顯著性差異分析，設置P<0.05為顯著性差異，P<0.01為極顯著性差異。

2 結果

2.1 大體解剖學

2.1.1 解剖觀察

健康烏蘇里蝮頭部背面觀(圖1-a)呈扁平的三角形，腹面觀(圖1-b)下頦鱗排列整齊；側面觀(圖1-c)口腔緊閉或微張，各部分輪廓清晰。罹患口腔炎烏蘇里蝮口腔具惡臭味，吻部兩側由于不同程度的腫脹，蛇口難以閉合(圖1-f，1-g)，可見牙床周圍有白色乳塊不規則狀物體附于其上(圖1-f，1-i)；最嚴重者，由于上頜腺炎癥產生的腫塊擠壓眼部，致使眼球突出，眼部嚴重變形(圖1-h)。解剖中未見其他各器官具可觀測到的實質性病變。

圖1 烏蘇里蝮健康蛇與患口腔炎蛇頭部Fig.1 A map of the head of healthy snakes and stomatitis snakes with Gloydius ussuriensis 注：a：健康蛇頭背部；b：健康蛇腹面頭部下頜；c：健康蛇頭部側面；d：罹患口腔炎蛇頭背部；e：罹患口腔炎蛇腹面頭部下頜；f：罹患口腔炎蛇頭部側面；g：罹患口腔炎蛇的口腔；h：上頜腺炎擠壓眼球的蛇頭部側面觀；i：解剖鏡下罹患口腔炎蛇頭部側面 Note：a，Healthy snake head backside view.b，Healthy snake ventral head and lower jaw.c，Healthy snake head side view.d，Snake head backside with stomatitis.e，The ventral head and lower jaw of a snake suffering from stomatitis.f，The head side of a snake with stomatitis.g，The foral cavity of a snake suffering from stomatitis.h，Lateral view of snake head with maxillary adenitis squeezing the eyeball.i，Head side view with stomatitis snake under anatomical mirror

表1 相關生物學量度

Tab.1 Related biometrics

注：*表示呈顯著性差異(P<0.05)；**表示呈極顯著性差異(P<0.01)

Note：*indicates correlations between date(P<0.05).**indicates extermely significant correlations between date(P<0.01)

2.1.2 相關形態學測量

由表1可見，在體長、體重和軀干重3項測量數值上，患病蛇均略大于健康蛇，但兩者之間無顯著性差異。雖兩者之間沒有顯著性差異，在整體肥滿度和軀干肥滿度2個比值上均顯示為健康蛇略大于患病蛇，而患病蛇這兩個指標僅分別是健康蛇的87.16%和88.58%。在肝、腎、精巢和脂肪體重量及其器官系數中，肝重和腎重均為患病蛇略大于健康蛇，而肝系數則為患病蛇低于健康蛇，且兩者之間呈顯著性差異，但腎系數仍為患病蛇略大于健康蛇，且兩者之間無顯著性差異。精巢重和脂肪體重均為患病蛇低于健康蛇，尤其是患病蛇脂肪體重遠低于健康蛇，患病蛇與健康蛇之間在精巢系數和脂肪體系數上分別呈顯著性差異和極顯著性差異。

2.2 性類固醇激素

性類固醇激素檢測結果顯示：健康蛇血睪酮(T)含量(783.29±29.32)ng/L，血雌二醇(E2)含量(87.10±10.59)ng/mL，二者均明顯高于患病蛇的血睪酮(368.13±86.68)ng/L，血雌二醇(41.24±5.77)ng/mL，且2種激素在正常蛇和患病蛇之間均呈極顯著性差異(P<0.01)。

2.3 血細胞檢測

在與紅細胞相關的2個檢測指標中，均顯示為患病蛇高于健康蛇，且均呈顯著性差異。血栓細胞為患病蛇低于健康蛇，兩者間無顯著性差異。與白細胞相關的5項指標中，患病蛇的白細胞總數幾乎是正常蛇的2倍。而在3種白細胞檢測類型中，僅患病蛇淋巴細胞數量高于正常蛇；而中性粒細胞和中間細胞的數量均表現為患病蛇低于正常蛇。本文注重能較為綜合地反映與機體免疫有關的2類細胞的比值，即中性粒細胞與淋巴細胞數量的比值(NLR)，結果為患病蛇NLR僅為正常蛇的1/2，二者間呈顯著性差異。

