番茄中異菌脲殘留分析方法的開發

劉曉云 安寶東 高少妮 楊秀麗 萬莉

(山東科建檢測服務有限公司，山東 日照 276800)

1 材料與設備

1.1 基質

番茄，來自日照市東港區南湖鎮沈馬莊村試驗田的對照小區。

1.2 試劑

乙腈，Sigama aldrich公司；水，霍尼韋爾國際公司；NaCl，國藥集團化學試劑有限公司。

1.3 標準品

丙酮中異菌脲，1000 ± 20 mg/L，北京壇墨質檢科技有限公司。

1.4 儀器設備及型號

FA1204C 萬分之一電子天平，YP5002百分之一電子天平，RZ-528G 破壁機，XW-80A 微型旋渦混合儀，KQ-500B 超聲波清洗器，Agilent 1290-Ultivo超高效液相色譜-質譜聯用儀。

2 檢測步驟

2.1 前處理步驟

提取和凈化：

取待測空白番茄樣品，放入破壁機制成勻漿，稱取勻漿試樣5.00±0.10 g于具塞試管中，添加標準物質30 min后（樣品空白不需要添加標準物質），加入50.0 ml 乙腈提取劑，超聲提取15 min，加入適量氯化鈉，渦旋混合30 s，靜置后吸取2 ml 上清液，加入0.10 g 佛洛里硅土，渦旋混合30 s，靜置后取1 ml 上清液，根據實際情況稀釋，取適量稀釋液過0.22 μm 有機微膜，測試。

2.2 儀器測定

（1）儀器：Agilent 1290-Ultivo 超高效液相色譜-質譜聯用儀；（2）色譜柱：Eclipse Plus C18，1.8μL，2.1×50 mm；（3）柱溫：35.0°C；（4）進樣量：2.00μl；（5）流動相預處理：超聲脫氣；（6）流動相A：水；（7）流動相B：乙腈；（8）梯度洗脫條件：流動相A:流動相B=90:10(0.00 min)；50:50(1.00 min)；10:90(2.00 min)；90:10(3.00 min)；90:10(5.00 min)；（9）離子源：AJS-ESI；（10）掃描方式：MRM模式；（11）鞘氣溫度：250°C；（12）鞘氣流速：11.0 L/min；（13）MS2 Heater：65 °C；（14）MS1 Heater：65 °C；（15）噴霧：15.0 psi；（16）MRM質譜條件見表1。

表1 MRM監測條件參數

3 檢測方法確證

3.1 標準曲線和線性

以對照小區的番茄為材料，按照前處理步驟，制備得到空白基質溶液。

分別以乙腈和空白基質溶液為定容介質配制一系列質量濃度為0.005 mg/L、0.010 mg/L、0.020 mg/L、0.050 mg/L、0.100 mg/L 的標準溶液，在確定的方法條件下對標準溶液進行測定，每個濃度采集3 個平行，以5 個濃度的標準溶液繪制1 條標準曲線。

3.2 基質效應考察

分別用純溶劑乙腈和空白基質溶液為定容介質配制一系列質量濃度為0.005 mg/L、0.010 mg/L、0.020 mg/L、0.050 mg/L、0.100 mg/L的標準溶液，分析時以乙腈標準溶液、空白基質標準溶液的順序進行檢測，以考察基質的影響。

基質效應(Matrix Effect)評價標準：對純溶劑與基質配制標準曲線的斜率進行比較，若基質效應ME%的絕對值≥20%，說明基質效應明顯。若基質效應ME%絕對值＜20%，說明基質效應不明顯。

基質效應(ME)按照式（1）進行計算：

式中：ME為基質效應，%；

bA為以純溶劑為定容介質配制的標準曲線斜率；

bB為以空白基質溶液為定容介質配制的標準曲線斜率；

3.3 準確度和精密度試驗

設計1個溶劑空白對照組、l個樣品空白對照組和3個添加水平（0.05 mg/kg、0.20 mg/kg、1.0 mg/kg）。每個添加水平5個重復。對空白對照組與3 個添加水平組共16 個前處理后得到的樣品各采集1針（溶劑空白對照不進行前處理）。

3.4 LOQ

以最小添加濃度作為方法的LOQ，異菌脲在番茄中的LOQ為0.05 mg/kg。

3.5 專屬性

所測空白樣品在被試物出峰區間的信號應小于LOQ 添加水平響應的30%。

4 結果與討論

4.1 標準曲線和線性

在本試驗條件下進行測定，以標準溶液的濃度對響應值（峰面積）進行線性回歸，以乙腈為定容介質配制的標準曲線：y=203887.812674*x+ 851.348676，R2=0.998，r=0.999；以 空白基質溶液為定容介質配制的標準曲線：y=202558.597908*x+ 3487.782117，R2=0.998，r=0.999。

4.2 基質效應

標準曲線由5 個校準點組成（不包括原點），濃度范圍為0.005 mg/L、0.010 mg/L、0.020 mg/L、0.050 mg/L、0.100 mg/L。按照乙腈標準溶液、空白基質標準溶液的順序進行檢測，以標準溶液的濃度對響應值（峰面積）進行線性回歸。

結果表明異菌脲在番茄中檢測基質效應不明顯，基質效應ME的絕對值為0.7%。

4.3 準確度與精密度

空白番茄中三個添加水平0.05 mg/kg、0.20 mg/kg、1.0 mg/kg的平均回收率為84%、96%、85%，相對標準偏差為11%、6%、7%。

4.4 LOQ

以最小添加濃度作為方法的LOQ，異菌脲在番茄中的LOQ為0.05 mg/kg。

4.5 專屬性

所測乙腈、空白基質樣品在異菌脲出峰區間的信號均小于LOQ水平響應的30%。

4.6 檢測方法有效性評價

本驗證試驗建立了番茄異菌脲殘留分析方法，番茄樣品用乙腈提取，佛洛里硅土凈化，采用Agilent 1290-Ultivo 超高效液相色譜-質譜聯用儀測定，采用保留時間（3.120 min）及定性離子對（330.0/245.0和330.0/287.9）定性，采用標準曲線-外標法定量（定量離子對330.0/245.0）。試驗結果滿足《農作物中農藥殘留試驗準則》（NY/T 788-2018）對殘留檢測方法的要求，適合番茄中異菌脲殘留的檢測。