紫景天黃酮對實驗性牙周炎大鼠血清中IL-6、IL-18表達的影響

王歡歡,劉 新*,孔晨飛,王 偉，張殿文

(1.吉林大學中日聯誼醫院 a.口腔科;b.科研中心,吉林 長春130033；2.吉林省中醫藥科學院)

牙周炎是發生在牙周組織的慢性炎癥疾病，病因常為菌斑等多種因素，常出現如深牙周袋、牙槽骨破壞等臨床表現，長期發展會造成牙松動、失牙，對人們的心理生理具有極大的影響[1]。IL-6是一種生物功能十分復雜的炎性因子，其來源廣泛，可作用于機體各種靶細胞[2]，牙周炎時，IL-6促進成骨細胞產生破骨細胞分化因子從而加速破骨細胞增殖，使牙槽骨破壞加重；此外IL-6還可作用于牙周膜細胞，降低牙周膜修復與再生能力，致使牙周組織發生病理改變[3]。IL-18屬IL-1細胞因子家族，由單核/巨噬、Th1細胞等分泌,可造成牙周的炎性損傷[4]。本實驗采用ELISA法檢測牙周炎大鼠紫景天黃酮治療前后血清內IL-6、IL-18的水平，報道如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

28只6-8周的SPF級Wistar大鼠(吉林大學動物實驗研究所)，每只體重180-220g，雌、雄大鼠分籠常規喂養、飲水2周。

1.2 實驗試劑、儀器

ELISA試劑盒(RnD)，牙齦卟啉單胞菌(吉林大學病原生物學系提供)，1%濃度紫景天黃酮凝膠(吉林省中醫藥科學院提供)，磨牙機(吉林大學口腔醫學院提供)，多功能酶標儀(加拿大BioTek公司)

1.3 大鼠牙周炎模型建立與分組

2周后，從所有大鼠中隨機取出8只健康大鼠作為正常對照組，不作特殊處理，繼續正常喂養、飲水。剩余20只大鼠按參考文獻[5]采用帶牙齦卟啉單胞菌的絲線結扎并將其包埋于大鼠后磨牙牙頸部的齦溝內，可降低其脫落率，加強局部持續刺激。4周后，有兩只大鼠因絲線結扎脫落而被淘汰，剩余大鼠隨機處死兩只做病理學觀察，鏡下可見牙齦中炎細胞彌漫浸潤，出現微小膿腫；可見深牙周袋形成；骨小梁結構紊亂，牙槽嵴頂出現破壞。臨床可見牙頸部菌斑堆積，牙齦色鮮紅、質脆、出血，牙周袋膿液溢出，出現重度牙周炎癥狀，證明大鼠牙周炎模型建立成功。將建模完成的16只牙周炎大鼠隨機分成模型對照組(n=8)和治療組(n=8)。治療組大鼠牙周袋內注入1%紫景天黃酮凝膠劑，每日兩次，每次0.5 ml,連續上藥2周。

1.4 血清樣本采集

在三組大鼠腹部注射100 g/L水合氯醛(0.3%/kg)的麻醉劑，腹主動脈取血5 ml置于真空采血管中，分離上層血清,于-80℃冰箱中凍存。

1.5 大鼠血清IL-6、IL-18的表達量檢測

取各組凍存的血清樣本，按ELISA試劑盒操作步驟檢測IL-6、IL-18在血清中的表達量，將反應板置于掃描儀中測得光密度值(OD值)。

1.6 統計學處理

2 結果

2.1 血清中IL-6的表達水平

由圖1結果可見，模型組大鼠IL-6為147.02±12.87 pg/ml顯著高于未做任何處理的正常組的表達量100.46±11.26 pg/ml(P<0.01)；與模型組相比，治療組大鼠使用紫景天黃酮凝膠牙周袋內用藥一段時間后IL-6的表達量為101.93±10.11 pg/ml(P<0.01)，有明顯降低。

2.2 血清中IL-18的表達水平

由圖2結果可見，正常組與模型組大鼠血清中IL-18表達量分別為93.23±28.56 pg/ml和190.74±19.74 pg/ml，模型組其表達量增高明顯(P<0.05)；與模型組相比，治療組IL-18表達量為103.34±10.83 pg/ml，表明紫景天黃酮凝膠具有明顯的治療作用，可降低牙周炎大鼠血清中IL-18的表達(P<0.05)。

圖1 紫景天黃酮凝膠對大鼠血清中IL-6表達量的影響

圖2 紫景天黃酮凝膠對大鼠血清中IL-18表達量的影響

3 討論

牙周炎是我們在臨床上常見的慢性感染性疾病，嚴重時可造成牙齒的松動、移位甚至脫落，其不僅可造成局部牙周組織破壞[6]，并且有研究報道牙周炎時局部分泌的一些炎性介質可經血液等途徑引起內分泌、呼吸、心腦血管等機體各系統疾病，具有嚴重危害[7-9]。IL-6、IL-18通過機體組織與免疫細胞之間的相互作用來調節牙周組織的病理生理過程。IL-6是一種具有多種生物學活性的炎癥因子，可調節宿主對細菌微生物感染的反應[10]。IL-6還可誘導多種炎性介質的產生如基質金屬蛋白酶-1、組織蛋白酶L等，加重牙周病變[11]。據文獻[12]報道，牙周病時，機體免疫應答的核心是維持Th1/Th2的相對穩定，IL-18通過干預Th1和Th2分化，破壞其平衡狀態，從而使牙周組織發生破壞，加速牙周病進展。牙周炎的治療一直是國內外醫學研究的熱點，目前牙周炎的治療主要為牙周袋內局部用藥，即將藥物放置在牙周袋內[13]，其優點在于袋內含量明顯高于最小抑制濃度(MIC)，并可緩慢作用，維持時間較長。臨床上常用的牙周炎局部治療藥物有抗生素類、免疫調節劑類、中藥制劑等[14]，抗生素類藥物長期使用易產生耐藥性且毒性作用較大[15]。紫景天是生長在長白山的一種野生植物，具有消炎止痛、收斂止血、調節機體的免疫功能、恢復蛋白質代謝障礙的功效，其中所含的黃酮類元素如山柰素有較好的抑菌作用[16，17]。用其制成的紫景天黃酮凝膠為純中藥制劑，對機體毒性作用小，刺激性小，可抑制細胞分泌IL-6、IL-18等介質，對牙周炎有較好的治療效果[18,19]。

本實驗應用紫景天黃酮凝膠劑可明顯抑制牙周炎大鼠血清中IL-6、IL-18的表達，并且可調節大鼠體內的免疫反應，促使牙周病變恢復到正常，但牙周炎為多因子參與并相互作用而發生的，其余致炎、抑炎因子對牙周病的影響有待后期進行研究。