抗凝血酶III（AT III）測定試劑盒在Sysmex CS5100的性能驗證

陳德祥，李程程

（1.大方縣中醫醫院 檢驗科，貴州 畢節 551600；2.貴州醫科大學附屬醫院 產前診斷中心，貴州 貴陽 550001）

0 引言

抗凝血酶III（Antithrombin III，AT III）由肝細胞分泌產生，是機體中主要的抗凝血因子，監測抗凝血酶III的水平在臨床上有著極為重要的意義。根據ISO15189和美國《臨床實驗室改進修正法案》（CLIA’88）的規定，需要在使用新診斷試劑盒前對其各項性能指標進行逐一驗證[1]。故本試驗將對Sysmex抗凝血酶III測定試劑盒在我院Sysmex CS5100的性能指標進行驗證，以判斷是否滿足試劑說明書及相關法規的要求。

1 對象與方法

1.1 對象

根據WS/T406-2012[2]和CLSI EP文件制定性能驗證方案。試劑與儀器:Sysmex抗凝血酶III測定試劑盒、Sysmex CS5100。

1.2 方法

（1）最低檢測限測定:采用同一批號試劑，重復測定接近零濃度樣本10次，計算變異系數（CV）值，以CV不大于10%為判斷標準。

（2）精密度測定:參考CLSI EP5-A2文件[3]和WS/T406-2012文件要求，批內精密度測定采用同一批產品，測定兩個濃度水平的血漿標本，要求其中一個標本檢測結果在參考值范圍，而另一個標本檢測結果為異常值。每個標本連續重復測定11次，計算批內精密度CV，以正常水平不高于6%，異常水平不高于12%作為判斷標準；批間精密度測定采用同一批產品，測定兩個濃度水平的血漿樣本，連續測定20天，每天測一次，計算批間變異系數CV，以正常水平不高于9%，異常水平不高于15%作為判斷標準。

（3）正確度相對偏差:取10份參考區間內的標本，每個測2次，計算20次以上檢測結果的均值，以通過ISO 15189實驗室的測定均值為標準，計算偏差，以不高于10%作為判斷標準。

（4）線性范圍:選取一份接近預期上限的高濃度血漿（H），分別按100%、80%、60%、40%、20%和10%的比例進行稀釋，每個稀釋度重復測定2次，將實測值與理論值作比較，驗證線性范圍。以試劑說明書規定的R＞0.975，a=1±0.05為判斷標準。

（5）參考區間:參考NCCLS C28-A2文件[4]，選擇20個能夠代表實驗室的健康總體的樣本進行測試，20個參考個體的檢測值在驗證參考區間之外的樣本應不超過1例。

1.3 數據分析

應用Microsoft 2013及SPSS 20.0軟件進行統計學分析。采用K-S正態分布檢驗來檢查數據正態性，以P＞0.05表示數據呈正態分布，正態分布資料以（）表示。相關性分析采用Pearson相關分析，P＜0.05表示相關具有統計學意義。線性回歸采用簡單線性回歸分析，P＜0.05表示回歸具有統計學意義。

2 結果

2.1 最低檢測限測定

重復檢測接近零濃度的樣本10次，結果分別為16%、14%、14.8%、14.9%、14.1%、14.7%、14.8%、13.7%、15.6%、14.5%，CV=4.78%，CV ≤10%，符合說明書規定，驗證通過。

2.2 精密度測定

結果如表1所示，批內精密度測定兩個濃度水平的CV分別為0.44%、0.89%，均分別小于6%和12%；批間精密度兩個濃度水平的CV分別為為4.34%、6.14%，均分別小于9%和15%。以上結果說明精密度驗證通過。

表1 精密度的測定

2.3 正確度相對偏差測定

如表2所示，以比對實驗室結果作為標準，得出的相對偏差小于規定值10%，驗證通過。

2.4 線性范圍測定

如表3所示，在7.7-96.25%區間內，獲得線性回歸方程y=0.9585x+1.1552，相關系數r=0.9985，a=0.9585，均符合試劑說明書規定的r＞0.975，a=1±0.05。

2.5 參考區間

表2 正確度相對偏差測定

表3 線性范圍驗證

如表4所示，超出參考區間的樣本數為1例（參考范圍:75-125%），符合說明書規定，驗證通過。

表4 參考區間驗證

3 討論

檢測結果的準確性和可靠性是對所有臨床檢驗實驗室的基本要求，也是所有臨床檢驗實驗室所必須重視的。為了獲得準確和可靠的檢驗結果，檢驗科在引入新的檢測試劑時，即使試劑廠商已提供了符合國家標準的性能檢測指標，也要在實驗室對試劑進行性能驗證[5]。

本試驗對我檢驗科新引入的Sysmex AT III進行最低檢測限、精密度、正確度、線性范圍及參考區間進行驗證，以判斷該試劑是否滿足要求。結果表明，該檢測試劑盒各項性能指標均符合產品說明書和行業標準的相關要求。說明Sysmex AT III檢測試劑在Sysmex CS5100全自動凝血分析儀上表現出較好的性能狀態，能滿足醫院臨床需求。