3 討論

肥滿度作為衡量動物機體營養狀態的重要指標，在養殖業中有著重要的實際使用意義[15-17]，而器官質量和器官指數也常作為機體健康與否的特征性指標[13，18-20]。本研究中患病的烏蘇里蝮與正常蛇在養殖中均采用人工填喂的方式，由于患病蛇時常會出現吐食的現象而被關注。雖然有些患病蛇的體長、體重和軀體重略高于健康蛇，但它們的整體肥滿度和軀干肥滿度均已明顯低于健康蛇，表明了患病蛇營養狀態已經欠佳。患病蛇可能由于口腔的不適以及疼痛，導致了食欲減退。同時，由于炎癥的發展，加劇了機體能量和營養的支出。本研究中，患病蛇的肝系數和脂肪體系數均低于正常蛇，并與正常蛇之間均有顯著性差異。而肝臟是機體最大的儲存營養的器官，脂肪體是蛇類儲存能量的器官，因此，也進一步印證了患病蛇處于嚴重的消耗中。

表2 相關的血細胞參數

Tab.2 Relevant blood cell parameters

注：*表示呈顯著性差異(P<0.05)；**表示呈極顯著性差異(P<0.01)

Note：*Indicates correlations between date(P<0.05).** Indicates extermely significant correlations between date(P<0.01)

丘腦-垂體-性腺軸，在哺乳動物(主要是人類和相關實驗動物，例如大鼠、小鼠等)生殖腺演化和生殖細胞發育中起著重要的調控作用[21-27]。值得注意的是，在對手術切除頜下腺的大鼠研究中發現，在術后第5周精巢間質細胞結構出現了明顯的退行性變化，而其中與睪酮合成相關的酶(3β-羥基甾體脫氫酶、非特異性脂酶、琥珀酸脫氫酶)含量也出現了明顯降低。分析認為，由于頜下腺是大鼠血漿表皮生長因子(EGF)的主要來源，被切除后內源性的EGF缺乏，導致了精巢間質細胞合成功能的降低。而精巢間質細胞正是動物體內合成睪酮的重要細胞，其合成功能降低勢必影響機體血睪酮的含量，進而影響精子的正常發育和演化[28]。雖然在爬行動物研究中相關研究的報道較少[29-31]，但有學者指出雄性爬行動物精子演化和發育的整個過程是一個依賴睪酮(T)的過程[29、32]。在本研究中，患有口腔炎的雄性烏蘇里蝮血睪酮和雌二醇含量均明顯低于健康蛇，而對患病烏蘇里蝮精巢結構的觀察也發現了生精過程明顯滯后于健康蛇(待發表)。口腔炎是一種口腔黏膜以及口腔周邊相關腺體出現炎癥的疾病[10]。患病蛇是否由于口腔炎癥導致了相關腺體的結構和功能異常，致使患病蛇其內源性的EGF的分泌降低，進而影響精巢及其間質細胞的結構和功能還有待于進一步積累資料并深入研究。但本文患病蛇的精巢系數低于正常蛇，兩者呈顯著性差異，在一定程度上提供的佐證。

血細胞參數可以及時反應出動物自身的生理狀態改變以及機體對外界環境變化產生的應激性。在醫學研究中有大量深入探究血細胞參數與疾病關系的報道[33-34]。國內外有關爬行類血細胞參數也有很多的積累[35-36]，但關于烏蘇里蝮血細胞參數的報道極少，尤其是針對蛇類疾病診斷和治療的相關血細胞參數未見相關報道。本文首次報道了罹患口腔炎的烏蘇里蝮血細胞參數，同時顯示出罹患口腔炎的烏蘇里蝮的血細胞參數中有近80%均與健康蛇有顯著性差異。其中值得注意有兩個指標，嗜中性粒細胞和淋巴細胞的比值(NLR)和紅細胞分布寬度。有研究指出NLR是全身性炎癥反應的有效評估指標之一，可以反映機體的炎癥狀態[37]。而紅細胞分布寬度(RDW)雖然僅是紅細胞體積大小的異質性指標，但當機體有炎癥發生時，大量的炎癥因子可以抑制促紅細胞生成素介導的紅細胞成熟過程，另一方面炎癥引起的紅細胞出現以細胞形態，細胞半衰期以及紅細胞膜變性等為主的病理性變化，進而導致紅細胞的異質性增加[38]。本研究中RDW和NLR與人類醫學研究的結果相符，但由于樣本量不夠充足，是否能夠將這兩個指標作為今后診斷蛇類炎癥的有效指標還有待于進一步積累資料。