不同影響因素下大白豬精子活力和保存時間的研究

胡國娟

（白銀市白銀區獸醫局，甘肅 白銀 793900）

目前，規?；庇龍鼍捎萌斯な诰姆绞竭M行配種，更加高效、快捷。大型養殖場都建立了自給的公豬站，提供給繁育場用于配種。精液在采集、檢測、稀釋、分裝、保存、運輸過程等，因為操作不合理，而降低精液品質。因此，提高養豬產業鏈上各個環節顯得尤為重要。

研究發現，反映精液品質的因素主要有精子活力和保存時間兩個方面，而提高精子活力和保存時間也受到了眾多因素的影響。研究人員普遍認為公豬的遺傳因素、年齡、日糧、環境、管理及疾病等因素是影響公豬精液品質好壞的重要因素[1]。本文通過對精液的采集、稱量、稀釋、檢測精子活力和密度以及封裝保存的方法，搜集了有關稀釋度、采精頻率、保存溫度等相關因素的數據，對比分析了大白豬精子活力和保存時間的影響，為建立最佳的精子保存方法提供參考。

1 影響精液品質的因素

1.1 稀釋度

人工授精采取的精液不會立刻投入使用，考慮到受精概率，稀釋后的精液一方面可以防止浪費，另一方面也有助于提高母豬受孕率。不稀釋的精液，因為在精液中副性腺分泌物的濃度高，加入稀釋液后副性腺分泌物得到稀釋，因而鞏固了原生質膜，同時稀釋液還供給精子充分的營養物質，提供緩沖劑，保持精液適當的pH值，為較長期保存和長途運輸提供了便利[2]。

精液是通過一定量的稀釋粉與蒸餾水配比后使用，稀釋粉的品質也會對精液產生影響。經過一定比例稀釋后，可以使每次采取的精液發揮最大效用，不僅可以用于多頭母豬的配種，也可以降低種豬淘汰率。

1.2 采精頻率

小公豬訓練成功后，每隔5 d采精一次，成年公豬每隔2 d即可采精。精子從精原干細胞到生成具有受精能力的成熟精子大約需要42 d才能完成，采精頻率過高，其品質差、密度小、活力低；采精頻率過低，精子會在附睪內大量積壓，使得采集的精液精子活力較差，畸形率高，同時精子產生的大量活性氧（ROS）與精子質膜發生脂質過氧化反應，造成精子質膜損傷，精子活率下降，不適合配種[3]。

經過對比研究發現，采精頻率在一定范圍限度內時，對種豬的影響最小，淘汰率也最低，精液品質也相對較好。采精次數太少，會導致精液在附睪中積壓過多，影響精子質量；同時，采精次數過多不僅會影響種豬性欲，也會由于附睪產精子供應不足，采集的精液大多為精清。

1.3 保存方法

截至目前，將豬精液常溫保存3d以上而保持良好受精率的稀釋液配方尚未取較好的結果[4]。研究發現，豬精液最適合常溫保存，在15～25℃ 的溫度下，由于微生物生長迅速而影響精液質量，使得精液的保存時間和成活率都不高[5]。當精子處于休眠狀態時，活力較穩定，從而可以延長保存時間。

1.4 其他因素

本實驗全部采用3～4月份1～2歲的大白豬，因此不考慮種公豬品種以及年齡、季節的影響。不同品種的種公豬其精液密度會因其遺傳特性有所差異，而種公豬的精液密度與總產仔數、初生窩重、窩產活子數有很強的正相關關系[6]。對于不同使用年限的公豬，采集的精液質量也是不同的。剛開始進行馴化、誘情的小公豬不僅采精量少，而且精液質量也相對較差。一般來講，投入生產1～2年左右的種公豬生產的精液品質是最好的。達到一定年限，將會按照種公豬淘汰規則定期淘汰不能繼續生產的種公豬。

嚴格執行操作流程，保持干凈無菌的環境，可以有效地避免精液污染。因此公豬站的建立也是按照SPF 標準建立的。

公豬的飼養環境條件要求很高，濕度不宜太大，一般控制在65%左右。公豬對于熱的應激遠遠大于冷應激；溫度范圍在18～22 ℃ 可以使公豬感到舒適。公豬舍在冬天溫度應該在15 ℃以上，夏天在30 ℃ 以內，超過或低于相應限度均會影響公豬的誘情，降低公豬性欲，從而影響精液質量。

2 材料與方法

2.1 材料

2.1.1 精液的采集 試驗豬來自于白銀區武川鄉李家豬場1～2歲大白種公豬。一般采用徒手采精法，將經過馴化的公豬擠出尿液后引至假母臺，通過母豬尿液或公豬精液對其誘情，引發公豬性欲，待公豬陰莖呈螺旋狀抽動，用手卡在陰莖頭部，然后用保溫杯接取精液即可。此過程必須保證采精環境和工具經過消毒滅菌。然后將比較濃稠的部分收集保存，經過過濾處理后保存于保溫杯中，放入實驗室進行檢測。盡量選擇色澤光鮮，氣味正常，活力達到 80%以上的精液進行對比研究。不同的采精技術對結果有影響，因此只選擇同一采精員采集的精液作為實驗材料。

