乳腺癌HER-2、FISH分子病理檢測技術(shù)及臨床意義

李紅芬 湯由之 張煒明 李霄

【摘 要】 ?目的 ： 探討乳腺癌HER-2、FISH分子病理檢測技術(shù)及臨床意義。方法 ： 選取江蘇省人民醫(yī)院病理科2017年8月份分析的100個乳腺癌HER-2陽性蠟塊為研究對象，分別采用免疫組化技術(shù)（IHC）和熒光原位雜交技術(shù)（FISH）對蠟塊標(biāo)本中的HER-2基因擴(kuò)增以及HER-2蛋白表達(dá)進(jìn)行比對分析。結(jié)果 ： FISH檢HER-2基因擴(kuò)增陽性30例（30%），IHC檢測蛋白表達(dá)（-～+）80例，HER-2蛋白表達(dá)（++）4例，HER-2蛋白表達(dá)（+++）8例。結(jié)論 ： IHC檢測HER-2蛋白表達(dá)（++～+++）與FISH檢測HER-2基因的擴(kuò)增具有很高的一致性。乳腺癌HER-2 FISH分子病理檢測技術(shù)對乳腺癌診斷及分型、發(fā)生、發(fā)展，對于IHC（++～+++）者需要進(jìn)一步進(jìn)行FISH檢測，提高檢測的準(zhǔn)確性。

【關(guān)鍵詞】 ?乳腺癌;HER-2;FISH分子病理檢測技術(shù)

人表皮生長因子受體2（HER-2）作為一種診斷與預(yù)測性標(biāo)記在乳腺癌標(biāo)本中扮演著核心角色。20%～35%的浸潤性乳腺癌存在HER-2基因的擴(kuò)增及蛋白的高表達(dá)。HER-2基因（又名HER-2/neu，c-erbB）位與17q12，是表皮生長因子受體（HER：HER-1～4）家族成員之一，（HER）家族在細(xì)胞生理過程中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。FISH是檢測HER-2基因狀態(tài)的金標(biāo)準(zhǔn)[1]。本研究主要探討乳腺癌HER-2、FISH分子病理檢測技術(shù)及臨床意義，匯報如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取江蘇省人民醫(yī)院病理科2017年8月份確診為乳腺癌的患者100例為研究對象，年齡25～69歲，平均年齡（49.26±10.34）歲;病理類型：浸潤性小葉癌7例，導(dǎo)管內(nèi)原位癌13例，髓樣乳腺癌8例，浸潤性導(dǎo)管癌63例，粘液腺癌4例，小葉原位癌5例;腫瘤平均直徑為（3.65±0.51）cm;組織學(xué)分級：1級患者為35例，2～3級患者為65例。所有患者的標(biāo)本在離體后60min內(nèi)均需要進(jìn)行10%甲醛固定石蠟包埋處理，每一個切片的厚度大致控制在3～4μm。

1.2 方法

石蠟標(biāo)本切片操作步驟及注意事項(xiàng)：1）切片前分別清潔切片機(jī)、毛刷、鑷子。2）攤片儀換液后打開開關(guān)調(diào)至45℃。3）給切片機(jī)換新刀片。4）蠟塊冷凍5min。5）每個蠟塊切4張4μm防脫切片備用，每個蠟塊切1張4μm切片染HE。

石蠟FISH檢測實(shí)驗(yàn)流程：1）烤片。切好的片子于70℃培養(yǎng)箱烤片1h以上;2）脫蠟。烤片后立即置二甲苯中，室溫，二甲苯3次，每次10min;3）室溫，無水乙醇2次，每次5min;4） 室溫。85%乙醇、70%乙醇各3min;5）玻片沖水中3min，取出。6）95℃以上煮片20min。7）玻片沖水中2～3min，取出。8）胃酶消化，37℃，2.5mg/mL，胃酶工作液處理10min，可根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行調(diào)整;9）室溫下將玻片置于2xssc溶液中漂洗1次，每次5min;10）室溫下將玻片置于2xSSC溶液中漂洗1次，每次5min;11）將玻片依次置于70%，85 %，100%乙醇中各3min脫水，自然干燥玻片;12）按照FISH操作步驟進(jìn)行FISH實(shí)驗(yàn);13）變性：83℃（根據(jù)各實(shí)驗(yàn)室實(shí)際條件決定），10min;14）雜交：42℃濕盒暗處孵育過夜;15）70℃，0.4xssc 2min;16）室溫，2xssc 2min;17）室溫，70%乙醇溶液3min;18）暗處自然干燥玻片;19）室溫，將15μL DAPI復(fù)染劑滴加于玻片雜交區(qū)域，立即蓋上蓋玻片（DAPI自冰箱取出平衡到室溫后輕彈混勻）;20）暗處放置10～20min，在熒光顯微鏡下選用合適的濾片組觀察玻片。

