揭秘P3實驗室如何“手撕病毒”

工作人員在制備用于新冠肺炎核酸檢測的試劑。■ 資料圖

P3實驗室是廣東省第二人民醫院“手撕病毒”的秘密武器之一，每天，有400多份新冠肺炎核酸檢測均在這里開展。病毒究竟在P3實驗室是怎樣被“揪出來”的？下面就讓筆者帶您一同揭開該院P3實驗室的神秘面紗。

“這里是與病毒‘零距離接觸的地方，整個實驗室完全密封，室內處于負壓狀態，我們喜歡用‘三流來形容它，即人流、物流、氣流的單向流動，確保在里面的污染物不會泄漏到外面而造成污染。”廣東省第二人民醫院P3實驗室主任林劍國說。

“這里”，指的就是P3實驗室。每天，廣東省第二人民醫院400多份新冠肺炎核酸檢測在這里開展。作為全國首家省級應急醫院，廣東省第二人民醫院擁有WHO國際應急醫療隊，有著與病毒戰斗的豐富經驗。而P3實驗室，就是該院“手撕病毒”的秘密武器之一。

1 前世今生

P3實驗室是生物安全防護三級實驗室的簡稱，P是Protection的縮寫。整個實驗室完全密封，室內處于負壓狀態，從而使其內部氣體不會泄漏到外面而造成污染，也就是“氣流”的單向流動。

根據微生物及其毒素的危害程度不同，生物安全防護實驗室分為4級：一級最低，四級最高。一級實驗室適用于對健康成年人無致病作用的微生物;二級適用于對人和環境有中等潛在危害的微生物;三級適用于主要通過呼吸途徑使人傳染上嚴重甚至是致死疾病的致病微生物或其毒素;四級適用于對人體具有高度危險性，通過氣溶膠途徑傳播或傳播途徑不明、尚無有效疫苗或治療方法的致病微生物或其毒素。

廣東省第二人民醫院新冠病毒核酸檢測就是在P3實驗室開展的。這一P3實驗室的口號是3P，平戰結合（Peacetime war），警鐘長鳴（Precaution），與時俱進（Progression）。平戰結合：平時以科研為主，定期進行應急演練，一旦有疫情發生，立即進入應急工作狀態。警鐘長鳴：時刻保持清醒頭腦，密切注意全球及國內感染性疾病研究動向，做到防患于未然。與時俱進：及時跟進國際新知識、新技術、新設備，以國際視野打造實驗室。

2 抽絲剝繭，去偽存真

核酸檢測是確診新冠肺炎的“金標準”，而檢測流程中的每一個環節都是精細活，容不得半點馬虎。在操作中，實驗員面對眼前的樣本，需要“一個一個揭開蓋子加樣和核酸提取”，這無疑是與病毒的正面交鋒。

那么，P3實驗室的實驗員是如何與病毒“過招”的？據介紹，實驗室內的檢測流程可分為5個步驟：樣本進入“傳遞窗”——滅活處理——開蓋加樣和核心提取——擴增反應判斷結果——高壓滅菌。

第一步是樣本進入實驗室。采集的檢測樣本在進入P3實驗室前，得先進入一個特殊的窗口——“傳遞窗”，也叫作空氣鎖。它有不能同時打開的雙重門，保證傳遞樣本時帶進去的空氣被隔離在雙重門中，使實驗室外的環境不受污染。樣本將在這里開啟它在實驗室中短暫的一生。

第二步是檢測前的滅活處理。樣本將在水浴箱經半小時56℃高溫滅活，使病毒蛋白不再有生理活性，失去感染、致病和繁殖能力。這會讓檢測時相對安全，但病毒蛋白的基因序列并沒有受到影響。

第三步是檢測的核心環節——開蓋加樣和核酸提取。

該院檢驗醫學部副主任技師胡亮杉是進入P3負壓實驗室完成設備調試、程序設定、試劑試用等前期準備工作的第一人。“在標本處理間，實驗員拿到滅活后的樣本時，第一個動作就是振蕩，盡量讓拭子上的病毒洗脫在培養基溶液中，再靜置5分鐘沉淀。接下來是開蓋加樣，必須人工操作，且需要兩個人高度配合才能完成。一人擰開樣本罐蓋子，另一人拿著微量移液器在樣本罐中吸取微量溶液，放到另一個提取管里，再擰上管蓋。”她介紹，就這樣，400多份樣本要打開瓶蓋吸取轉移400多次，每一次都是實驗員與病毒面對面的“開撕”。

人工核酸提取的步驟更為復雜，考驗著實驗員的耐心與謹慎。“核酸提取可以使用儀器輔助，但由于比對需要，往往要加以人工操作，需要反復進行離心、加試劑、洗滌等10多個步驟。其中，需要打開管蓋的操作就達7次以上，完成一例人工核酸提取要50分鐘左右。”胡亮杉說。

第四步是判斷結果。提取的核酸送到核酸檢測室內，就要上儀器了。實驗員將提取的核酸加入到擴增試劑中，通過熒光PCR儀進行RT-PCR反應，用時約110分鐘，就可分析判斷結果為陰性或陽性了。

最后是污染物的高壓滅菌處理。實驗過程產生的污染物通過高壓滅菌后，按普通醫療垃圾處理。

在P3實驗室，任何一個環節出現問題均可能導致“假陰性”或“假陽性”。為保障檢測質量，檢測結果將經歷重重比對與復核。

據介紹，檢測質量的保障措施在檢測前就已經開始了。樣本采集的醫務人員必須經過嚴格培訓和考核才能上崗，樣本質量與采集技術密切相關，每一幀動作流程都必須按規定進行。樣本采集完后的護送工作均需按照嚴密程序，由專人專道配送到實驗室。

在檢測過程中，實驗員謹慎對待每一次測試，不錯過任何一個可疑樣本。針對可疑樣本，將選用不同試劑復核確定，防止“假陰性”出現;同時，每進行一批實驗，均會隨機插入3個以上空白對照，針對陽性樣本會開展病毒基因的測序比對，以防止“假陽性”出現。

檢測后，實驗室將定期隨機抽取檢測后的樣本送第三方實驗室檢測，對數據對比分析，保障檢測的準確性。