2.1.2 儀器設備 可調精液保存箱、恒溫水浴鍋、電子顯微鏡（400倍）、37 ℃ 保溫板、精液封裝機、離心管、恒溫磁力加熱攪拌器

2.2 方法

2.2.1 不同稀釋度對精子活力和保存時間的影響 按每500 g稀釋粉與1 000 ml蒸餾水的比例配置成稀釋液，放置在攪拌器上攪拌15 min后，靜置15 min，二次攪拌15 min后再靜置15 min，然后與原精混合。

用離心管將靜置后的稀釋液與原精按1:1、1:3、1:6、1:9、1:12的比例混合，每日靜置于37℃的保溫板上分別鏡檢一次（鏡檢后存于可調精液保存箱中，每次鏡檢前均需在恒溫水浴鍋中加熱），根據鏡檢結果計算精子活力，記錄活力大小，觀察是否有死精已經精液的粘連程度，判斷精子畸形率。

精子的活力是指原精液在37℃ 下呈直線運動的精子占全部精子總數的百分率[7]。因此，鏡檢時需要將精液放在保溫板上，使精液溫度達到37 ℃。

2.2.2 采精頻率對精子活力的影響 白銀區武川鄉李家豬場存欄種豬有35頭，可以采精的種豬有19頭，在達到采精標準的種豬中隨機抽取9頭，分別觀察記錄一個月內正常采精次數下采精量的多少，檢測精子活力大小，記錄對應耳牌號、采精日期、采精量、活力比、密度、采精員。對采精量、活力比、密度求均值進行對比。凡能參加人工授精采精的公豬，每3 d采精1次，完全能滿足周邊母豬配種的需要[8]。在精液需求量不是過多的情況下，采精次數應該保持在一定限度內。

2.2.3 不同常溫保存方法對精子活力的影響 精液保存技術通過降低或抑制精子的新陳代謝強度從而達到延長精子在體外存活時間的目的[9]。將配制好的同一種豬同比例精液（本實驗中用1:9）等量分成6份置于離心管中，放在 37 ℃ 保溫板上，將6份精液分次放入可調精液保存箱中儲存1 h ，溫度分別調為15 ℃、17 ℃、19 ℃、21 ℃、23 ℃、25 ℃，連續觀察5 d，記錄觀察精子活力變化。

3 結果與分析

3.1 不同稀釋度與精子活力和保存時間的關系

不同比例稀釋液下精子活力變化差異顯著，也間接影響其畸形率，表1為不同稀釋度下精子活力大小，畸形變化和保存時間的關系對比。從表1可以看出在1:1、1:3、1:6條件下，第五天時精子基本失去活力。第四天時通過精子的粘連程度來看，此時精子畸形率最高，不宜使用。而在1：9和1:12條件下，精子保持較高活力狀態的保存時間可以達到第五天且畸形率低。就對比結果看，精子在1:9條件下品質最佳。

表1 不同稀釋度與精子活力和保存時間的關系

表2 采精頻率與精子活力的關系

3.2 采精頻率與精子活力的關系

針對所選種豬，將采精量、活力比以及密度求均值后進行比較。表2為同一品系大白豬在4月份不同采精次數采精量均值和活力比均值的對比。

從表2可以看出采精次數在5～6次的種豬采精量相對普遍較高，且活力比也較為穩定。就對比結果來看，一頭種豬一個月內的采精次數需在5～6次，過少或過多的采精頻率均會影響精子活力，降低精液品質。

3.3 不同保存溫度與精子活力的關系

為制作更高品質的精液，將溫度范圍精確到單個溫度值波動范圍內。表3連續觀察記錄了不同溫度下精子活力大小的變化關系。

表3 不同保存溫度與精子活力的關系

從表3可以看出，精液儲存在略低的溫度下可以延長精子的存活期，而在17 ℃ 下精子活力最為穩定，基本處于休眠狀態，在植入母豬子宮內時由于溫差受到的應激反應最低。因此，可以選用17 ℃ 精液保存箱保存，以提高精液質量。

4 總結

影響精液質量的因素還有很多，除了上述的公豬年齡、季節、稀釋液對精液質量的影響外，影響精液質量的因素還有飼養管理、營養水平、采精操作、保存運輸等[10]。綜合考慮影響精液品質的不同因素，能夠大范圍影響精液品質的因素主要有配比稀釋液的濃度、月均每頭豬的采精頻率和保存時間及溫度的控制。

一是原精液與稀釋液的配制比例應該控制在1:9左右，可以有效維持精子活力，降低畸形率。二是每頭可正常生產的大白豬每月采精頻率應控制在5～6次，可以維持公豬良好的生產狀態，延長使用期限。三是精液保存溫度應控制在17℃，盡量保證隨產隨用，減少儲精積壓，保證精液活力。四是建立與現代人工受精技術相匹配的SPF公豬站。SPF 公豬站的建立、精液采集的自動化、更加完善的精液評估、精液分裝方便安全、自動輸精和子宮深部輸精等技術在生產中的應用，使人工授精技術在生產中的應用逐步提高和完善[11]。