FISH操作步驟：1）探針準(zhǔn)備;雜交使用的探針混合物配比請參照產(chǎn)品說明書配置;2）將10μL探針混合物滴加于玻片雜交區(qū)域，立即加蓋玻片，用橡皮膠封邊（注意避免氣泡）。

2 結(jié)果

2.1 兩種方法檢測情況

FISH檢HER-2基因擴(kuò)增陽性30例（30%），IHC檢測蛋白表達(dá)（-～+）80例（80%），Her-2的蛋白檢出率明顯高于Her-2基因擴(kuò)增（P<0.05）。

2.2 FISH檢測基因擴(kuò)增與IHC檢測蛋白表達(dá)符合率

兩者的檢測結(jié)果符合率為78.4%，其中兩者在檢測Her-2蛋白表達(dá)陽性（+++）上具有很高的一致性，在表達(dá)陰性（-）上符合率一致，而在檢測可以陽性（++）上差異性很大。

3 討論

分子靶向治療是當(dāng)今腫瘤治療領(lǐng)域的熱點(diǎn)，代表了腫瘤藥物治療的未來發(fā)展方向。FISH檢測技術(shù)通過熒光標(biāo)記的DNA探針與細(xì)胞核內(nèi)的DNA靶序列雜交。在熒光顯微鏡下觀察并分析細(xì)胞核內(nèi)染色體（或染色體片段）上基因狀態(tài)的信息。目前HER2基因狀態(tài)檢測的探針多為同時含有HER2基因和該基因所在的第17號染色體著絲粒（CEP17）序列的雙探針，也可采用僅含有HER2基因的單探針[2]。FISH檢測技術(shù)進(jìn)行在乳腺癌受體家族的診斷中具有重要意義。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，人們認(rèn)識到一些信號傳導(dǎo)通路在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展以及對治療療效的影響中也起著重要的作用。這其中最主要的就是EGFR家族，它是表達(dá)在上皮來源組織細(xì)胞表面的一種受體，家族中共有4位HER1～4，屬于酪氨酸激酶。熒光原位雜交FISH檢測技術(shù)可以精準(zhǔn)的判斷基因擴(kuò)增或缺失，其臨床意義：1）指導(dǎo)乳腺癌赫賽汀的使用-研究表明，對于HER2擴(kuò)增陽性的乳腺患者使用赫賽汀后會得到更好的預(yù)后效果，并且，使用大劑量蒽環(huán)類藥物的治療效果優(yōu)于常規(guī)劑量的治療效果[3]。2）指導(dǎo)臨床常規(guī)藥物的運(yùn)用-研究表明HER2/neu基因擴(kuò)增的病人用高劑量的蒽環(huán)類和紫杉醇藥物更有效;3）預(yù)后判斷-HER2/neu基因擴(kuò)增的病人預(yù)后差，存在高復(fù)發(fā)率的危險。4）免疫組化無法判斷是因?yàn)镠ER2/neu基因擴(kuò)增還是由于17號染色體的非整倍性造成的蛋白表達(dá)，而17號染色體的非整倍性擴(kuò)增的患者對于赫賽汀治療效果不明顯;FISH可以解決這個問題。

總之，Her-2蛋白表達(dá)和基因擴(kuò)增對到乳癌有很大的影響，IHC和FISH檢測結(jié)果的一致性較好，可以將IHC作為初篩方法，對于IHC檢測結(jié)果為（+）～（+++）的患者需要進(jìn)一步進(jìn)行FISH檢測，以提高檢測的準(zhǔn)確性。

參考文獻(xiàn)

[1] ?周國江，楊勇，趙子龍， 等.乳腺癌HER-2基因擴(kuò)增與HER-2neu蛋白表達(dá)的一致性及其與臨床病理特征的關(guān)系[J].實(shí)用癌癥雜志，2018，33（05）：728-731.

[2] 要建超.乳腺癌組織中HER-2蛋白表達(dá)和HER-2基因檢測及臨床意義[J].中醫(yī)臨床研究，2018，10（21）：82-85.

[3] 徐娟，涂軍，黃智雄.乳腺癌HER-2基因擴(kuò)增與HER-2neu蛋白表達(dá)的病理研究[J].醫(yī)療裝備，2017，30（15）：61-62.